imagej对SDSPAGE灰度分析定量蛋白浓度

4、方框工具选择并
画出第一条永道，单 击analyze—gels— select first lane也可以 用快捷键（Ctrl+1）
4、方框工具选择并
画出第一条永道。单 击analyze—gels— select first lane也可以 用快捷键（Ctrl+1），
会出现左图界面，点 击OK，并在图上画出 第一条条带。
Image j对SDS-PAGE灰度分析定 量蛋白浓度
朱伟伟 20180319
SDS-PAGE图像，可以用相机或光密度扫描仪成像，作为标准样品的蛋 白最好和待测蛋白的条带大小一致，用Bradford的方法测得标样的浓 度，然后把标样的浓度调成300μg/ml。
每个泳道对应的数值为点样体积（ μl ），制备所有样品的时候蛋白 溶液和2*loading buffer的体积比均为1:1
注意事项： 一般用SDS-PAGE灰度分析的方法检测蛋白浓度，其上样量不宜过大，条 带太黑容易过曝，导致定量结果不准确，检测结果会小于实际的蛋白浓 度。
1、ห้องสมุดไป่ตู้开image j 把SDSPAGE图片拖到红色箭头 所指区域。
2、单击image—Type— 8-bit转换成灰度图像。
3、单击process—subtract background会出现左图的界 面，勾选light background和 preview，选择合适的像素 值，在此一30.0pixels为例， 单击OK。
5、单击analyze—set measurements出现 下图界面，勾选Area和mean gray value单 击OK。
7、选好条带以后按住Ctrl+m出 现一个文本，如上图所示；然后 把鼠标移到黄色方框的中心，按 住鼠标，把方框拖到下一个条带， 然后按Ctrl+m，文本中出现第二 条带的面积和平均灰度值；以此 类推。
8、新建一个Excel，把文 本框内的数据复制到表格， 计算绝对灰度=255-灰度 平均值，同时标出点样体 积。理论上，标样的绝对 灰度值的比值和点样体积 比值是相等的，我们可以 选择绝对灰度比值和体积 比最接近的一对数据，如 红色框内数据。