武汉生物工程学院免疫学实验答案

1、绘中性粒细胞示意图。

按自己的实验报告上画。

2、瑞士染色为什么不能加热干燥

避免加热干燥，否则细胞会因为受热脱水而皱缩，影响吞噬实验现象的观察。

3、非特异性免疫的基本特征是什么

个体出生就已经形成，作用广泛而非针对特定抗原。

4、中性粒细胞吞噬功能检测在临床诊断中有何应用

定量测定细胞吞噬功能，对于研究患者的免疫功能及指导临床具有意义。

5、静脉注射时为什么不能有空气注入

注射时若有空气注入，就会导致血管中有一段空隙，使这段血液无法运输氧气，若是这段血液是通向肺部，则会使机体窒息死掉，影响实验结果。

6、实验动物的正确抓取与固定有何重要意义

正确抓取与固定可以防止实验人员和实验动物免受不必要的伤害，从而获得更加正确可靠地实验结果，更加便于观察。

7、同一种抗原可用哪些途径免疫动物哪些途径免疫原性最强，为什么

途径：静脉注射，腹腔注射，皮下注射，肌肉注射，皮内注射，皮肤划痕，吸入，口服等。其中皮内注射免疫的免疫应答最强，因为抗原在体内滞留时间长，作用时间也长。

8、耳缘静脉注射因注意哪些细节

（1）选静脉较粗而清晰处，剪掉拟采血耳缘不细毛。可以用手指弹兔耳或电灯照射兔耳，使耳部血管充盈，然后用酒精消毒。

（2）注射时不能有空气注入。

（3）采血完毕用干棉球压迫止血。

9、兔台固定要注意什么问题

（1）固定好四肢，防止实验过程中挣脱，影响实验观察，避免人员划伤。（2）头部颈部应充分暴露在外,方便操作。

（3）不能让大耳白兔在固定过程中死亡。

10、遇血管为什么要用钝器分离

用钝器分离是防止气管附近的神经及血管受损，影响实验结果观察。

11、剪颈动脉切口时为什么不能将整个动脉剪断

若剪断血管，血管会收缩，不利于血管的插入。

而且会造成大量出血，影响实验结果的观察。

12、机体抗血清的主要功能是什么

中和作用，活化补体，被动免疫，ADCC，调理作用。

13、抗原抗体特异性结合的化学基础的什么

抗原抗体空间结构互补。

14、环状沉淀操作过程中为什么不能产生气泡或者摇动

操作过程中若是产生气泡或者摇动两液界面处的界面就会不明显，导致不易观察实验现象，甚至产生大量絮状沉淀。

15、环状沉淀长时间静置会导致什么结果

由于液体分子的布朗运动，环状沉淀长时间静置则会使絮状浑浊。

16、直接凝集反应有哪几种各有何用途

分为玻片凝集和试管凝集两类。

玻片凝集常用于细菌的鉴定和ABO血型分型。

试管凝集实验多用于协助临床真多或进行流行病学调查研究。

17、怎样判定试管凝集反应中抗体的效价

通常以产生明显凝集（++）现象的血清最高稀释度作为血清中抗体的效价。

18、直接凝集反应中，抗原抗体加入后为什么要充分混匀

使抗原抗体充分接触，产生特异性反应。

19、ELISA操作中洗涤的目的是什么洗涤不彻底有什么影响

洗涤是洗去游离的酶联复合物。

洗涤不彻底则会使抗原，酶联复合物未被洗涤干净，此时，显色剂仍然会显色，使实验结果造成假阳性。

20、饲养场中的大耳白血清中为什么含有针对豆粕蛋白的特异性抗体

因为饲料的成分中含有豆粕。

1、请设计实验制备针对大肠杆菌的多克隆抗体（实验书P98）

实验名称：制备针对大肠杆菌的多克隆抗体

实验目的：制备针对大肠杆菌的多克隆抗体

实验原理：抗体主要存在体液尤其是血液中，大耳白兔为常用的免疫实验动物。为达到最佳的免疫的效果，采用皮内注射

实验用品：大肠杆菌菌悬液，大耳白兔，注射器，注射器，镊子，酒精棉球，动物解剖台，剪刀，剪毛剪等。

实验步骤：

1，抗原的制备

制备大肠杆菌颗粒性抗原，制备成大肠杆菌菌悬液，60℃水浴1h，再稀释达9亿个/ml,再进行无菌检查

2，免疫动物，

大耳白兔皮内注射大肠杆菌菌悬液，免疫动物，24h后再次加强免疫。

3，上劲动脉采血制备血清

将血液4℃静置过夜或6-8小时，然后高速离心，上清即为抗血清

2、请用一种免疫标记技术检测禽流感病毒感染的细胞（课本P217）

实验名称：荧光素标记的抗血凝素抗体

实验目的：直接荧光法检测禽流感病毒感染的细胞

实验原理：待检标本（固定在玻片上）+荧光素标记的抗血凝素抗体→洗去游离的荧光素标记的抗血凝素抗体→干燥后，荧光显微镜下观察。

实验用品：荧光素，荧光显微镜，样本，玻片，洗脱液，荧光素标记的抗凝血素抗体

实验步骤：

1，固定

把待测细胞固定在玻片上

2，孵育细胞

把荧光素标记的抗血凝素抗体加到待检测样本的细胞涂片上进行孵育细胞

3，洗脱

经抗原抗体反应后，洗去未结合的荧光抗体

4，检测

将待检测标本在荧光显微镜下观察，有荧光的部位即为有流感病毒存在，即为被感染的细胞

3、如何利用E花环实验对T细胞进行计数（实验书P75课本P222）

计数T细胞的方法称E花环形成实验，即取外周血淋巴细胞与绵羊红细胞混合，在一定温度下作用一定时间，使绵羊红细胞与T细胞表面的E受体结合，形成以T细胞为中心，绕有绵羊红细胞的花环样细胞集团。光学显微镜下可见，根据E花环形成细胞的多少即可推测T细胞的总数。

4、单向免疫扩散实验的基本步骤是什么如何利用单向免疫扩散测定某一抗体

的浓度（课本P215）

适当浓度的已知抗体加入融化（45℃）的琼脂中，混匀后浇注于玻璃板，制成凝胶板。隔适当的距离打孔，加入被测可溶性抗原，使其向四周扩散，经一定时间后，生成白色沉淀线。

根据不同的抗体浓度得到不同直径的沉淀线，制作标准曲线，然后根据未知抗体的反应沉淀线直径大小，在标准曲线上计算出抗体浓度

5、肥达氏反应的基本原理和主要用途是什么(课本P213)

基本原理：是直接凝集反应中，细菌和红细胞与相应抗体结合产生细菌凝集和红细胞凝集的现象

主要用途：诊断伤寒病

6、酶联免疫吸附试验中，对标记酶的选择应注意哪些原则

要能与标记的抗原或抗体结合紧密

易洗脱

易检测

7、如何抓取实验动物狗

未经训练用于急性实验的狗性凶恶，能咬人，因此进行实验时第一个步骤就是要绑住狗嘴。驯服的狗绑嘴时可从侧面靠近轻轻抚摸其颈背部皮毛，然后迅速用布带缚住其嘴。方法是用布带迅速兜住狗的下颌，绕到上颌打一个结，再绕回下颌下打第二结，然后将布带引至头后颈项部打第三个结，并多系一个活结（以备麻醉后解脱）。注意捆绑松紧度要适宜（如图），倘若此举不成，应用狗头钳夹住其颈部，将狗按倒在地，再绑其嘴。如实验需要静脉麻醉时，可先使动物麻醉后再移去狗头钳，解去绑嘴带，把动物放在实验台上，然后先固定头部，再固定四肢。