脂肪干细胞分离培养指南
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脂肪干细胞分离培养
1. 向脂肪组织加入等体积2*P/S的PBS，充分混匀，彻底移除上清，上述步骤重复2次；
2. 用DMEM培养基（不含血清）把胶原酶I(collagenase I)储液稀释至0.01%（工作液浓度），把上述洗涤后的脂肪组织转移至新的50ml 离心管，加入脂肪组织体积5倍的胶原酶I工作液浓度，用小剪刀把脂肪组织剪碎，用封口膜封口后，把置于37℃水浴锅中, 孵育30min，每隔5 min弹匀一次；
3.加入消化液等体积的完全培养基（DMEM, 10%FBS，1*P/S）终止胶原酶消化，离心（1200g, 10min）沉淀细胞；
4. 加入10倍细胞沉淀体积的完全培养基重悬沉淀，用孔径100um的尼龙膜细胞筛滤掉组织块；
5. 把细胞接种于10cm的培养皿中（接种密度为30-50%），加入完全培养基至总体积为10ml；
6. 24h后，进行换液以移除未贴壁的细胞；
7．每隔2-3天进行半量换液，待细胞长满至密度为80-90%时进行传代；
8. 第一次传代后的细胞为P1代细胞，P1代细胞长满至密度为80-90%时进行冻存；
9. 传代，保种，拍照：每代（P0，P1，P2，P3）均需拍照；每代（P0，P1，P2，P3）均需保种，一半保种，一般传代。