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BE血凝仪的工作原理、使用 和保养
一、血凝仪的工作原理 二、血凝仪的应用 三、BE血凝仪的使用和保养
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一、血凝仪的工作原理
目前开展的血栓/止血成份检测的主要方法有凝固法、 底物显色法、免疫法、乳胶凝集法等。在血栓/止血检验 中最常用的凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时 间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)、凝血酶时间(TT)、 内源凝血因子、外源凝血因子、高分子量肝素、低分子量 肝素、蛋白C、蛋白S等均可用凝固法测量。所以目前半 自动血凝仪基本上都是以凝固法测量为主,而在全自动血 凝仪中也一定有凝固法测量。
比浊法。
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二、D-Dimer的临床意义:
1、快速排除诊断:能在很短的时间内准确地作出深静脉栓塞 ( DVT )、肺栓塞( PE )、弥散性血管内凝血( DIC )的排除诊断, 减少病人身体和经济上的损失。
2、DIC 的监控: DIC 是一种严重的获得性出血综合征包含了复杂的 病理生理过程,死亡率极高。配合实验室检查进行早期诊断,及时诊断是 其治疗成功的关键。 D-dimer 是反应病态过程的核心指标,直接影响治疗 方案。但手工或半自动方法只能提供定性或半定量结果,根本无法判断变 化的程度和过程,常延误病情,造成无法挽救的严重后果。快速的定量方 法既能准确及时作出诊断又能监测整个病态发展过程,及时给予治疗。
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二、术前凝血试验的重要意义:
目的:确定患者是否有止血功能缺陷 (尤其是轻微止血异常)
必要性:检出有出血倾向的患者,尤其 是轻型,亚临床型凝血因子缺乏(先天或后 天)。给予替代或对症治疗,防止术中、术 后出血,术后伤口愈合差。
结论:术前凝血检查具有非常重要的临 床意义,是预防手术出血,保证手术安全, 消除医疗隐患的必要步骤。
c.检查加样针的牢固程度及传感器导线是否有 问题。在主菜单下选择Adjust进入选sensors进 入选择test stability of liquid sensors回车。显示 Needle is dry用清洁板敲打针及传感器联线,如 果显示Needle is dry有变化则敲打的部位有问题。
d.在母板上的LD1灯表示传感器的工作状态。20
(2)透射比浊法:是根据待测样品在凝固过程中吸光度变化
来确定凝固终点的,与散射比浊法不同的是该方法的光路同一般的
比色法一样呈直线安排,来自光源的光线经过处理后变成平行光,
透过待测样品后照射到光电管变成电信号,经过放大后监测处理。
当向样品中加入凝血激活剂后,开始的吸光度非常弱,随着反应管
中纤维蛋白凝ຫໍສະໝຸດ Baidu的形成,标本吸光度也逐渐增强,当凝块完全形成
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三、BE血凝仪的使用和 保养 一、BE血凝仪的使用:
1.开机并全灌注;
2.准备好标本,仅需抗凝剂合适,并且标准离 心就可以。
3.试剂的准备:
PT、APTT、TT、FIB试剂从冰箱取出后使用之 前,均需在15~25℃预温30min,用前轻轻混匀, 不可剧烈摇动。
3.开始实验:
全离人化操作,包括中文报告全自动处理。
后,吸光度趋于恒定。血凝仪可以自动描绘吸光度的变化曲线并设
定其中某一点对应的时间为凝固时间。
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第三代,磁珠法:
磁珠法是根据血浆凝固过程中粘度的变化来测量凝 血功能的。根据仪器对磁珠运动测量原理的不同,又可 分为光电探测法和电磁珠探测法。
(1)光电探测法:在磁珠法中光电探测器的作用 与光学中的不同,它只测量血浆凝固过程中磁珠的运动 规律,与血浆的浊度无关。在磁珠法中的一对电磁铁安 放在测试杯的两端,它们产生恒定的交替磁场使磁珠在 测试杯中摆动,在与磁珠摆动的垂直方向安放一对光电 接收装置,在磁珠摆幅衰减到50%时确定凝固终点。
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光电磁原理是真正意义上的动态法检测,这样避 免了:
1、传统光学法对于标本颜色改变对于实验的影 响,例如:黄疸、脂血、乳糜血;
2、传统磁珠法对于标本粘度改变对于实验的影 响。
现今随着社会发展,人体血液黏度逐渐升高,单 纯的磁珠法已经并非往日的金标准。
德国BE血凝仪就是应用的光电磁原理:以光学法 为基础,磁珠起到了一个信号补偿作用,当血浆粘度 增大后,旋转的磁珠向杯中心靠拢,当测试杯侧壁外 安装的红外反射式光电器件检测不到磁珠运动变化时 表明血浆凝固,即测量结束。
b.检查电缆;
c.检查Thrombolyzer电源或没有开机;
d.市电电压突然过低,应加装宽幅稳压电源。
2.Cuvette出现卡杯子的现象:
a.通过adjust中的motoer,测试个马达系统, 以判断是否为马达问题。
b.检查通道上是否有试剂或血浆所形成的薄膜,
使杯子在传输过程中阻力太大,用潮湿的清洁
(2)电磁探测法:电磁探测法又可称为双磁路磁 珠法,其中一对磁路用于吸引磁珠摆动,另一对磁路利 用磁珠摆动过程中对磁力线的切割所产生的电信号,对 磁珠摆动幅度进行监控,当磁珠摆动幅度衰减到50%确 定凝固终点。
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第四代,光电磁法:
综上所述,前三代的检测原理都是终点法, 即在检测前设置一个检测的终点,一旦达到检 测停止的指标即判断凝血,这受到很多限制, 无论是标本还是实验环境的改变都会引起检测 的失准。第四代的光电磁原理结合了光学法和 磁珠法之优点的第四代原理,测试杯中放有磁 珠,测试时,测试杯下面的永久磁铁旋转,带 动杯中磁珠沿杯壁旋转。测试杯的侧壁外安装 有红外反射式光电器件监视磁珠运动变化。根 据运动力学原理当血浆粘度增大后,旋转的磁 珠将向杯中心靠拢,光电器件检测不到磁珠时 检测结束。
2.肝素水平:特异的抗Xa因子试验,是具备国际标 准化的特异性试验。
3.血小板计数:用来判断任何肝素诱导的血小板减少 症(HIT)
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六、溶栓治疗的监测: 1.纤维蛋白原(FIB); 2.凝血酶时间(TT); 3.纤维蛋白(原)降解产物(FDPs)。 七、DIC的诊断: 1.D-二聚体(D-Dimer); 2.纤维蛋白(原)降解产物(FDPs); 3.抗凝血酶III(AT-III); 4.凝血酶原时间(PT); 5.活化部分凝血活酶时间(APTT); 6.纤维蛋白原含量(FIB)。
3、全自动乳胶增强型免疫比浊法,这是目前最先进的
检测方法,在血凝仪上操作完成。这种方法的优点在于克服
手工乳胶法和ELISA法的局限,不会受到人为因素的影响,
既能快速进行单个标本检测又能方便地进行批量检测,无需
特殊设备在进行常规血凝试验的同时就能完成D-dimer的准
确定量测试。BE全自动血凝仪使用的就是乳胶增强型免疫
7.开机后显示异常报警(出现红屏、Lamp错 误等):
a.可能是由于非法关机造成的; b.电脑的CPU算热有问题; c.电脑有病毒,丢失文件; d.在一号马达处杯子卡住,或者是在测量头处 杯子卡住没有拍出来。
8.加样针在加样时,上下不停的运动,而不进 行采样,而且也不发出报警:
a.试剂或是血浆的液面太高,倒出一点即可; b.调节加样针的“Z”轴位置,使其调高一点; c.传感器与针上的部分可能出现短路或针的套21
棒来回清理通道(用Buffer)。
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3.卤素灯太亮或太暗(Chrolamp too light/too dark)或四个通道间的重复性不好:
a.先用湿润的清洁棒(用Buffer沾湿)清洁检 测位,然后进入adjust中选择motor,分别选择 滤光片405/540nm,检查A/D转换值,并调节相 应的电位器,使四个通道的A/D值为3150左右;
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D-Dimer实验
一、D-Dimer的检测方法:
测量D-dimer 的方法主要有以下几种:
1、手工或半自动操作方法,如乳胶凝集法和免疫渗滤 法。这类方法只能提供定性或半定量结果,结果受人为因素 影响而且无法进行大批量标本检测,因为操作繁琐成本高。
2、酶联免疫吸附试验(ELISA法)灵敏度高特异性强但 耗费人力,操作时间长,不适宜做单个标本和急诊标本。
凝固法中又可分为光学法和磁珠法两类。由于光学 法几乎可涵盖各种检测方法,为了降低仪器制造成本,全 自动血凝仪以光学法居多。但也有少数高级全自动血凝仪 中凝固法测量采用无样品干扰的双磁路磁珠法,而其它测 量采用光学法,并可同时进行检测。
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1.血凝仪的检测原理
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对第二代的传统的光学原理血凝仪容易 受到标本的黄疸、脂血、乳糜血等的影响。
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2.BE血凝仪的整个反应过程可以分为三个阶段:
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一、不稳定期:
也就是标本和实际进行了混匀之后并未完全进行反 应的过程,这个阶段的变化比较大,两条绿线相差比较 大,并逐渐的靠拢。反应曲线(紫线)在两条绿线之间 行走。
二、稳定期:
标本和试剂完全的混匀之后开始进行了化学反应 (整个反应过程完全的处在模拟的人体生理环境下), 两条绿线动态的开闭,但是趋近于一个平台,我们平时 俗称为平台期,这期间未出现明显的凝血,而紫线也相 对稳定的走形。
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第二代,光学法:
光学法血凝仪是根据血浆凝固过程中浊度的变化来测定凝血 功能。根据仪器不同的光学测量原理,又可分为散射比浊法和透射 比浊法两类。(1)散射比浊法:根据待检样品在凝固过程中散射 光的变化来确定检测终点的。在该方法中检测通道的单色光源与光 探测器呈90度直角,当向样品中加入凝血激活剂后,随样品中纤维 蛋白凝块的形成过程,样品的散射光逐步增加,当样品完全凝固以 后,散射光的强度不在变化,通常是把凝固的起始点作为0%,凝固 终点作为100%,把50%作为凝固时间。光探测器接收这一光学的变 化,将其转化为电信号,经过放大再被传送到监测器上进行处理, 描出凝固曲线。
b.是否为卤素灯的问题或是灯电压低;
c.是否为光缆的问题;
d.测量头扁平电缆老化,有虚接的地方,更换 之。
4.白色清洗槽出水不通畅,向上冒水:
a.检查出水口滤膜是否有问题,更换或用10% 19
5.液面感应不灵敏:
a.是否为加样针头上的电缆的问题;
b.是否为Sensor的问题,进入adjust中选择 test sensitivity of liquid sensor,用日历杯装 300μl导电液(生理盐水或Buffer),机器可检 查到液体,如200μl导电液机器无法检查到液体。 如有不符,调节MBC板上电位器P5;
四、试验中可能会出现的问题:
1.实验的重复性不好或不凝结: a.试剂的问题; b.对于FIB实验是否为Kaolin没有充分混匀或是 到出的量过多、使用时间过长导致水分挥发、结 晶析出;
c.抗凝剂的问题。 2.某一项或几项实验的检测值总是偏高或是偏 低:
a.是否是对应实验的试剂问题; b.是否为实验对应的试验参数有变化(若是建 议重新安装试验参数盘)。
对第三代的双磁路磁珠法原理的血凝仪 在现今社会血黏度增高的趋势下也非常容 易受到标本黏度变化的影响。
第四代光电磁原理由此出现。
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第一代,电流法:
即是将待检样品作为电路的一部分,由 于纤维蛋白具有导电性,可利用电流的断 与否来判断纤维蛋白的形成与否,即判断 凝固终点。具体表现为:将两电极插入待 检样品,其中一个电极可以上下运动。当 两个电极都在血浆中的时候,电路是连通 的;当其中一个电极向上运动离开血浆时, 电路时断开的。往血浆中加入激活剂,血 浆中纤维蛋白形成,此时可运动电极向上 运动时,可勾起纤维蛋白丝。由于纤维蛋 白丝是导电的,故此电路仍可连通,此时
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三、抗凝治疗的监测;
四、口服抗凝剂治疗(OAT)的监测:
PT实验是最常用的检测,用于监测由口服抗凝药物 (香豆素/华法令之类)引起的维生素K依赖性因子II、 VII和X功能性水平变化。
血浆凝血酶原时间比率(PTR)1.5-2.0
国际标准化比率(INR)2.0-3.0
五、肝素治疗的监测:
1.APTT:适用于肝素监测,但对不仅仅是肝素引起 的凝血异常同样敏感,如:肝素、OAT重叠治疗或溶栓 治疗。
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二、BE血凝仪的保养: 1.机械保养:定期的润滑加样臂; 2.液路保养:定期的完成特殊洗针的周保养程 序(无须拆卸,仪器自带有此程序); 3.光路保养:使用清洁棒擦拭测量头的光学部 分。
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三、BE血凝仪的常见故障分析及其解决方法:
1.出现“no communication”(无通讯):
a.检查COM口;
三、凝血期:
这时候紫线发生了迅速的变化,也就是出现了反应 的质变,穿透平台期,出现凝血。这时候引入微积分概
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二、血凝仪的应用
一、术前常规检查(出血危险过筛试验): 1.凝血酶原时间测定(PT); 2.活化部分凝血活酶时间测定(APTT); 3.凝血酶时间测定(TT); 4.纤维蛋白原含量测定(FIB); 5.血小板计数(PLT);
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