《中国药典》薄层色谱的基本要求剖析

新增薄层色谱鉴别要求
供试品溶液的制备：应尽可能除去干扰，同时方法尽量简便，
首先进行提取、纯化选择，如回流、超声提取方法，溶剂、时间， 酸碱处理，溶剂萃取，柱子纯化等的选择
对照品选择：尽量采用以对照品和对照提取物或对照药材同时进行
对照。当对照品不易获得时，可采用对照提取物或对照药材为对照
薄层板的选择：吸附剂的比较，选硅胶G板还是GF254板
确定供试品取样量、提取和纯化方法、点样量等条件 选择合适的对照物质，确定对照物质用量、 浓度、溶剂、点样量等
中药材薄层色谱鉴别
多来源药材、饮片的色谱行为是 否一致 混淆品的区别 斑点是否重叠
专属性
重复性
验证 耐用性
不同品牌的薄层板或自制薄层板考察 考察至少2~3个品牌或厂家的薄层板，
重现性
不同温度、湿度考察，在5℃~35℃ 考察高低2个温度；在低相对湿度 （RH）15~30%和高相对湿度75~90% 各考察一个相对湿度
供起草用样品的要求
注意
中药材、饮片要求专家鉴定
对于具有多种不同规格的中成药，应收齐全部规格的样品
试验用样品必须采用合格原辅料依法生产的样品，收集的每批 样品均要有该企业的原辅料和成品的自检报告及详细生产工艺
供起草用样品的要求
阴性对照样品
生产单位应尽可能提供
研究单位自制
阴性样品系指按处方除去被测定的药味，按制法制备的 样品，注意应包括所有的辅料和工艺步骤，制中药标准制定技术要求
原则
保证用药安全 科学、先进、规范、适用 促进标准国际化
中药标准制定技术要求
中药标准制定 《国家药品标准工作手册》中药质量标准 研究制定技术要求 方法学验证 中药质量标准方法学验证指导原则 （中国药典2010版一部）
供起草用样品的要求
研究用样品应具有代表性，覆盖面要广， 一般至少收集15批以上样品供研究用； 对于多来源品种，每种收集3~5种；相关信息包括：产地 （如有可能表明野生或家种）、收集地、收集时间、收集人 独家生产的应不少于10批，多家企业生产的应尽量收集 每家企业的样品，5家以上企业生产的应至少收集5~10家 企业生产的样品 样品量除满足起草研究、留样观察外，还应有不少 于3倍检验量的样品供复核用
新增薄层色谱鉴别要求
点样量选择：不同点样量的比较
展开剂选择：对三个以上的展开系统进行考察比较
显色条件选择：日光、紫外光、显色剂 阴性空白试验：以证明其他药味无干扰
耐用性：不同厂牌的薄层板、温度、相对湿度等
注意
（1）使用对照药材应保证药材的主斑点在样品中均有对应斑点（可参 照制法对药材进行前处理），供试品色谱中不能只有对照药材色谱中的 1~2个次要斑点相对应 （2）尽可能采取一个供试液多项多维鉴别使用的薄层色谱方法，达到 节约资源、保护环境、简便实用的目的
正相色谱流动相（展开剂）的广泛适用性



薄层色谱最常用的是以硅胶板为基础固定相的正 相色谱，有多种组合的有机溶剂展开系统可供选 择； 甲苯系统；三氯甲烷系统；己烷系统；正丁醇系 统；乙酸乙酯系统等等。 酸性、碱性、中性。 高极性、中等极性、低极性。
色谱后衍生的专属性

色谱后灵活方便的衍生技术，同一色谱薄层板可 生成可见光谱、紫外光谱、荧光淬灭光谱或荧光 光谱，给出丰富的检测成分的化学类别信息。如 三氯化铝试剂是黄酮类化合物的专属试剂；碘化 铋钾是生物碱类成分的专属试剂；三氯化铁是酚 类成分的专属试剂；醋酐硫酸是三萜类和甾醇类 成分的专属试剂等。硫酸则是许多成分激发产生 荧光的通用试剂，非常方便。
鉴别
显微鉴别 一般理化鉴别 理化鉴别 荧光鉴别 光谱鉴别 鉴别 薄层色谱鉴别 色谱鉴别 液相色谱鉴别 气相色谱鉴别
特征图谱鉴别
中药材薄层色谱鉴别
尽量采用对照品和对照提取物或对照药材同时进行对照
图谱清晰、斑点明显、分离度与重现性符合要求 根据被测物的特性选择合适的固定相、展开剂及显 色方法等色谱条件 色谱条件的优化应对三个以上的展开系统进行考察
中成药薄层色谱鉴别

（1）薄层色谱具有分离与鉴别的特性，并具有直观、承载信 息大、专属性强、快速、经济、操作简便等优点，是中成 药鉴别的首选方法。
（2）新建立的薄层色谱应该图谱清晰，斑点明显，分离 度、专属性、重现性与耐用性符合要求，并需要提供图谱；
（3）应尽量与该药材和饮片的薄层色谱鉴别方法一致，如因其他成分 干扰或制剂的提取方法不同，可增加提取纯化处理或展开剂优化。
《中国药典》薄层色谱的 基本要求
周兰 贵州省食品药品检验所中药（民族药）室 2014年5月
内容

薄层色谱技术在中药标准的优势 《中国药典》薄层色谱的基本要求 薄层色谱应用的影响因素
薄层色谱技术在中药标准的优势

薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部 附录Ⅵ B），系将供试品溶液点于薄层板上， 在展开容器内用展开剂展开，使供试品所 含成分分离，将所得色谱图与对照物按同 法所得的色谱图比较，并可用薄层扫描仪 进行扫描，用于鉴别、检查或含量测定的 方法。
同板多个样品平行比较

成本相对低廉、色谱生成快速、同板可以 同时产生多达16~18个样品色谱，共平行 直观地比较，色彩丰富的图像给人的视觉 冲击远远大于较为“呆板”的轮廓色谱图， 可以迅速地、粗略地，而且颇为有效地评 价样品色谱图像之间的相试程度。
《中国药典》薄层色谱的基本要求
供起草标准用样品的要求 中成药薄层色谱鉴别
（3）注意”过柱“的影响，不同品牌、不同批号的吸附剂吸附能力有的不同
（4）对原方法的验证注意原标准点样量按手铺板制定，现用市售薄层板点 量过大分离度差，点样量可减少
薄层色谱技术在中药标准的优势

薄层色谱独有的特点是分析结果以直观的 彩色图像表达，为其它色谱技术所不能。 而图像给出的多层面的信息是文字难以表 达的，而且丰富多彩的图像可以给分析者 更多的思考判断的空间。
提供直观的彩色图像是薄层色谱独有的特点
离线操作的灵活性


各单元操作既有关联，又相互独立，点样 器材和方法、展开方式、显色试剂选择、 直观比较或扫描比较可根据需要灵活变通。 根据需要操作可以视实际需要和实验室条 件分层次进行和终止，节省分析时间和资 源。 由于是离线操作，所以个人占机时间短。