小鼠骨髓基质细胞使用说明
骨髓基质细胞的培养和保存方法
骨髓基质细胞的培养和保存方法
骨髓基质细胞的培养和保存方法如下：1.培养方法：（1）收集骨髓
样本：从骨髓中采集样本，将其置于含有抗生素和抗真菌药物的培养基中。
（2）细胞培养：将骨髓样本放入培养皿中，加入培养基，放入培养箱中，维持适宜的温度、湿度和氧气浓度，进行细胞培养。
（3）细胞分离：将
培养皿中的细胞进行分离，去除非基质细胞，留下基质细胞。
（4）细胞
传代：将基质细胞进行传代，维持细胞的生长和增殖。
2.保存方法：（1）液氮冷冻：将基质细胞用液氮冷冻保存，可长期保存。
（2）冷冻保存：
将基质细胞用冷冻保存液保存在-80℃的冰箱中，可保存数月至数年。
（3）干燥保存：将基质细胞干燥保存，可保存数年至数十年。
需要注意的是，
保存前应对细胞进行检测，确保其质量和纯度，以免保存后出现问题。
同时，保存时应注意细胞的保存条件和保存时间，以保证其质量和活力。
小鼠骨髓细胞原代培养的步骤
小鼠骨髓细胞原代培养的步骤嘿，朋友们！今天咱来唠唠小鼠骨髓细胞原代培养这档子事儿。
你可别小瞧这小小的骨髓细胞，这里头的门道可不少哩！首先呢，你得准备好一只健康的小鼠。
就像厨师要准备新鲜的食材一样，这小鼠可得精挑细选。
把小鼠麻醉了，然后小心翼翼地把它固定好，可别让它乱动。
接下来，就是关键的一步啦！找到小鼠的骨头，用手术器械精准地把骨头取出来。
这就好比是在挖掘宝藏，得小心谨慎，不能有一点儿马虎。
把骨头弄干净后，用合适的工具把骨头敲碎，就像敲碎一块硬糖一样。
然后呢，把敲碎的骨头放到培养液里。
这培养液就像是细胞的小窝，得让它们舒舒服服地待在里面。
这时候，就需要你耐心地等待啦，就像等待花儿开放一样。
在等待的过程中，你可得时刻关注着，看看细胞们是不是在乖乖地生长。
这可不像种花儿，能直接看到它们长大，得用一些特别的方法去观察。
等细胞们长到一定程度，就得给它们换个更宽敞的地方啦，也就是传代培养。
这就好比是给孩子们换个更大的房间，让他们能更好地成长。
你想想看，这小小的骨髓细胞，从一只小鼠的身体里出来，经过我们的精心培养，就能变成好多好多的细胞。
这多神奇呀！就像魔术师一样，能把一样东西变成好多好多。
培养骨髓细胞可不是一件容易的事儿，需要我们细心、耐心，还得有技巧。
就像骑自行车一样，一开始可能会摔倒，但只要坚持，就能骑得稳稳当当。
在这个过程中，要是有一个步骤没做好，那可能就前功尽弃啦。
所以呀，每一步都得认真对待，不能有丝毫的马虎。
总之呢，小鼠骨髓细胞原代培养可真是个有趣又有挑战性的事儿。
要是你也感兴趣，那就赶紧试试吧，说不定你也能成为这方面的专家呢！。
不同途径骨髓基质干细胞移植治疗小鼠糖尿病效果
不同途径骨髓基质干细胞移植治疗小鼠糖尿病效果贾跃伟;刘晓萍;于业军;郭菲菲【期刊名称】《青岛大学医学院学报》【年(卷),期】2010(46)3【摘要】目的研究不同途径骨髓基质干细胞（BMSCs）移植对小鼠糖尿病治疗效果。
方法分离骨髓,贴壁培养并纯化和扩增BMSCs。
腹腔注射链脲佐菌素建立小鼠糖尿病动物模型。
取2×10^5个第3代BMSCs,对模型鼠分别进行胰腺内多点注射、尾静脉移植以及肾被膜移植。
动态观察移植后小鼠的血糖、体质量及行为的变化。
结果与糖尿病对照组相比,胰腺移植组、尾静脉移植组和肾被膜移植组小鼠的糖尿病症状有所改善,血糖明显降低（F=32.58-48.35,q=10.06-14.98,P〈0.05）,以胰腺移植组血糖下降更为显著。
结论 3种途径BMSCs移植对小鼠糖尿病均有治疗作用。
【总页数】3页(P255-257)【关键词】骨髓祖代细胞;骨髓移植;糖尿病;小鼠【作者】贾跃伟;刘晓萍;于业军;郭菲菲【作者单位】青岛大学医学院组织与胚胎学教研室;青岛大学医学院附属医院皮肤科;青岛大学医学院病理生理学教研室【正文语种】中文【中图分类】R318.0;R587.1【相关文献】1.不同途径移植骨髓间充质干细胞治疗兔肝硬化模型效果比较 [J], 李晨;宫卫东;李晓冰;吴智群2.骨髓基质干细胞不同移植途径对脑缺血治疗的影响 [J], 雷阳;牟文松;雄鹰;廉英3.不同途径大鼠骨髓基质干细胞同种异体肝脏移植效果的比较 [J], 陈小伍;李利红;朱达坚;戎祯祥;剧永乐4.小鼠骨髓间充质干细胞移植途径对肝硬化治疗效果的比较 [J], 王敏;胡皓;韩英5.不同途径移植骨髓干细胞治疗急性肝损伤小鼠模型的效果比较 [J], 穆丽雅;唐秀芬;李淑芹;于丹;孙媛媛;赵金花因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
分离小鼠骨髓间充质干细胞的方法
分离小鼠骨髓间充质干细胞的方法一、分离方法说明及图例A.Ⅰ.取新鲜抗凝血液或脐带血与羟乙基淀粉550（Cat#：HES-TBD550）按1:1比例混合，37℃反应5-10分钟（5ml以下样本反应5分钟，5ml以上样本反应10分钟）；Ⅱ.取新鲜抗凝骨髓，加入一份细胞洗涤液（Cat#：2010X1118），混匀后以400g（约1500转/分）离心5分钟，弃去上清。
沉淀与羟乙基淀粉550（Cat#：HES-TBD550）按1:1比例混合，37℃反应5-10分钟（5ml以下样本反应5分钟，5ml以上样本反应10分钟）；B.加入为步骤A中所得混合液1/2体积的全血及组织稀释液（Cat#：2010C1119）混匀20℃-30℃自然沉降20-30分钟，吸取上清备用；C.向步骤B中所得上清液中加入为其一倍以上体积的细胞洗涤液（Cat#：2010X1118）混匀，以500g（约1800转/分）离心15分钟（半径15cm水平转子），弃去上清保留沉淀细胞；D.向细胞沉淀中加入全血及组织稀释液（Cat#：2010C1119）调整细胞浓度为2×108—1×109个/ml，小心叠加于细胞分离液之液面上（混合液：分离液=2:1）；（本实验采用天津灏洋TBD生物实验室的分离液）E.以400g（约1500转/分）离心20分钟（半径15cm水平转子）；第三层；为透明分离液层。
第四层；为极少数红细胞层。
收集第二层细胞放入约为其5-10倍体积的细胞洗涤液（Cat#：2010X1118）中，充分混匀后以500g（约1800转/分）离心1 5分钟。
沉淀经反复洗涤2次既得所需干细胞。
F.为获得纯度更高的干细胞，在步骤E中离心完成后可吸取第二层干细胞层再与羟乙基淀粉550（Cat#：HES-TBD550）按1:1比例混匀，20℃-30℃自然沉降20-30分钟，收集上清加入细胞洗涤液500g（约1800转/分）离心15分钟。
小鼠骨髓基质干细胞的培养
1.2.5弃掉上述离心好的细胞液上清，加入5ml的α-MEM 培养基，加胎牛血清，，再加入12mlhank液，并用吸管反复吹打后再次离心1000转，5分钟
1.2.6弃上清，加样抢取0.1ml于小离心管中，再加入0.7ml（相当于7倍稀释）的Trypan染料，在相差显微镜下将盖玻片盖好在计数池上开始计数，剩余细胞悬液加入培养瓶中在适宜环境下进行接种培养
小鼠骨髓基质干细胞的培养
学号122010000178，2010级硕士同仁医院，严森
骨髓基质干细胞( marrow st romal stem cell,MSC)是一种来源于骨髓的成体干细胞, 本实验通 过小鼠骨髓基质干细胞的培养及对其进行体外细胞特性的研究。
目的: 取小鼠股骨骨髓进行骨髓基质干细胞的原代培养,通过相差显微镜、 光镜及扫描电镜观察, 了解骨髓基质干细胞的生长情况及其特点。练习血细胞计数器的使用方法 1 材料与方法
1.2.3取 1 月龄小白鼠 1只,雌雄不限,体重约20g, 断颈脱臼处死, 无菌条件下暴露股骨, 在培养皿中去除皮肤，附带的肌肉和骨膜,切断股骨,切断上肢，并将每一肢上下剪下两个小口便于冲洗，剥离四肢时用hanks 液进行冲洗,
1.2.3分次取12mlhanks液于10ml注射器中，分别灌洗四肢骨髓，一肢骨髓用去3ml，反复上下冲洗，用空的大离心管(20ml)收集冲洗液，并将冲洗液收集好后加盖离心，1000转，5分钟
可见细胞数目：四大个细胞总数/4*稀释倍数*104
2.结果：四个大格是50个细胞的，计算的结果：8.75×105/ml个，
3.注意事项：
小鼠成骨细胞使用说明
小鼠成骨细胞小鼠成骨细胞产品说明：为使客户能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。
派瑞金提供的小鼠成骨细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。
研发的小鼠成骨细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。
同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。
小鼠成骨细胞注意事项：1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
3. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。
培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。
4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。
5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。
小鼠成骨细胞其他相关小鼠原代细胞：小鼠小肠粘膜上皮细胞小鼠大隐静脉平滑肌细胞小鼠肺微血管内皮细胞小鼠冠状动脉平滑肌细胞小鼠肺血管平滑肌细胞小鼠大隐静脉内皮细胞小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞小鼠冠状动脉内皮细胞小鼠气管上皮细胞小鼠骨细胞小鼠气管平滑肌细胞小鼠滑膜细胞小鼠肺成纤维细胞小鼠骨骼肌细胞小鼠支气管上皮细胞小鼠表皮细胞小鼠支气管成纤维细胞小鼠真皮成纤维细胞小鼠肺大静脉平滑肌细胞小鼠破骨细胞小鼠肺大动脉平滑肌细胞小鼠皮肤肥大细胞小鼠肺大动脉内皮细胞小鼠前脂肪细胞小鼠肺动脉成纤维细胞小鼠成骨细胞小鼠肺大静脉内皮细胞小鼠关节软骨细胞小鼠气管和支气管上皮细胞小鼠胎儿表皮角质形成层细胞小鼠胰岛细胞小鼠成年表皮角质形成层细胞小鼠胰腺星状细胞小鼠皮下脂肪细胞小鼠胰腺导管上皮细胞小鼠内脏脂肪细胞小鼠颌下腺上皮细胞小鼠脑动脉血管内皮细胞小鼠腮腺细胞小鼠脑动脉血管平滑肌细胞小鼠乳腺上皮细胞小鼠脑静脉血管内皮细胞小鼠胰腺上皮细胞小鼠脑静脉血管平滑肌细胞小鼠甲状腺上皮细胞小鼠脑膜细胞小鼠淋巴管内皮细胞小鼠神经胶质细胞小鼠淋巴成纤维细胞小鼠海马神经元细胞小鼠外周血白细胞小鼠脑微血管内皮细胞小鼠骨髓基质细胞小鼠脑成纤维细胞小鼠食管上皮细胞小鼠神经小胶质细胞小鼠食管平滑肌细胞小鼠雪旺氏细胞小鼠肠动脉内皮细胞小鼠小脑颗粒细胞小鼠肠静脉内皮细胞小鼠嗅鞘细胞小鼠肝实质细胞小鼠视网膜微血管内皮细胞小鼠肝动脉内皮细胞小鼠小梁网细胞小鼠肝动脉平滑肌细胞小鼠视网膜色素上皮细胞小鼠小肠血管内皮细胞小鼠视网膜muller细胞小鼠小肠隐窝上皮细胞小鼠虹膜色素上皮细胞小鼠肝内胆管上皮细胞小鼠晶状体上皮细胞小鼠胃粘膜上皮细胞小鼠角膜上皮细胞小鼠肝窦内皮细胞小鼠视网膜神经节细胞小鼠肝星形细胞小鼠角膜成纤维细胞小鼠直肠平滑肌细胞小鼠脉络膜血管细胞小鼠小肠平滑肌细胞小鼠牙乳头细胞小鼠结肠平滑肌细胞小鼠肝外胆管上皮细胞小鼠肠上皮细胞小鼠肝Kupffer细胞小鼠肠微血管细胞小鼠骨髓间充质干细胞小鼠肠巨噬细胞小鼠下丘脑神经元细胞小鼠子宫内膜上皮细胞小鼠睾丸支持细胞小鼠卵巢颗粒细胞小鼠心肌微血管内皮细胞小鼠子宫颈上皮细胞小鼠真皮微血管上皮细胞小鼠子宫平滑肌细胞小鼠胚胎成纤维细胞小鼠卵巢上皮细胞小鼠心脏干细胞小鼠子宫成纤维细胞小鼠神经干细胞小鼠卵巢成纤维细胞小鼠骨髓来源内皮祖细胞小鼠肾实质细胞小鼠椎间盘髓核细胞小鼠肾系膜细胞小鼠肾足突细胞小鼠膀胱上皮细胞小鼠肾小管平滑肌细胞小鼠膀胱平滑肌细胞小鼠肾成纤维细胞小鼠肾动脉内皮细胞小鼠尿道上皮细胞小鼠肾动脉平滑肌细胞小鼠输尿管上皮细胞小鼠肾小管上皮细胞小鼠肾管状上皮细胞小鼠肾小球内皮细胞小鼠心肌细胞小鼠前列腺上皮细胞小鼠心肌成纤维细胞小鼠肾上皮细胞小鼠主动脉内皮细胞小鼠膀胱成纤维细胞小鼠主动脉平滑肌细胞小鼠血管外膜成纤维细胞。
分离小鼠骨髓中的免疫细胞的方法
分离小鼠骨髓中的免疫细胞的方法骨髓是一种重要的免疫器官，它主要负责成熟和存储多种不同类型的免疫细胞，如粒细胞、淋巴细胞和单核细胞等。
因此，分离小鼠骨髓中的免疫细胞对于研究免疫系统的功能和生理学意义具有重要意义。
本文将介绍一种常用的分离小鼠骨髓中免疫细胞的方法。
一、实验材料准备1.小鼠骨髓2.磷酸盐缓冲盐水（PBS）3.甘露糖4. L-精氨酸血红蛋白（LymphoprepTM）离心管二、小鼠骨髓分离1.从小鼠胫骨和股骨中分离骨髓。
用PBS冲洗骨髓，使之保持湿润。
2.将骨髓加入含有10%甘露糖的PBS中，制成单细胞悬浮液。
3.将单细胞悬浮液缓慢地加入L-精氨酸血红蛋白离心管中。
4.用Lymphoprep离心管离心，离心条件为800 g，20分钟，室温。
三、免疫细胞的分离1.离心完成后，可以看到在离心管中分层形成了三明显的界面。
上层是血浆，中层是淋巴细胞、单核细胞和粒细胞，下层是红细胞。
2.使用移液管沿着离心管壁缓慢吸取中层的淋巴细胞、单核细胞和粒细胞，并将其转移至新的离心管中。
3.加入PBS冲洗淋巴细胞、单核细胞和粒细胞，使之保持湿润。
4.用PBS洗涤细胞三次，以去除离心试剂和其他污染物。
5.将细胞转移到培养皿中，并采用适当的培养基进行培养和分离。
四、实验注意事项1.在进行分离实验时，应尽量避免产生气泡，以免对细胞的分离和纯度产生影响。
2.离心时，离心管应该尽量垂直摆放，避免出现倾斜，以免影响细胞的分层。
3.分层完成后，移液管在取出上层血浆时，应尽量避开中层的细胞，以免受到污染。
五、实验结果通过上述方法分离得到的小鼠骨髓中的免疫细胞，其纯度高，可以用于继续进行免疫学、细胞生物学方面的实验研究。
六、结论分离小鼠骨髓中的免疫细胞是一个重要的实验技术，可以为后续的免疫学研究提供重要的细胞材料。
在实际操作中，需要严格控制每一个步骤，以确保分离得到的免疫细胞的纯度和活力。
同时，也需要注意安全操作，避免对实验材料和人员产生伤害。
Balbc小鼠骨髓间质干细胞的复苏和培养
Balbc小鼠骨髓间质干细胞的复苏和培养Balb/c小鼠骨髓间质干细胞的复苏和培养1. 水浴锅37°C预热。
2. 准备好Balb/c小鼠骨髓间质干细胞完全培养基，温浴到37°C。
3. 取15 mL离心管中加入9 mL完全培养基。
4. 从液氮中取出冻存的骨髓间质干细胞，立即放入-80°C冰箱（目的是让进入冻存管的液氮挥发）。
5. 在-80°C放置2~3 min后，取出冻存细胞，将冻存管迅速放入37°C温水中，快速晃动使管中内含物尽快融化。
仔细观察，待冻存管内含物完全融化后取出。
注意：•1 尽可能避免水没过管帽，以减少污染的风险。
•2 要快速完成细胞复苏过程，融化过程时间过长，会造成复苏后的细胞活性较差。
•6. 用70%~75%的酒精擦拭消毒冻存管口的外壁。
CBPI0055A10 MUCMX-01001 Page 3 of 77. 在超净台中打开冻存管，用吸管将细胞冻存悬液转移至装有9 mL完全培养基的15mL离心管中。
注意尽量避免产生气泡。
8. 为了减少细胞损失，再往冻存管中加入1 mL完全培养基，稍微吹打，收集至离心管中。
9. 将细胞悬液经250 ×g（对应于Eppendorf 5810R离心机是1134 rpm）离心5 min。
10. 离心后尽量去除上清液，加入1~2 mL的完全培养基（已预热到37°C），轻轻吹打混匀细胞沉淀。
11. 将细胞全部接种到1个T25培养瓶或底面积相当的培养器皿中，加入足量的完全培养基。
轻轻摇晃细胞培养器皿使细胞均匀分布。
12. 放入37°C、5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养。
13. 复苏后的第2天，给复苏的细胞换用新鲜的完全培养基（已预热到37°C）。
14. 之后，每2天给细胞换新鲜的完全培养基直到细胞达80%~90%的汇合度。
15. 当细胞达80%~90%的汇合度，进行消化传代。
小鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养、纯化及鉴定
小鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养、纯化及鉴定赵继学;王广义;张海玉;伏鑫【摘要】目的探讨分离、培养、纯化和鉴定小鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)方法,观察MSCs体外生长特征.方法取小鼠胫骨和股骨,取出骨髓细胞,用1.073 g/ml的Percoll分离液梯度离心,培养皿培养、换液除去非贴壁细胞,获得MSCs,通过传代对MSCs进行纯化和扩增培养.进行形态学观察,测定生长曲线,用流式细胞仪检测P3代MSCs细胞周期及表面抗原.结果新分离的MSCs呈小圆形,形态规整.培养传代后,细胞大小均匀,形态较一致,多为梭形.P1、P2、P3代MSCs生长曲线均呈S型.P3代MSCs 75.27%的细胞处于G0-G1期.P3代MSCs CD44表达阳性,表达率为88.71%,CD34表达阴性.结论利用密度梯度离心法联合贴壁培养法分离纯化骨髓MSCs,在含15%FBS的DMEM-LG培养基中培养MSCs,可获得稳定生长的昆明小鼠MSCs.培养的MSCs细胞系性状稳定,表型稳定均一,适于做进一步研究.%Objective To explore a new method for the isolation, cultivaton, purification and identification of MSCs and observe the biological features of mice MSCs in vitro. Methods Bone marrow was extracted from the tibia and thighbone of mice. The marrow liquid were isolated with 1. 073 g/ml ocrcoll. MSCs were obtained by removing the non-adherent cells. Then the MSCs were purified and expanded through passage in time. The growth curve was drawn and the morphology was observed. Cell cycle and the antigen expression of P3 MSCs were measured with FACS. Results The MSCs exhibited a small round shape after fresh separation. After cultivated and passaged,the MSCs were homogcnenously fusiform shaped. The growth curves of P1 ,P2 and P3MSCs were "S" shape. The cells of G0-G1 stage account for 75. 27%. The expression of CD 44 was positive, while the expression of CD34 was negative. Conclusion The method of density gradient centrifugation combined with adherent culture could isolate MSCs from bone marrow simplcly. DMEM-LG medium supplemented with 15% fetal bovine scrum is suitable for the culture of MSCs. The cultured MSCs lineage is stable and can be used for further research.【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2012(016)001【总页数】3页(P11-13)【关键词】骨髓间充质干细胞;细胞培养;鉴定;小鼠【作者】赵继学;王广义;张海玉;伏鑫【作者单位】吉林大学第一医院儿外科,吉林长春130021;吉林大学第一医院普外科,吉林长春130021;吉林大学第一医院儿外科,吉林长春130021;中日联谊医院【正文语种】中文【中图分类】Q78骨髓间充质干细胞（MSCs）是骨髓中存在的除造血干细胞（HSCs）外的另一类干细胞。
小鼠骨髓基质细胞分化研究
小鼠骨髓基质细胞分化研究骨髓基质细胞是一种多能干细胞，可以分化成不同种类的细胞，包括肌肉细胞、神经细胞、心脏细胞和血管细胞等。
因此，骨髓基质细胞的研究具有重要的生物医学意义。
近年来，越来越多的研究表明，小鼠骨髓基质细胞分化具有很高的潜力。
其中最常见的方法是使用化学因子和基因转录因子诱导其分化成为目标细胞。
虽然这种方法效果不错，但是其安全性和稳定性还需要更多的研究验证。
相比之下，研究人员开始将更多的重点放在了寻找自然分化诱导因子上。
通过这种方法，可以尽可能地避免使用化学物质或者影响基因表达。
其中最有前途的是利用微环境因子诱导小鼠骨髓基质细胞分化。
微环境是指细胞周围的环境因素，包括细胞外基质、细胞间质和生长因子等。
这些因素可以影响细胞的行为和命运。
因此，微环境因素在维持正常生理和发展中具有非常重要的作用。
最近的研究表明，微环境对小鼠骨髓基质细胞分化有很大的影响。
可以通过调节细胞周围的硬度和生长因子浓度等参数，来控制骨髓基质细胞的分化。
例如，研究人员发现，通过将小鼠骨髓基质细胞培养在不同硬度的基质上，可以诱导它们分化成为肌肉细胞或者成骨细胞。
此外，通过使用生长因子重建细胞外基质，可以控制小鼠骨髓基质细胞分化为心肌细胞或者神经元细胞。
另外，最近的研究还显示，细菌内毒素可以诱导小鼠骨髓基质细胞分化为成骨细胞。
这种方法的优点是可以避免使用化学物质或者影响基因表达。
然而，其安全性和稳定性还需要更多的研究验证。
总的来说，小鼠骨髓基质细胞的分化研究具有非常重要的意义。
通过寻找自然分化诱导因子，可以尽可能地避免使用化学物质或者影响基因表达。
而微环境因素在这方面具有非常重要的作用。
未来的研究需要更加深入地探索这些微环境因素，并将其用于临床治疗。
小鼠骨髓间充质干细胞培养
小鼠骨髓间充质干细胞培养目前常用的分离MSC的方法有全骨髓法和密度梯度离心法，全骨髓法即根据干细胞贴壁特性，定期换液除去不贴壁细胞，从而达到纯化MSC的目的。
密度梯度离心法即根据骨髓中细胞成分比重的不同，提取单核细胞进行贴壁培养。
随着对MSC表面抗原认识的深入，有人利用免疫方法如流式细胞仪法、免疫磁珠法等对其进行分离纯化，但经过流式或磁珠分选后的细胞出现了增殖缓慢等一些问题，加之耗费较大和技术的难度，在某种程度上限制了这些方法的广泛应用。
实验准备：1实验动物雄性，C57B L/6小鼠，清洁级，8周龄，体重18-20g。
2实验材料与试剂高糖DMEM培养基，胎牛血清，双抗（青霉素钠，链霉素），培养皿，镊子，眼科剪，止血钳，1mL注射器操作步骤1、小鼠骨髓间充质干细胞的分离及原代培养取8周龄雄性C57BL/6小鼠，颈椎脱臼法处死，75%酒精浸泡5分钟，取出双侧腿骨，置于培养皿中小心剔除粘连于骨上的肌肉组织，剪去腿骨两端，用1m l注射器抽取预冷的培养液反复冲洗骨髓腔，直至骨发白，冲洗液直接收集在插在冰上的离心管中，1500rpm离心5分钟，弃上清，用含10%胎牛血清的高糖DMEM培养液重悬细胞，接种于培养皿中（一只小鼠种一个60mm的培养皿），置于5�2，37℃，培养过夜，吸出上清，用PBS洗两遍，洗掉未贴壁的细胞，加入新鲜的培养液，继续培养。
以后每两天换液1次，并观察细胞形态。
待细胞长至80%-85%时传代（1传2）2、原代分离的间充质干细胞在接种后培养24小时，细胞开始贴壁，胞体呈圆形或多边形，培养第3-5天，细胞开始较紧密贴附壁上并开始有细胞呈梭形，并不断长大、变长，但未观察到细胞分裂，培养第7天开始观察到细胞分裂，随着细胞数的增加，细胞的生长速度变快，逐渐成漩涡状排列，培养第12天贴壁细胞长满瓶底的80%，并融合成片。
传代后细胞生长迅速。
采用贴壁培养法可获得足够数量、生长状态良好、增殖能力强的间充质干细胞，随传代数增加，其纯度增加，且该方法简单、实用。
小鼠骨髓间充质细胞原代培养及传代
小鼠骨髓间充质细胞原代培养及传代之flamerking图文版[精华]很多战友发email或PM向我询问小鼠MSC的培养方法，我零零散散地一个个回复过几次，由于我平时时间不是很多，所以回答地时候有些内容写的不是很详细。
今天又有一个战友PM我，询问我培养方法。
看来做小鼠MSC的战友越来越多。
一遍遍地重复写很费时间（想粘贴复制又找不到上次写的在哪～惨！），所以我想还是发贴公布一下。
其实我小鼠MSC在我的课题中不是主角，只是起一个control的作用，因此我在这方面的经验可能没有一些专门做小鼠MSC的战友丰富，不过我还是很愿意把我的经验写出来供大家参考，希望能够起到“抛砖引玉”的作用。
欢迎各位同道对我的方案进行批评和指正，与大家一起分享你们的经验和智慧。
提纲一，简版主要步骤及操作要点。
二，完整版1. 试剂及材料准备2. 动物手术及取材3. 原代细胞培养4. 细胞传代5. 讨论时间关系，今天先给个简版。
我先顶一下,由于我还是新手,故不能说是经验介绍,只好讲让你们指出缺点,谢谢斑竹1. 试剂及材料准备MEM,10%FCS,手术器械,培养瓶,200目滤网,5ml注射器2. 动物手术及取材CR小鼠1只,酒精浸泡5分钟,取股,胫,肱骨,用基培冲出骨髓,滤过,1000转离心,完培重悬,接种于25厘米培养瓶3. 原代细胞培养:,3天后首次换液,自己发现一周贴壁细胞就铺满达90%,自行传代4. 细胞传代:消化下来很少,能下来的增长很慢5. 讨论:没经验欢迎斑竹的继续讲解,希望有经验的老师们能不啬指教羽之无限版主,能有空再讲讲吗这几天,我的原代就是不长,42天了,25平方厘米的培养瓶还未铺慢,不能传代真是天天盼着你啊呵呵，不好意思，最近我的sony笔记本又坏了，上次坏了几次维修部修不好，给我换了台新的，结果以用了没2个月又不能启动了，真是麻烦，我的资料都在里面，最近实验又忙，没空去维修部……不过明天我就去了。
……呵呵，跑题了。
小鼠骨髓间充质细胞原代培养及传代
小鼠骨髓间充质细胞原代培养及传代之flamerking图文版[精华]很多战友发email或PM向我询问小鼠MSC的培养方法，我零零散散地一个个回复过几次，由于我平时时间不是很多，所以回答地时候有些内容写的不是很详细。
今天又有一个战友PM我，询问我培养方法。
看来做小鼠MSC的战友越来越多。
一遍遍地重复写很费时间（想粘贴复制又找不到上次写的在哪～惨！），所以我想还是发贴公布一下。
其实我小鼠MSC在我的课题中不是主角，只是起一个control的作用，因此我在这方面的经验可能没有一些专门做小鼠MSC的战友丰富，不过我还是很愿意把我的经验写出来供大家参考，希望能够起到“抛砖引玉”的作用。
欢迎各位同道对我的方案进行批评和指正，与大家一起分享你们的经验和智慧。
提纲一，简版主要步骤及操作要点。
二，完整版1. 试剂及材料准备2. 动物手术及取材3. 原代细胞培养4. 细胞传代5. 讨论时间关系，今天先给个简版。
我先顶一下,由于我还是新手,故不能说是经验介绍,只好讲让你们指出缺点,谢谢斑竹1. 试剂及材料准备MEM,10%FCS,手术器械,培养瓶,200目滤网,5ml注射器2. 动物手术及取材CR小鼠1只,酒精浸泡5分钟,取股,胫,肱骨,用基培冲出骨髓,滤过,1000转离心,完培重悬,接种于25厘米培养瓶3. 原代细胞培养:,3天后首次换液,自己发现一周贴壁细胞就铺满达90%,自行传代4. 细胞传代:消化下来很少,能下来的增长很慢5. 讨论:没经验欢迎斑竹的继续讲解,希望有经验的老师们能不啬指教羽之无限版主,能有空再讲讲吗这几天,我的原代就是不长,42天了,25平方厘米的培养瓶还未铺慢,不能传代真是天天盼着你啊呵呵，不好意思，最近我的sony笔记本又坏了，上次坏了几次维修部修不好，给我换了台新的，结果以用了没2个月又不能启动了，真是麻烦，我的资料都在里面，最近实验又忙，没空去维修部……不过明天我就去了。
……呵呵，跑题了。
小鼠骨髓细胞提取及培养
小鼠骨髓细胞提取及培养小鼠骨髓细胞的提取1、脱臼处死小鼠，投入到装有75%酒精的烧杯中浸泡3-5分钟，把小鼠拿到细胞房。
2、用保鲜袋平铺在安全柜内，并将小鼠放置在保鲜袋上进行实验操作。
3、用眼科镊小心捏起小鼠两髋关节之间的腹部皮肤，用眼科剪小心剪开皮肤，并分离两下肢的皮肤，往下在脚踝处剪断，往上在髋关节处剪断，这样可以游离出小鼠的两条下肢。
4、小心剥离下肢的肌肉，取下胫骨和股骨，并放到装有75%酒精的培养皿中。
5、把小鼠尸体拿出，清理干净安全柜，换上新的手套。
6、拿5ml和20ml的无菌注射器各一支，用20ml的注射器吸取已配好的1640，换装一个5ml注射器的针头。
轻轻插入骨髓腔，对准一个无菌50ml离心管，将细胞冲出。
7、将骨髓细胞都冲出来后，4300rpm离心5分钟，去上清。
8、加进3-4ml的红细胞裂解液静置3-4min以裂解红细胞，加入30-40ml无菌的PBS（按加入红细胞裂解液与PBS间1:9的比例加入PBS）。
9、将含BM细胞的混合液通过细胞筛过滤到新的50ml离心管中。
10、4300rpm离心5min，弃上清，得到骨髓细胞沉淀。
骨髓细胞的培养1、加入一定量的GEBICO原装的1640，吹匀细胞沉淀，然后用计数板计数BM细胞的总数。
2、按照24孔板每个孔的细胞数来铺孔，算出要铺孔的数目。
3、根据每个孔需要2ml的培养基，可以算出所需培养基的总体积。
4、培养BM细胞的培养基是按照90% GEBICO原装的1640、10%FBS、1%双抗、1‰β-ME和万分之二的GM-CSF来配成。
5、细胞跟培养基充分混匀后，把细胞混合液铺倒24孔板中培养。
注意：1、一定要注意整个过程都要在无菌环境下操作，一切用品都要保证无菌。
2、剥离骨头时一定要保持骨头的完整，小心不要剪断。
3、培养基和PBS一定要各自分装好标清楚，自己用自己的，避免交叉污染。
小鼠骨髓间充质干细胞使用说明
小鼠骨髓间充质干细胞小鼠骨髓间充质干细胞产品说明：为使客户能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。
派瑞金提供的小鼠骨髓间充质干细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。
研发的小鼠骨髓间充质干细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。
同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。
注意事项：1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
3. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。
培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。
4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。
5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。
小鼠骨髓间充质干细胞产品简介：产品名称：小鼠骨髓间充质干细胞组织来源：正常小鼠骨髓产品规格：5×105cells / 25cm2培养瓶小鼠骨髓间充质干细胞简介：小鼠骨髓基质系统内存在的骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stemcells，BM-MSCs）是一种除造血干细胞以外的、具有多向分化潜能的干细胞，可以向骨、软骨、肌组织、皮肤、脂肪、神经等多种组织分化，因此可以作为组织工程中的种子细胞。
本公司生产的小鼠骨髓间充质干细胞采用冲洗骨髓，密度梯度离心，骨髓基质细胞专一性选择培养筛选获得，经检验细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
小鼠骨髓间充质干细胞分离培养新方法
间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSC)是骨髓中除造血干细胞外另一重要的干细胞。
MSC 具有自我更新、多向分化、免疫调控和支持造血的能力，而且来源广泛，容易在体外培养和扩增，目前已经应用于临床并显示了良好的治疗效果。
虽然MSC临床应用广泛，但许多关键问题如免疫调控的具体机制等并未解决。
小鼠是重要的实验动物之一，广泛用于基础实验研究。
在体外成功分离培养MSC，并得到大量纯化的MSC是研究其分化及功能调控机制的前提。
目前分离小鼠骨髓MSC的方法包括全骨髓贴壁法、骨片消化法、流式或磁珠分选法等。
然而全骨髓贴壁法获得的细胞往往含有不少造血细胞；骨片消化法需要进行胶原酶消化，步骤多且消化时问不好控制；流式或磁珠法虽然获得细胞较纯，但程序复杂，花费高且获得的细胞相对少。
骨髓MSC的分离目前常用的方法有全骨髓贴壁法、骨片消化法和流式细胞术或磁珠分选法。
全骨髓贴壁法即根据MSC的贴壁性，定期换液除去不贴壁细胞，从而达到纯化MSC的目的。
然而该方法获得的MSC往往含有较多基质细胞和造血细胞污染。
我们的结果也显示，全骨髓贴壁法原代培养的细胞有75％为CD45阳性的细胞，传至第3代，MSC中仍有5％的CD45阳性细胞，即造血细胞。
骨片消化法，是先将骨髓冲干净，将股骨和胫骨剪碎，然后进行胶原酶消化。
虽然该方法获的MSC纯度较高，但是程序复杂，且不同鼠龄骨片胶原酶消化时间不同，不容易掌握。
随着对MSC表面抗原认识的深入，有研究者利用免疫方法如流式细胞仪法、免疫磁珠法对其进行分离纯化旧191；虽然这些方法可以得到纯度较高的细胞，但分离过程对细胞的活性影响较大，甚至导致细胞完全失去活性；而且实验条件要求高，需要骨髓量大，加之耗费较大和技术难度，在某种程度上限制了这些方法的广泛应用。
本研究采用骨髓加骨片法分离小鼠MSC，即将股骨和胫骨肌肉去干净后，不需冲骨髓，不需消。
骨髓间充质干细胞-MSC-原代培养与传代培养
骨髓间充质干细胞(MSC)原代培养与传代培养准备工作（1）试管、试管架、滴管、吸管、小鼠固定架、玻璃瓶、玻璃皿、烧杯、橡皮头、剪刀、镊子、纱布、棉球、酒精灯、滴管、移液器、细胞计数器、生理盐水、PBS、双抗（青链霉素）、75%酒精、95%酒精、培养瓶（50ml，260ml）。
（2）BALB/C小鼠（4~5周龄，18~22g，雌雄不限）、胎牛血清（灭活）、DMEM-LG 培养液（美国GIBCO）（3）针头与注射器：4.5号、7号针头（冲小鼠股骨、胫骨和肱骨骨髓，制单细胞悬液）。
实验前准备（1）实验室消毒，隔离衣消毒，小鼠固定架消毒。
配10%FBS培养液，加双抗（内含青霉素、链霉素各100μg/ml）。
（2）用75% 酒精擦拭无菌操作台面，取各种已消毒的培养用品置于超净台面，无菌室及超净台用紫外灯照射30~60 分钟灭菌。
（3）开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。
穿隔离衣，戴手套。
用70% 酒精擦拭无菌操作台面，并开启无菌操作台风机运转10 分钟后，才可开始实验操作。
点燃酒精灯，安装吸管帽。
实验步骤（1）BALB/C纯系小鼠脱臼处死后，75%乙醇浸泡5min后，在无菌操作台上无菌条件下分离双侧股骨及胫骨，在含生理盐水的50mm2玻璃平皿中去除股骨周围肌肉组织，剪去包括骺板在内的两侧骺端，用10ml注射器（配4.5号针头）抽取适量含10%FBS的完全培养基冲洗骨髓腔，将骨髓冲入培养瓶。
依次用7号针头和4.5号针头（或依次过21、23、25号）反复吹打骨髓细胞悬液，制成单细胞悬液。
细胞悬液在1000rpm离心5min后收集细胞或进行密度梯度离心。
（2）将单细胞悬液于1:2比例加到含1.082比重Percoll细胞分离液的离心管中，4℃条件下，经500g密度梯度离心25min，小心收集离心液界面上乳白色云雾状的单核细胞层，加入等量无血清培养基或磷酸盐缓冲液（PBS）充分洗涤（500g离心5min或180g离心10min）2次，去上清，用10%FBS的培养基悬浮细胞（用0.83%氯化胺破碎红细胞，培养液重悬细胞）。
小鼠骨髓基质细胞对粒系祖细胞生长调控的实验研究
小鼠骨髓基质细胞对粒系祖细胞生长调控的实验研究郭朝华;冉新泽;孔佩艳;张勇;周燕虹;邹仲敏;粟永萍;高京生;罗成基【期刊名称】《第三军医大学学报》【年(卷),期】2002(24)2【摘要】目的研究放射损伤小鼠骨髓基质细胞对粒系祖细胞生长的影响。
方法采用体外小鼠骨髓基质细胞贴壁培养法和粒系祖细胞 (CFU GM)培养法。
结果伤后 3～ 7d ,有基质细胞贴壁的CFU GM生长明显低于无贴壁组 ;伤后 14d贴壁层形成后 ,放射损伤组的CFU GM生长明显低于正常对照组 ;放射损伤后 3～ 7d ,骨髓基质细胞可抑制正常CFU GM生长 ,用薄层琼脂分隔基质细胞贴壁层与靶细胞 ,其抑制作用减弱。
当无外源性集落刺激因子 (CSF)时 ,基质细胞贴壁层对CFU GM 生长仍显示一定刺激作用。
结论辐射使骨髓基质细胞功能受到一定损伤 ,但在放射损伤造血修复与重建过程中 ,骨髓基质细胞仍起着“刺激”与“抑制”【总页数】3页(P126-128)【关键词】放射损伤;骨髓基质细胞;粒系祖细胞【作者】郭朝华;冉新泽;孔佩艳;张勇;周燕虹;邹仲敏;粟永萍;高京生;罗成基【作者单位】第三军医大学预防医学系防原医学教研室,全军复合伤研究所;第三军医大学附属新桥医院血液内科;第三军医大学附属西南医院血液内科【正文语种】中文【中图分类】R818.74【相关文献】1.放射损伤对骨髓基质细胞支持小鼠粒-巨噬系祖细胞生长的影响 [J], 郭朝华;邹仲敏;张勇;孔佩艳;周燕虹;周进明;冉新泽;粟永萍;罗成基2.小鼠15%Ⅲ度烧伤时骨髓基质细胞对粒单系祖细胞生长的影响 [J], 郭朝华;罗成基;孔佩艳;周燕虹;邹仲敏;施炎3.放烧复合伤小鼠骨髓基质细胞的变化及其对粒系祖细胞增殖的影响 [J], 曾昭铸;罗成基;郭朝华4.小鼠胎肝和骨髓造血基质细胞对粒系造血祖细胞... [J], 吴来香;陈家佩因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
小鼠骨髓基质干细胞体外成骨的实验研究
小鼠骨髓基质干细胞体外成骨的实验研究阮绪芝;陈霞萍;严世荣;王卫民【期刊名称】《解剖学研究》【年(卷),期】2003(25)4【摘要】目的建立一种良好的分离和培养小鼠骨髓基质干细胞(moasebonemarrow derivedmesenchymalstemcells ,mMSCs)的方法 ,观察小鼠骨髓基质干细胞体外成骨潜能。
方法应用贴壁选择法结合细胞克隆收集法进行mMSCs的分离纯化 ,应用细胞生长因子 (EGF和PDGF BB)刺激法进行MSCs的体外培养和传代 ,并在低糖DMEM (DMEM LG)培养液中培养。
为促进mMSCs体外成骨性分化 ,传代培养到一定时期时加入成骨性添加剂和 1 0 %胎牛血清。
培养第 2 0天分别用Gomori钙钴法显示碱性磷酸酶和VonKossa改良法显示钙化结节。
结果mMSCs呈克隆化增殖并贴壁生长形成形态均一的梭形细胞群。
成骨性添加剂可有效作用于传代培养的mMSCs,表现为细胞之间相互连接形成结节状聚合体 ,碱性磷酸酶阳性细胞数量增多 ,VonKossa染色可见钙化结节的形成。
结论建立的mMSCs的分离、培养和成骨条件有效。
【总页数】4页(P267-269)【关键词】小鼠;骨髓基质干细胞;细胞生长因子;细胞培养;成骨细胞【作者】阮绪芝;陈霞萍;严世荣;王卫民【作者单位】湖北省郧阳医学院生物学教研室;郧阳医学院附属太和医院生命科学研究所;郧阳医学院生物化学教研室【正文语种】中文【中图分类】R336【相关文献】1.异补骨脂素对小鼠骨髓基质干细胞成骨和成脂分化影响及其机制的相关研究 [J], 王剑;王钢;陈天宇;格日勒图2.双向诱导的骨髓基质干细胞体外成骨与成血管的实验研究 [J], 陈欣;张春林;王金武;郭尚春;孙辉;芮碧宇3.大鼠骨髓基质干细胞体外培养及成骨作用的实验研究 [J], 王春先;周磊;许曼波;李梅;朱安棣4.SD大鼠骨髓基质干细胞体外诱导成骨分化实验研究 [J], 曾铁功;赵晋英;黄泽智5.骨髓基质干细胞在骨形成蛋白诱导下异位成骨及应用于人造骨的实验研究 [J], 董书堃;文剑明;毕熲;董愉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
小鼠骨髓DC细胞提取
小鼠骨髓DC细胞提取
1、颈椎脱臼法处死小鼠(C57型小鼠)，放在75%酒精中侵泡3-5分钟后，拎出后将小鼠铺于超净台上一个消毒托盘上。
2、无菌提取小鼠的四肢骨，用眼科镊小心捏起小鼠两髋关节之间的腹部皮肤，用眼科剪小心剪开皮肤，并分离两下肢的皮肤，往下在脚踝处剪断，往上在髋关节处剪断，这样可以游离出小鼠的两条下肢。
3、小心剥离肌肉，分别剪下Femurs（大腿骨）and Tibias（胫骨）,剪去两端软骨，露出红色的骨髓腔。
注意尽可能少的剪走骨髓腔。
用纱布将骨头上的肌肉用纱布擦拭干净。
4、拿一支1ml的无菌注射器，每支吸取1mlHBSS液，并用无菌的针头套管将之轻轻拧弯。
轻轻插入骨髓腔，冲洗骨髓腔以获得骨髓，一般用2-3ml培养基冲洗两次，可冲出绝大部分细胞。
5、过滤：用2OO目的滤网过滤，将滤网的中央插入到离心管里面25px处，然后用注射器吸取骨髓液，慢慢将骨髓液经滤网注入离心管中，去除残渣。
6、离心：将离心管放置离心机中离心10分钟（1350r/min）
7、去上清，加入1ml红细胞裂解液ACK，静置3分钟，再加9ml HBSS溶液，进行离心10分钟，弃上清。
8、用HBSS液洗涤骨髓细胞2次，室温，1350r/min离心10分钟。
计数活细胞，用培养基调整细胞浓度至1X106个细胞/ml.
9、在试管中加入RPMI-1640培养基，然后再加入20ng/ml的细胞因子GM-CSF、5%FBS、0.1%的2-巯基乙醇，
10、吸取培养基加入到沉淀中混匀，24孔板铺板培养，每个孔1ml.
11、铺板后隔天换液，最后轻轻吹打收集细胞悬液，1350 rpm，离心10 min。
做后续的实验。
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小鼠骨髓基质细胞
小鼠骨髓基质细胞产品说明：
为使客户能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。
派瑞金提供的小鼠骨髓基质细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。
研发的小鼠骨髓基质细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。
同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。
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