脂肪干细胞原代培养流程

脂肪干细胞原代培养流程

1.将收集到的脂肪组织移入50ml离心管，加入2倍体积的常温PBS用移液管吹打清洗：

清洗完成的指标？

2.1000转/分离心5分钟，是否需要低温？

3.用移液管将下层的液体和沉淀的血污弃掉，保留上层黄色组织，如何操作，为何不吸取

上层黄色组织？

4.吸取2倍体积的常温PBS用移液管吹打清洗

5.1000转/分离心5分钟

6.用移液管将下层的液体和沉淀的血污弃掉，保留上层黄色组织

7.吸取2倍体积的常温PBS用移液管吹打清洗

8.……反复重复以上操作3-4次，直至下层液体呈不浑浊，底部无血污（还是弃掉？），

保留上层组织

9.将组织用移液管移入无菌培养皿中，用剪刀将大块组织剪碎，将组织用吸管移入50ml

离心，加入与组织等体积的胶原酶（625U/ml）混匀后放入37℃孵箱，消化2h。

10.消化完将最上层颜色较深的油脂弃掉，注意保留组织，取与消化液等量终止液

（DMEM+10%NBS）终止消化，用弯头吸管吹打混匀数次，过100目筛网，收集滤液于离心管，1000转/分钟，离心5分钟。

11.弃上清，用培养液（α-MEM+10%NBS）重悬，根据沉淀多少接入培养瓶中（个人估计约

3E6/瓶），每瓶总液量8ml。

12.放入孵箱，24h天镜检，72或96h换液，之后隔天换液，培养12-14d传代。