脂肪干细胞分离培养.pptx
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8. 第一次传代后的细胞为P1 代细胞，P1代细胞长满至密度为80-90% 时进行冻存； 9. 传代，保种，拍照：每代（P0，P1，P2，P3ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ均需拍照；每代（P0
， P1，P2，P3）均需保种，一半保种，一般传代。
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脂肪干细胞分离培养 1.向脂肪组织加入等体积 2*P/S 的 PBS，充分混匀，彻底移除上清， 上述步骤重复 2 次； 2.用 DMEM 培养基（不含血清）把胶原酶 I(collagenase I)储液稀释 至 0.01%（工作液浓度），把上述洗涤后的脂肪组织转移至新的 50ml 离心管，加入脂肪组织体积 5 倍的胶原酶 I 工作液浓度，用小剪刀把 脂肪组织剪碎，用封口膜封口后，把置于 37℃水浴锅中, 孵育 30min， 每隔 5 min 弹匀一次； 3.加入消化液等体积的完全培养基（DMEM, 10%FBS，1*P/S）终止 胶原酶消化，离心（1200g, 10min）沉淀细胞； 4.加入 10 倍细胞沉淀体积的完全培养基重悬沉淀，用孔径 100um 的 尼龙膜细胞筛滤掉组织块； 5.把细胞接种于 10cm 的培养皿中（接种密度为 30-50%），加入完全 培养基至总体积为 10ml； 6. 24h 后，进行换液以移除未贴壁的细胞； 7.每隔 2-3 天进行半量换液，待细胞长满至密度为 80-90%时进行传 代；
， P1，P2，P3）均需保种，一半保种，一般传代。
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脂肪干细胞分离培养 1.向脂肪组织加入等体积 2*P/S 的 PBS，充分混匀，彻底移除上清， 上述步骤重复 2 次； 2.用 DMEM 培养基（不含血清）把胶原酶 I(collagenase I)储液稀释 至 0.01%（工作液浓度），把上述洗涤后的脂肪组织转移至新的 50ml 离心管，加入脂肪组织体积 5 倍的胶原酶 I 工作液浓度，用小剪刀把 脂肪组织剪碎，用封口膜封口后，把置于 37℃水浴锅中, 孵育 30min， 每隔 5 min 弹匀一次； 3.加入消化液等体积的完全培养基（DMEM, 10%FBS，1*P/S）终止 胶原酶消化，离心（1200g, 10min）沉淀细胞； 4.加入 10 倍细胞沉淀体积的完全培养基重悬沉淀，用孔径 100um 的 尼龙膜细胞筛滤掉组织块； 5.把细胞接种于 10cm 的培养皿中（接种密度为 30-50%），加入完全 培养基至总体积为 10ml； 6. 24h 后，进行换液以移除未贴壁的细胞； 7.每隔 2-3 天进行半量换液，待细胞长满至密度为 80-90%时进行传 代；