黄连生物碱的提取纯化及降脂作用
黄连生物碱抗高脂血症及动脉粥样硬化实验研究
黄连生物碱抗高脂血症及动脉粥样硬化实验研究侯宏;孙胜亮;黄静;叶小利;李学刚;李平;王小华;冯平【期刊名称】《时珍国医国药》【年(卷),期】2011(22)10【摘要】目的研究黄连4种主要生物碱对高脂血症及动脉粥样硬化的影响。
方法采用HPLC测定药物对HMG-COA还原酶活性的抑制;利用外源性胆固醇和高脂饲料饲养鹌鹑建立高脂血症及动脉粥样硬化模型,小檗碱、黄连碱、巴马汀、总生物碱及阳性药脂脉康连续灌胃4周,测定血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量;实验第8周末称量体重,计算肝脏系数,对主动脉和肝脏病理切片进行光镜组织学检查。
结果与模型组相比,小檗碱、黄连碱和巴马汀能明显降低TC、TG和LDL-C,三者的TC分别降低了35.6%、32.5%、26.8%,TG分别降低了51.5%、53.1%、47.6%,LDL-C分别降低了39.2%、42.3%、26.7%;病理结果显示主动脉粥样硬化斑块病变程度可明显减轻,黄连生物碱对HMG-COA有抑制作用。
结论黄连生物碱有显著降血脂和抑制动脉粥样硬化作用。
【总页数】3页(P2462-2464)【关键词】黄连生物碱;HMG-CoA还原酶;高脂血症;动脉粥样硬化【作者】侯宏;孙胜亮;黄静;叶小利;李学刚;李平;王小华;冯平【作者单位】西南大学药学院;西南大学生命科学学院;重庆北碚区中医院【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.降脂通脉方抗高脂血症及动脉粥样硬化的实验研究 [J], 王亚红;赵明镜;吕希莹;任映;赵凤志;宋崇顺;秦腊梅;郭维琴;王硕仁;鲁伟星2.蒲黄抗鹌鹑高脂血症及动脉粥样硬化的实验研究 [J], 周芳;李爱媛;谢金鲜;杨秀芬3.黄须菜籽油抗动脉粥样硬化和抗衰老作用的实验研究——Ⅰ.黄须菜籽油抗动脉粥样硬化作用的实验研究 [J], 胡国良;张建业;崔行;毕文祥;王景梓;康鲁东;胡晓燕;庞维秋;李立华;杨铮;步迅4.益寿调脂片抗高脂血症及动脉粥样硬化的实验研究 [J], 钟毅;朱秉匡;郑仕富5.人参皂苷抗高脂血症及动脉粥样硬化的实验研究 [J], 王亚红;秦建国;郭维琴;王硕仁;任映;吕希莹因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
黄连中生物碱提取工艺的研究进展
前言黄连为多年生草本植物，是我国传统中药，在我国中西部地区分布广泛，具有清热燥湿，泻火解毒等功效，其根、茎味极苦，苦味源于所含的多种生物碱。
黄连生物碱具有抗病毒、抗炎、抗菌、抗肿瘤、降血糖及免疫调节等作用，在食品、保健、医药等领域应用非常广泛。
黄连生物碱中含量最高的为小檗碱，又名黄连素、盐酸小蘖碱，含量可达5%~8%，属异喹啉生物碱。
目前，国内外对黄连生物碱的提取工艺，主要有稀酸盐析法、回流提取法、超声辅助提取法、微波辅助提取及酶解提取法等。
本文综述了黄连生物碱提取工艺的研究进展，旨在为生物碱资源的研究与开发利用提供参考。
1生物碱的提取工艺1.1稀酸盐析法稀酸盐析法的机理是利用在酸性溶液中小檗碱的硫酸盐的溶解度大，而盐酸盐在冷水中溶解度非常小的性质。
先加入硫酸使小檗碱转变为硫酸盐溶于酸，接着加入盐酸再转化为盐酸盐而析出。
如柳明等[1]以废弃的黄连须根为原料，采用溶剂提取、树脂分步分离、沉淀和重结晶等方法，得到了小檗碱和药根碱单体，纯度即可达到95%以上。
王道武[2]等研究了黄连中生物碱小檗碱的提取工艺，对各种涉及到的因素进行了详细讨论，系统地完善了盐析法提取小檗碱的工艺，为近一步实现工业化打下基础，得到的最优提取条件。
此工艺技术成本低廉，工艺成熟简单，产率稳定。
但在提取过程需使用硫酸和盐酸，对环境易造成污染，且易腐蚀设备，有逐渐被淘汰的趋势。
可采用与其他方法相结合的提取工艺，以充分发挥稀酸盐析法的优势避免其劣势。
如侯宏等[3]采用乙醇浸泡、加酸加碱及大孔吸附树脂提取纯化黄连总生物碱，得到化合物小檗碱、黄连碱及巴马汀。
1.2回流提取法回流提取法常用水、乙醇等为提取剂，浸出液加热蒸馏，提取剂馏出后再次冷凝，重新回到浸出器中继续进行浸提，直至有效成分回流提取完全。
一般提取步骤为，在一定量的黄连粉末中加入适量的乙醇，回流提取总生物碱，抽滤，最后将滤液烘干即得生物碱。
张启云等[4]以乙醇为溶剂回流提取总生物碱，采用酸性染料比色法测定黄连中总生物碱的含量，优选总生物碱的提取工艺。
黄连提取物的作用
黄连提取物的作用黄连提取物，英文名称是COPTIS CHINENSIS ROOT EXTRACT，黄连提取物在化妆品、护肤品里主要作用是皮肤调理剂，抗氧化剂，风险系数为1，比较安全，可以放心使用，对于孕妇一般没有影响，黄连提取物没有致痘性。
根状茎为著名中药“黄连”，含小檗碱、黄连碱、甲基黄连碱、掌叶防己碱等生物碱，可治急性结膜炎、急性细菌性痢疾、急性肠胃炎、吐血、痈疖疮疡等症。
、抗菌作用、抗真菌作用、抗病毒作用、抗阿米巴作用、抗炎、抗腹泻作用、对心血管作用、解热作用、降血糖作用、抗氧化作用、对血液系统的影响。
黄连提取物本身的成分是黄连素，通过服用一些黄连素能够有效的起到清燥湿和泻火解毒的作用，同时也可以起到去中焦湿热和心经湿热等。
同时患有糖尿病的患者，在平时的时候也可以选择使用一些黄连来降血糖，因为黄连素具有抗生糖激素的作用，同时还能够有效地促进胰岛b细胞的再生，对于治疗糖尿病非常有作用。
1）解热作用黄连是清热泻火要药,腹腔注射比较黄连胆汁炙前后(0.9、3.6g/kg)对于乾酵母致热大鼠解热作用,结果表明生黄连的解热作用强于胆黄连。
通过比较黄连叶(4mg/kg)、须(4mg/kg)、根(1mg/kg)的浸膏、塬粉对内毒素致家兔发热、酵母致大鼠发热模型的作用,表明黄连根的解热效果强于黄连须,黄连叶最弱,未达到显着水平。
2）抗炎作用黄连具有明显抗炎作用,其甲醇提取物对多种致炎物所致大鼠足肿胀及肉芽肿形成均有显着抑製作用,局部用药也可显着抑制炎性肉芽肿的发展。
受精鸡胚试验表明黄连所含多种生物硷均有显着抗炎活性,如小檗硷、药根硷、黄连硷等。
另有实验表明,小檗硷30、60mg/kg灌服,可抑制醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性10.6%及35.5%;以20、50mg/kg剂量皮下注射对组胺所致大鼠皮肤毛细血管通透性也有抑製作用;4、8mg/kg皮下注射,还能明显抑制二甲苯所致小鼠耳肿胀。
3）黄连配伍应用1、黄连配木香：黄连善清热燥湿而止洩痢;木香善调中宣滞、行气止痛。
黄连总生物碱的提取纯化及含量测定
黄连总生物碱的提取纯化及含量测定张中华;赵亚兰【摘要】目的:建立黄连醇提物、黄连总生物碱的提取纯化及含量测定.方法:黄连粗粉用22倍量70％乙醇提取,提取液回收乙醇,浓缩成干膏;取部分干膏用1 0倍量0.5％硫酸溶解、静置、过滤,酸水液加石灰乳调pH至10～ 12,过滤,滤液加浓HCL调pH为1～2,再加入药液量6％～ 10％的氯化钠盐析,放置,过滤,得沉淀A 与滤液A;将沉淀A溶于1 0倍量热水,加石灰乳调pH8.5 ～9,趁热过滤,再将滤液加HCL调至pH 2～3,放置,过滤,沉淀水洗至中性,抽干,将得到的总生物碱反复用热水溶解处理.将滤液A加氨水调至pH 8～9,放置,过滤,再将沉淀用乙醇重结晶,得小檗胺;用紫外分光光度法定总生物碱含量.结果:得黄连干膏,黄连总生物碱(纯度为92.84％) 15.8 9,小檗胺1.5g;盐酸小檗碱在浓度为0.579 μg/mL～8.682 μg/mL 范围内,线性方程为A=81.159C-0.02 2,r=0.999 9,浓度与吸光度呈现良好的线性关系.结论:制备黄连醇提物及黄连中总生物碱的方法简便易操作;盐酸小檗碱的含量测定方法稳定性好,精密度较高,重现性好,操作简便.【期刊名称】《西部中医药》【年(卷),期】2018(031)004【总页数】4页(P49-52)【关键词】黄连;总生物碱;提取纯化;紫外-可见分光光度法【作者】张中华;赵亚兰【作者单位】甘肃省中医院药学部,甘肃兰州730050;甘肃省中医院药学部,甘肃兰州730050【正文语种】中文【中图分类】R284黄连为毛茛科植物黄连(Coptis.chinensis Franch.)、三角叶黄连(Copfis.deltoidea C.Y.Chenget Hsiao)或云连(Coptis.teeta wall)的干燥根茎，作为中药始载于东汉《神农本草经》，被列为上品［1］。
其性寒味苦，可清热燥湿，泻火解毒。
实验十六 黄连素的提取
实验十六黄连素的提取黄连素是一种从黄连中分离出的黄色结晶物，具有抗菌、抗病毒、抗炎等多种活性。
因其广泛应用于医药、保健食品等领域，黄连素的提取方法也成为了研究热点。
本实验旨在掌握从黄连中提取黄连素的方法以及对其进行简单纯化的基本步骤。
在实验中，我们将使用乙醇提取法对黄连进行提取和分离，得到黄连素原料。
实验原理：黄连中含有多种生物碱，其中以黄连素（Berberine）含量最高。
黄连素的化学结构为：C20H18NO4+，分子量为336.36。
其为一种具有强烈黄色的草酸盐，极易溶于乙醇、水、乙酸等溶剂，但几乎不溶于石油醚、氯仿等非极性溶剂。
基于此，我们可以运用黄连素的物理性质，采用乙醇提取法将黄连中的黄连素提取出来。
提取步骤：1. 深层清洗：将黄连去除杂质（脏物、石子、根等），放入清水中浸泡约30分钟，多次换水直至黄连基本清洗干净。
2. 研磨制粉：将清洗干净的黄连晒干，研磨成粉末。
研磨过程应注意避免粉末颗粒过大或过细。
3. 提取：将黄连粉用大量的95%乙醇浸泡3天，每日摇晃1次。
三天结束后，将浸泡过的粉末和乙醇倒入滤纸套漏中过滤。
4. 浓缩：将所得的过滤液分装至薄口烧瓶中，放置隔水加热器内进行水浴加热，除去其中的95%乙醇。
若需要纯化黄连素，可以继续进行下一步。
5. 沉淀：将浓缩后的溶液静置，等待其沉淀。
沉淀后，将上清液淘掉，沉淀置于滤纸上，并用冷水洗涤（冷水用量为原溶液体积的约10倍），使其与溶剂中残留的离子等物质分离。
这一步旨在去除黄连现有的杂质和杂质碱的沉淀物。
6. 干燥：将洗涤后的黄连素溶液在通风下自然干燥，或在低温下干燥至完全干燥即可。
实验注意事项：1. 研磨时应注意避免黄连受潮、受高温或直接阳光照射。
2. 提取过程中应使用无色、无味以及挥发性不强的95%乙醇。
3. 乙醇浓度过高或过低都会影响提取效果，应选用合适的乙醇浓度。
4. 沉淀过程中，洗涤黄连素时应使用冷水。
5. 建议保存在密封、防潮的环境中。
黄连中生物碱的提取与分离研究工艺
黄连中生物碱的提取与分离工艺研究综述李芯玲 118318119前言：黄连为多年生草本植物,是我国传统中药,在我国中西部地区分布广泛,具有清热燥湿,泻火解毒等功效,其根、茎味极苦,苦味源于所含的多种生物碱。
关键词：黄连，生物碱。
提取，工艺研究正文：黄连生物碱具有抗病毒、抗炎、抗菌、抗肿瘤、降血糖及免疫调节等作用,在食品、保健、医药等领域应用非常广泛。
【1】黄连是一种常见的中药，具有清热燥湿，泻火解毒的功效，主要有效成分为小檗碱，巴马汀，药根碱和黄连碱。
【2】目前，国内外对黄连生物碱的提取工艺，主要有回流提取法、酶解提取法,稀酸盐析法,超声辅助提取法以及微波辅助提取等。
回流提取法常用水、乙醇等为提取剂，浸出液加热蒸馏，提取剂馏出后再冷凝，重新回到浸出器中继续进行浸提,直至有效成分回流提取完成，一般步骤为在一定量的黄连粉末中加入适量的乙醇，回流提取总生物碱，抽滤，最后将滤液烘干得到生物碱。
【3】但是乙醇比水易挥发，所以在生物碱提取液浓缩时，醇提比水提更容易，提取率较高，且乙醇无毒，适合大规模工业化生产，具有广阔的前景，但耗时较长，并需要多次回流提取，才能有效提取完全，此外，提取过程中会有其他的成分溶出，因而杂志含量高。
酶解提取法的原理是利用纤维素的催化作用将纤维素水解成水溶性糖，使细胞壁破裂，有效成分溶出，酶解法提取生物碱的一般步骤为取一定量的黄连粉末，经酶解，盐析，碱化，然后结晶。
采用酶解法提取总生物碱的提取率比传统的乙醇回流发高出了24%，【4】该法省时，消耗少，生物碱得率相对较低，而且无毒无害，无污染，后处理简单等优点，属于绿色环保型提取工艺，符合当前低碳经济的要求，但是酶解发提取对酶解的温度，时间等都有较高的要求，不同产地的黄连以及酶的种类不同，提取的工艺条件也有所差别。
此外，酶的价格也比较的高。
所以在提取工艺的推广开发上有一定的影响。
稀酸盐析法的机理是利用在酸性溶液中小檗碱的硫酸的溶解度大，而盐酸盐在冷水中溶解度非常小的性质。
黄连中小檗碱的提取和鉴定
黄连中小檗碱的提取和鉴定黄连是一种常见的中药材，其中主要有效成分是小檗碱。
小檗碱具有抗菌、消炎、抗肿瘤等多种药理作用，因此在医药、保健品等领域有广泛的应用。
本实验旨在提取黄连中的小檗碱，并进行鉴定，以了解其化学组成和性质。
一、实验材料1.原料：黄连（购自当地中药店）2.试剂：乙醇、浓盐酸、石油醚、乙醚、甲醇、氢氧化钠、醋酸铅、明矾、醋酸铜、硅胶G、三氯甲烷、甲酸、乙酸乙酯二、实验步骤1.提取：将黄连粉碎后，用乙醇浸泡24小时，过滤，滤液浓缩至干，得到乙醇提取物。
将提取物溶于少量水中，用石油醚和乙醚分别萃取，得到石油醚和乙醚萃取物。
2.分离纯化：将石油醚萃取物用硅胶G进行柱层析分离，以三氯甲烷-甲酸-水（80:10:10）为洗脱剂，得到A组分。
将乙醚萃取物用硅胶G进行柱层析分离，以三氯甲烷-乙酸乙酯（7:3）为洗脱剂，得到B组分。
3.鉴定：对A组分和B组分进行红外光谱、核磁共振等测试，确定其化学结构。
同时，进行薄层色谱和高效液相色谱等分析，以确定组分的纯度和含量。
三、实验结果1.提取物得率：经过称重和计算，得到黄连乙醇提取物的得率为5.8%。
2.组分纯度：经过柱层析和洗脱剂洗脱，得到A组分和B组分。
经过薄层色谱和高效液相色谱分析，A组分的纯度为92%，B组分的纯度为85%。
3.鉴定结果：经过红外光谱和核磁共振等测试，确定A组分和B组分的化学结构分别为小檗碱和黄连碱。
四、实验结论本实验成功从黄连中提取并鉴定出了小檗碱和黄连碱。
实验结果表明，黄连中含有较高浓度的小檗碱，这为其在医药和保健品等领域的应用提供了依据。
同时，实验中使用的柱层析方法能够有效分离纯化小檗碱和黄连碱，为进一步研究其药理作用和临床应用提供了技术支持。
五、实验建议与展望本实验中使用的提取和分离纯化方法相对简单易行，但在实际应用中可能存在提取效率不高、分离纯度不够理想等问题。
未来研究可进一步优化提取和分离纯化工艺，提高小檗碱和黄连碱的提取率和纯度。
黄连生物碱提取及纯化工艺研究
黄连生物碱提取及纯化工艺研究目的探究黄连生物碱的提取及纯化的方法，以提高黄连生物碱的纯度。
方法对黄连生物碱的提取采用单因素试验及正交试验进行，其纯化工艺采取单因素试验进行。
结果最佳的黄连生物碱的提取工艺为黄连饮片加5倍量1.5%的硫酸溶液进行3次煎煮；最佳的纯化工艺为黄连提取液用Ca（OH）2调节pH5-6，抽滤，滤液加热浓缩至浓度为每ml含0.24g生药，抽滤，滤液加盐酸调节pH1.5-2，加5%氯化钠溶液使溶解，冰箱中静置过夜，抽滤，滤渣真空干燥，收集纯化物。
结论研究中对黄连生物碱的提取与纯化工艺方法简单、结果可靠，值得推广应用。
标签：黄连生物碱；提取；纯化；工艺研究黄连在临床中应用较为广泛，其主要的成分有盐酸小檗碱、巴马汀、黄连碱和表小檗碱等生物碱，主要的功效为清热解毒、泻火、燥湿，对于心律失常、充血性心力衰竭等疾病有显著的疗效，同时具有降血糖、血脂，抗血小板凝集，抗肿瘤等药理作用。
但该药的纯度越高其药效越为显著，因此，研究黄连生物碱的提取及纯化工艺是必要的，对临床研究具有重要的意义。
1使用仪器及药物1.1仪器选用美国生产的Agilent高效液相色谱仪，德国生产的BP211D电子分析天平，上海生产的DH-9070A型电热恒温鼓风干燥箱。
1.2试验药物盐酸小檗碱对照品，中国药品生物制品检定所，水为超纯水，乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
黄连饮片选用经药师鉴定后的干燥根茎。
2方法与结果2.1色谱条件固定相：Eclipse XDB-C18色谱柱；流动相：乙腈-0.05mol/L，再以磷酸调节pH4.0；柱温：30度；流速：1.0ml/min；检测波长：345nm。
2.2制取对照品溶液取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含盐酸小檗碱95.6μg的溶液，即得。
2.3制取供试品溶液取黄连提取液1ml，置25ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，经0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
黄连生物碱抗高脂血症及动脉粥样硬化实验研究的开题报告
黄连生物碱抗高脂血症及动脉粥样硬化实验研究的开题报告一、研究背景和意义高脂血症和动脉粥样硬化是非常常见的心血管疾病，也是导致心脑血管疾病死亡的主要危险因素之一。
在过去几十年里，随着生活方式变化和人口老龄化，高脂血症和动脉粥样硬化的发病率持续增加，已成为全球性的卫生问题。
因此，寻找有效预防和治疗该疾病的药物和方法一直是研究热点和难点。
黄连生物碱是一种中药有效成分，具有抗菌、抗病毒、降血糖、抗氧化、抗炎和降脂等多种药物活性。
在动物和人体的研究中，黄连生物碱已被证实具有显著的降低血脂、预防心脑血管疾病和治疗动脉粥样硬化等作用。
因此，我们计划开展黄连生物碱抗高脂血症及动脉粥样硬化实验研究。
二、研究内容和方法1. 实验动物：采用高脂饲养的SD大鼠模型2. 实验药物：黄连生物碱（纯度≥98%）3. 实验组设计和药物用量：将大鼠随机分为对照组、高脂组和黄连生物碱组，每组10只。
对照组和高脂组每日灌胃等量的生理盐水，黄连生物碱组每日灌胃黄连生物碱10 mg/kg4. 实验时间：实验持续4周5. 实验指标：（1）观察各组大鼠的体重变化情况；（2）测定每组大鼠的血脂水平，包括总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇等；（3）检测各组大鼠的心肌标志物（如肌红蛋白和肌酸激酶等）、炎性因子（如TNF-α和IL-6等）和氧化应激指标（如SOD和MDA等）。
三、预期结果和意义通过上述实验，我们期望探讨黄连生物碱对SD大鼠高脂血症和动脉粥样硬化的预防和治疗作用。
预计实验结果将表明黄连生物碱可以显著降低SD大鼠的血脂水平，改善心肌损伤和氧化应激，从而减轻动脉粥样硬化的严重程度。
这将为探索新型抗动脉粥样硬化药物提供新思路和方法，具有重要的临床和社会意义。
从黄连中提取黄连素实验报告
从黄连中提取黄连素实验报告一、实验目的1、了解黄连素的性质和用途。
2、掌握从黄连中提取黄连素的基本原理和方法。
3、熟练使用实验室常见的仪器设备进行提取和分离操作。
二、实验原理黄连素，又称小檗碱，是一种季铵型生物碱。
黄连中含有多种生物碱，其中以黄连素含量较高。
黄连素在植物中多以盐酸盐的形式存在。
本实验采用溶剂萃取法提取黄连素。
黄连素可溶于乙醇、热水等溶剂，在酸性条件下能形成盐而溶于水，在碱性条件下又能游离出来。
利用这一性质，先将黄连用乙醇回流提取，提取液浓缩后加酸溶解，过滤除去不溶性杂质，然后加碱调节 pH 值使黄连素游离出来，最后用氯仿萃取得到黄连素。
三、实验材料与仪器1、实验材料黄连粉末（＿____g）、95%乙醇、浓盐酸、氢氧化钠、氯仿、无水硫酸钠。
2、实验仪器圆底烧瓶（＿____ml）、回流冷凝管、布氏漏斗、抽滤瓶、分液漏斗、蒸发皿、玻璃棒、电子天平、恒温水浴锅、旋转蒸发仪。
四、实验步骤1、黄连粉末的乙醇回流提取称取_____g 黄连粉末，放入圆底烧瓶中，加入适量 95%乙醇，使其浸没黄连粉末。
安装回流冷凝管，在水浴锅中加热回流_____小时。
回流结束后，冷却至室温，过滤，收集滤液。
2、滤液的浓缩将滤液倒入旋转蒸发仪中，在减压条件下浓缩至无乙醇味，得到浓缩液。
3、酸溶与过滤向浓缩液中缓慢加入适量浓盐酸，边加边搅拌，使溶液呈酸性（pH 值约为 2 3）。
搅拌均匀后，静置一段时间，使不溶性杂质沉淀。
然后用布氏漏斗抽滤，收集滤液。
4、碱化与萃取向滤液中滴加氢氧化钠溶液，调节 pH 值至 9 10，使黄连素游离出来。
将碱化后的溶液转移至分液漏斗中，加入适量氯仿，充分振荡萃取。
静置分层后，收集氯仿层。
5、干燥与称重将氯仿萃取液用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂。
将滤液在蒸发皿中蒸干，得到黄连素粗品。
称重，计算黄连素的提取率。
五、实验结果与计算1、黄连素粗品的重量为_____g。
2、黄连素的提取率计算公式为：提取率＝（黄连素粗品重量／黄连粉末重量）× 100%经计算，黄连素的提取率为_____%。
黄连总生物碱提取工艺的优化研究
南阳理工学院本科生毕业论文学院（系）：生物与化学工程学院专业：生物工程学生：贾建军指导老师：李杰（讲师）完成日期 2014 年 5 月南阳理工学院本科生毕业论文黄连总生物碱提取工艺的优化研究Study on the Extraction Technology of Total Alkaloidfrom Coptis Chinensis总计:毕业论文24页表格: 9个插图： 11幅南阳理工学院本科毕业论文黄连总生物碱提取工艺的优化研究Study on the Extraction Technology of Total Alkaloidfrom Coptis Chinensis学院：生物与化学工程学院专业：生物工程学生姓名：贾建军学号：105010540075指导教师（职称）：李杰（讲师）评阅教师：完成日期：2014年5月南阳理工学院Nanyang Institute of Technology黄连总生物碱提取工艺的优化研究生物工程专业贾建军[摘要]本论文主要对黄连总生物碱的提取工艺条件进行优化研究。
首先，通过单因素试验研究提取时间、乙醇浓度、提取温度、料液比等因素对黄连总生物碱得率的影响，然后进行析因试验筛选出对黄连总生物碱得率影响显著的因子，再通过Box-Behnken 试验对提取条件进行优化。
结果显示黄连总生物碱的最佳提取条件为：提取时间120 min，乙醇浓度60%，提取温度81℃，料液比1：41。
在最佳提取条件下黄连总生物碱得率可达73.21mg/g，与预测值73.44mg/g一致，证明试验结果准确可靠，可为黄连总生物碱的提取工艺研究提供参考。
[关键词]黄连总生物碱；提取工艺；响应面分析Study on the Extraction Technology of Total Alkaloidfrom Coptis ChinensisBiological engineering Major Jia JianjunAbstract:This paper is to optimize the extraction conditions of total alkaloids from Coptis chinensis. First, single factor experiments were done to examine the impact of ethanol concentration, extrating time, extracting temperature, ratio of solid to liquid and other effect on the extraction of Coptis chinensis alkaloids. Then factorial experiments were done to filter out the significant factors. Finally, Box-Behnken experiments were done to optimize the extraction conditions. The optimal extraction conditions of total alkaloids from Coptis chinensis are obtained as follows: ethanol concentration 60%,extraction time 120 min,extraction temperature 81℃and the material liquid ratio of 1:41. The total coptis alkaloids yield could reach 73.21mg/g under the optimum technological conditions, which is similar with the predicted 73.44 mg/g. It proved that the test results are accurate, reliable and could provide the reference for the extraction of total alkaloids from Coptis chinensis.Key words:total alkaloid of Coptis Chinensis ;extraction condition; response surface methodology目录1绪论 (1)1.1黄连生物碱的研究现状 (1)1.1.1黄连的自然分布和特性 (1)1.1.2黄连的主要化学成分 (1)1.2黄连生物碱的药理活性 (1)1.3黄连生物碱的应用现状 (2)1.4黄连生物碱的提取技术的研究现状及进展 (3)1.5总生物碱含量的分析测定方法 (4)1.6响应面分析法简述 (5)1.7本论文的选题依据及研究内容 (5)1.7.1本论文的选题依据 (5)1.7.2本论文研究的主要内容 (6)2黄连总生物碱的提取工艺优化研究 (7)2.1 材料 (7)2.1.1原料 (7)2.1.2试剂 (7)2.1.3仪器设备 (7)2.2 方法 (8)2.2.1黄连总生物碱的提取 (8)2.2.2黄连总生物碱的检测 (8)2.2.3盐酸小檗碱标准曲线的绘制 (8)2.2.4黄连总生物碱得率的计算 (8)2.2.5单因素试验 (9)2.2.6析因试验设计 (9)2.2.7响应面分析试验设计 (10)2.2.8最佳工艺条件的验证实验 (10)2.3 结果及分析 (10)2.3.1盐酸小檗碱标准曲线的绘制及结果 (10)2.3.2单因素试验结果分析 (11)2.3.3析因试验及结果 (13)2.3.4响应面结果及分析 (14)2.3.5响应曲面图分析 (16)2.3.6黄连总生物碱提取工艺最优值的预测 (18)2.3.7最佳工艺条件的验证实验 (19)3 结论与展望 (20)3.1主要结论 (20)3.2展望 (20)参考文献 (22)致谢 (24)1 绪论生物碱是一类碱性含氮有机化合物并广泛存在于自然界中，普遍含有复杂的环状结构，通常以盐或游离态两种形式存在，有显著的抗肿瘤、抗菌、抗过敏、抗炎症等药理活性，是一种重要的中草药有效成分，具有极为重要的药用价值和保健功能[1]。
验一黄连中生物碱的提取、分离和含量测定
实验七黄连中盐酸小檗碱的提取分离及鉴定黄连为毛茛科黄连属植物黄连（coptis chinensis Eraneh）、三角叶黄连（coptis deltoidca C．Ycheng et Hsiao）或云连（coptiteetoidesC.Y.cheng）的干燥根茎。
黄连具有清热燥湿、清心除烦，泻火解毒的功效。
黄连的有效成分主要是生物碱，已分离出的主要生物碱有小檗碱（berberine）、掌叶防己碱（palmatine）、黄连碱（jatrorrhizine）等。
其中小檗碱含量最高，可达10%左右，是以盐酸盐的状态存在于黄连中。
小檗碱有很强的抗菌作用，已广泛地应用于临床，掌叶防己碱也作药用，其抗菌性能和小檗碱相似。
[目的要求]1．学习和掌握水溶性生物碱的提取方法。
2．学习和掌握生物碱的柱色谱分离方法。
3．学习和掌握生物碱的化学检识及薄层色谱的鉴定方法。
[实验原理]小檗碱为黄色针状结晶，mp为145℃，游离的小檗碱能缓缓溶于水（1：20）及乙醇中（1：100），易溶于热水及热醇，难溶于乙醚，石油醚、苯、三氯甲烷等有机溶剂，其盐在水中溶解度很小，尤其是盐酸盐。
盐酸盐为l：500，枸橼酸盐1：125，酸性硫酸盐1：100，硫酸盐l：30，但在热水中都比较容易溶解。
小檗碱常以季铵碱形式存在，碱性强（pka11.53），能溶于水中，其水溶液有三种互变形式。
O ONHCHOOOOCH3OCH3季铵式（红棕色）醇式（黄色）醛式（黄色）N+OOOCH3OCH3小檗碱（黄连素）掌叶防己碱又称巴马亭，为黄色结晶，溶于水、乙醇、几乎不溶于三氯甲烷、乙醚等有机溶剂。
盐酸掌叶防已碱为黄色针状结晶，并有强烈的黄色荧光。
易溶于热水或热乙醇，在冷水中的溶解度也比盐酸小檗碱大。
N+H3COH3COOCH3OCH3掌叶防己碱本实验是利用小檗碱和掌叶防己碱的硫酸盐在水中溶解度大的性质，用硫酸水提取出来总生物碱，再利用其盐酸盐难溶于水及盐析作用，使生物碱盐析出，以除去水溶性杂质。
黄连的提取实验报告
一、实验目的1. 熟悉黄连药材的性状特征和显微特征。
2. 掌握水提法和醇提法提取黄连有效成分的基本操作。
3. 学习测定提取液中有效成分含量的方法。
4. 了解黄连药材的药理作用及临床应用。
二、实验原理黄连（Coptis chinensis Franch.）为毛茛科植物，其根茎是传统中药材，具有清热燥湿、泻火解毒的功效。
黄连中的有效成分主要为生物碱，如小檗碱、黄连碱等。
本实验采用水提法和醇提法提取黄连中的有效成分，并通过测定提取液中生物碱的含量来评价提取效果。
三、实验材料与仪器实验材料：1. 黄连药材（干燥根茎）2. 乙醇（95%）3. 乙醚4. 水浴锅5. 漏斗6. 烧杯7. 滤纸8. 滤液收集瓶9. 滤纸筒10. 量筒11. 烧瓶12. 冷却水13. 移液管14. pH试纸15. 碱性滴定剂（如NaOH溶液）16. 酸性滴定剂（如HCl溶液）17. 滴定管18. 酸碱指示剂（如甲基橙）实验仪器：1. 电子天平2. 磁力搅拌器3. pH计4. 显微镜5. 离心机6. 紫外-可见分光光度计四、实验步骤1. 药材预处理：将干燥的黄连药材粉碎，过40目筛，备用。
2. 水提法：1. 称取5g黄连粉末，置于烧杯中。
2. 加入50mL蒸馏水，搅拌均匀。
3. 加热至沸腾，保持10分钟。
4. 取出烧杯，冷却至室温。
5. 用滤纸过滤，收集滤液。
3. 醇提法：1. 将上述水提液倒入烧杯中。
2. 加入等体积的乙醇，搅拌均匀。
3. 静置24小时，使生物碱沉淀。
4. 取出烧杯，用滤纸过滤，收集滤液。
4. 测定提取液中生物碱含量：1. 将滤液置于紫外-可见分光光度计中，测定其在特定波长下的吸光度。
2. 根据标准曲线计算提取液中生物碱的含量。
五、实验结果与分析1. 通过观察黄连药材的性状特征，可以初步判断其质量。
2. 水提法和醇提法均可提取黄连中的有效成分，但醇提法提取率更高。
3. 通过测定提取液中生物碱的含量，可以评价提取效果。
黄连生物碱中药提取物
黄连生物碱中药提取物黄连生物碱【提取来源】本品为毛莨科植物黄连Coptis chin:ensis Franch.、三角叶黄连Coptis deltoideaC.Y.Cheng et Hsiao、云连Coptis teeta Wall.的根提取的生物碱类成分，总生物碱含量≥80%。
【主要成分】小檗碱Berberine，含量≥60%【随属成分】黄连碱Coptisine甲基黄连碱Worenine巴马亭Palmatine药根碱Tatrorrhizine非洲防己碱Columbamine表小檗碱Epiberberine含量：20%【性状】本品为鲜黄色至橙黄色粉末，味苦，可溶于甲醇、乙醇、氯仿、热水。
【鉴别】取本品加甲醇制成0.3%溶液作供试液。
取标准品小檗碱、表小檗碱、黄连碱、甲基黄连碱等加甲醇制成各成分含量为0.5mg/ml溶液作对照液。
取黄连标准对照药材0.5g加甲醇30ml，超声提取20分钟，滤液浓缩至1ml作对照液。
取上述三液各2μl，分别点于同一硅胶G板，以环己烷-乙酸乙酯异丙醇-甲醇-水-三乙胺(3：3.5：1：1.5：0 5：1)展开，展开前氨气饱和，展后吹干，于紫外灯365nm下检视，标品斑点对应位置显相同颜色荧光斑点，比对标准药材斑点，对应率≥60%。
【检查】干燥失重：不得过3.0%(附录Ⅸ G)炽灼残渣：不得过0.5%(附录Ⅸ J)重金属：不得过10ppm(附录Ⅸ E)【含量测定】照高效液相色谱法(附录Ⅵ D)测定色谱条件C18柱流动相：乙腈0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(50：50)(每100ml中加十二烷基硫酸钠0.4g，再以磷酸调pH=4.0) 检测波长：345nm理论板数≥5000对照液：取盐酸小檗碱标品加甲醇制成90.5μg/ml 溶液备用。
供试液：取本品加甲醇制成180μg/ml溶液备用。
黄连中提取黄连素的提取纯化
黄连中提取黄连素的提取纯化【实验目的】1.学习从中草药提取生物碱的原理和方法。
2.学习减压蒸馏的操作技术。
3.进一步掌握索氏提取器的使用方法，巩固减压过滤操作。
4.提取黄连中的黄连素及纯化。
【实验原理】黄连素（也称小檗碱），属于生物碱，是中草药黄连的主要有效成分。
其中含量可达4%~10%。
除了黄连中含有黄连素以外，黄柏、白屈菜、伏牛花、三颗针等中草药中也含有黄连素，其中以黄连和黄柏中含量最高。
黄连素有抗菌、消炎、止泻的功效。
对急性菌痢、急性肠炎、百日咳、猩红热等各种急性化脓性感染和各种急性外眼炎症都有效。
黄连素是黄色针状体，含有5.5分子结晶水，在100℃下干后，失去分子结晶水而转为棕红色。
无臭，味极苦。
熔点145℃。
微溶于水和乙醇，较易溶于热水和热乙醇中，几乎不溶于乙醚。
黄连素的盐酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硝酸盐均难溶于冷水，易溶于热水，故可用水对其进行重结晶，从而达到纯化目的。
从黄连中提取黄连素，往往采用适当的溶剂（如乙醇、水、硫酸等）。
在脂肪提取器中连续抽提，然后浓缩，再加以酸进行酸化，得到相应的盐。
粗产品可以采取重结晶等方法进一步提纯。
黄连素被硝酸等氧化剂氧化，转变为樱红色的氧化黄连素。
黄连素在强碱中部分转化为醛式黄连素，在此条件下，再加几滴丙酮，即可发生缩合反应，生成丙酮与醛式黄连素缩合产物的黄色沉淀。
【仪器和药品】仪器：剪刀，圆底烧瓶（250mL)，球形冷凝管，直形冷凝管，蒸馏头，接液管，电炉，黄连10%乙酸液，温度计（100℃），烧杯（200mL）3个，量筒100ml，量筒5ml，锥形瓶（250mL)，减压过滤装置，干燥箱，干燥器，试管，循环水式真空泵，布氏漏斗，试管夹，表面皿，真空脂，滴管，酒精灯，台秤，石棉网，恒温冰浴，分析天平，带盖玻璃瓶。
药品及材料：无水乙醇（AR），HCI，石灰，36%乙酸，黄连，漂白粉，5%-10%NaCI 浓硝酸（AR）, 丙酮，H2SO4（0.5%），pH试纸，冰水，滤纸。
黄连五种主要生物碱的提取纯化及含量测定
黄连 味 苦，性 寒，归 心、胃、肝、胆、大 肠 经， 具有泻 火 解 毒、清 热 燥 湿 的 功 效。黄 连 中 含 有 小 檗 碱、巴马汀碱、黄连碱，表小檗碱等生物碱都具有较 强的药理活性。现代药理研究表明，黄连主要有效成 分生物碱类不仅具有抗菌、抗病毒的功效，还具有抗 心律失常、改善充血性心力衰竭、扩张冠状动脉、降 血糖、降血脂、抗血小板凝集、利胆、抗肿瘤等药理
２０１８年 ９月 第 ２０卷 第 ９期
中国现代中药 ＭｏｄＣｈｉｎＭｅｄ
Ｓｅｐ２０１８ Ｖｏｌ２０ Ｎｏ９
·中药工业·
黄连五种主要生物碱的提取纯化及含量测定△
张纯刚１ ，唐静雅２，于琛琛１，程兰１，康廷国１
（１辽宁中医药大学药学院，辽宁 大连 １１６６２０；２大连医科大学附属第一医院药学部，辽宁 大连 １１６６２０）
［摘要］ 目的：探 索 出 黄 连 五 种 主 要 生 物 碱 的 最 优 提 取 纯 化 方 法 及 含 量 测 定 方 法， 为 制 剂 研 究 奠 定 基 础。 方法：采用 ＨＰＬＣ进行生物碱的含量测定，以黄连五种主要生物碱加和得率为指标，优选黄连五种主要生物碱提取及 纯化工艺。盐酸药根碱、盐 酸 表 小 檗 碱、盐 酸 黄 连 碱、盐 酸 巴 马 汀、盐 酸 小 檗 碱 的 浓 度，分 别 在 ０４８～４８０、 ３５２～３５２、２０４～２０４、１７２～１７２、１０２～１０２μｇ·ｍＬ－１（ｒ均大于 ０９９９）范围内，与峰面积呈良好的线性关系。 结果：黄连提取最优的条件为黄连饮片，加 ８倍量 １５％的硫酸溶液，煎煮 ３次，每次 ４０ｍｉｎ。纯化最佳工艺为黄连 提取液用 Ｃａ（ＯＨ）２调节 ｐＨ５～６，滤液加 ＨＣｌ调节 ｐＨ１～２，加 ５％ＮａＣｌ，冰箱冷藏静置过夜，沉淀物干燥。结论： 所建立的黄连五种主要生物碱提取纯化工艺及含量测定方法简单可靠。
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黄连生物碱的提取纯化及降脂作用侯 宏1,李学刚1*,李 平2,王小华2,冯 平2(1.西南大学药学院,重庆400715;2.重庆北碚区中医院,重庆400700)摘要 目的:提取纯化黄连主要生物碱并研究其降脂作用。
方法:采用乙醇浸泡、加酸加碱及大孔吸附树脂提取总生物碱,用萃取、柱层析及重结晶分离黄连生物碱。
以高脂饲料喂养鹌鹑建立高脂模型,观察各用药组对鹌鹑血清TC 、TG 、LDL -C 及HDL -C 影响。
结果:小檗碱、黄连碱及巴马汀有明显降低TC 、LDL -C 水平的作用。
结论:小檗碱、黄连碱及巴马汀有明显降脂作用。
关键词 黄连生物碱;提取;纯化;血脂;鹌鹑中图分类号 R28511 文献标志码 A 文章编号 1007-4813(2011)01-0007-02 基金项目:重庆市科委攻关项目(CSTC 2010AC5007);科技部重大新药创制课题(2010ZX09401-306-3-10)。
作者简介:侯 宏(1986-),女,硕士研究生。
研究方向:天然产物化学。
*通信作者:李学刚,博士研究生导师。
E -mail:xuegangli2000@黄连为毛茛科植物黄连Co ptis chinensisFranch ,三角叶黄连Coptis deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao 或云连Coptis teeta wall.的干燥根茎。
其活性成分为原小檗碱型生物碱,主要包括盐酸小檗碱、黄连碱、巴马汀及总生物碱。
研究[1-5]表明,黄连有抗菌、抗病毒、抗心律失常、抗肿瘤、降血糖及降血脂等作用。
黄连提取纯化方法很多,有水提、醇提以及柱层析纯化等[6-8],本实验采用乙醇结合酸溶碱沉的方法提取生物碱并再进一步纯化,在降血脂方面研究提供依据。
1 材料111 药材和试剂 黄连采自重庆石柱黄连GAP 基地;柱层析硅胶D101大孔树脂、乙醇、硫酸、Ca(OH )2(成都科隆试剂公司);脂脉康胶囊(12粒@3板/盒,批号20090502,国药准字ZI4020737,山西安特生物制药股份有限公司);胆固醇(安徽天启化工科技有限公司,纯度\9218%)。
猪油、鲁花花生油(超市购买),总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL -C)、血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL -C)测定试剂盒(南京建成生物研究所)。
112 主要仪器 RE -52AA 旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);SHZ -D(Ó)循环水式真空泵(巩义市英峪予华仪器厂);TG16-W 微量高速离心机(长沙湘仪离心机仪器有限公司);E OSBRAVO 全自动生化分析仪。
113 动物 鹌鹑,雌雄各半,2个月龄,体质量(130?20)g,购于重庆万盛鹌鹑养殖场。
2 方法和结果211 提取和分离 黄连干燥根茎(10kg)粉粹,95%乙醇浸泡24h 过滤,倒出滤液,反复3次,合并滤液,减压浓缩得浸膏2000g,通过预实验,浸膏采用5倍量的015%H 2SO 4溶解,放置2h,再加Ca(OH)2调pH 值9~10,然后其将一部分加入装有D101大孔树脂的柱中,先用蒸馏水洗至无色,再用95%乙醇以2B V/h 洗脱,收集洗脱液,减压浓缩得总生物碱的量;另一部分用氯仿、正丁醇萃取,其中取正丁醇萃取物上硅胶柱色谱,并利用重结晶手段,得到化合物小檗碱、黄连碱及巴马汀。
212 黄连生物碱对血清TC 、TG 、LDL -C 及HDL -C 的影响 选用健康鹌鹑70只用普通饲料适应性喂养1周,随机分为7组:正常对照组,模型组,脂脉康组(460mg/kg,按人用量通过体表面积折算)及小檗碱、黄连碱、巴马汀、总生物碱组(剂量100mg/kg,根据前期血脂实验研究所得)。
除正常组喂普通饲料外,其余各组喂高脂饲料(79%普通饲料+14%猪油+6%花生油+1%胆固醇)[9-10]。
于实验开始后第4周禁食12h,颈静脉取血1mL,分离血清,利用全自动生化分析仪测定血清中TC 、TG 、LDL -C 、HDL -C 。
结果用均数?标准差( x ?s )表示,并进行t 检验,见表1。
结果显示,用高脂饲料连续喂养鹌鹑4周后血清TC 、LDL -C 、HDL -C 与正常组相比明显升高,表明造模成功;与模型组相比,所有药物组均可以降低鹌鹑血脂指标,其中,小檗碱、黄连碱、巴马汀可明显降低血清TC,差异有统计学意义,但总生物碱降TC 效果不明显,均可明显降TG,差异有统计学意义,在一定程度上药物组均可提高HDL -C,但差异无统计学意义。
黄连碱降血脂指标最明显。
)7)血脂灵片对高脂血症模型大鼠降血脂作用的实验研究王 颖(天津市中医药研究院附属医院,天津300120)摘要 目的:观察血脂灵片和辛伐他汀对高脂血症大鼠模型降血脂的影响。
方法:将30只雄性SD 大鼠分笼饲养,按体质量以随机分组方法分为6组:空白组、高脂模型组、血脂灵片高剂量组、血脂灵片中剂量组、血脂灵片低剂量组、辛伐他汀阳性对照组,每组5只。
除空白组和模型组外,其余各组按给药剂量进行灌胃给药4d 。
第4天灌胃给药前大鼠禁食12h,于末次给药后除空白组外均用Triton W R -1339进行尾静脉注射造模。
造模后12h 再灌胃给药1次,测定造模后6、12、24、48h 大鼠血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL -C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL -C)。
结果:与模型组比较,TG 在治疗后24h 降低,差异有统计学意义(P <0105);TC 在治疗后48h 降低,差异有统计学意义(P <0105);LDL -C 在治疗后12h 降低,差异有统计学意义(P <0105);HDL -C 在治疗后12h 升高,差异有统计学意义(P <0105)。
结论:血脂灵片对高血脂症模型大鼠具有降血脂的作用。
关键词 血脂灵片;辛伐他汀;高脂血症;血脂;大鼠中图分类号 R28515 文献标志码 A 文章编号 1007-4813(2011)01-0008-02作者简介:王 颖(1975-),女,大专学历,药师。
研究方向:药学研究。
本文就血脂灵片对高脂血症大鼠降血脂的药效学作用进行了实验研究,现将实验结果报道如下。
1 实验材料111 实验动物 清洁级SD 雄性大鼠,30只,体重230~280g,由北京维通利华动物实验中心提供。
112 实验方法 受试药物:血脂灵片;阳性对照药:辛伐他汀;造模药物:Triton WR -1339。
113 实验试剂 013%C MC;019%氯化钠溶液;总胆固醇试剂盒;三酰甘油试剂盒;低密度脂蛋白胆固醇试剂盒;高密度脂蛋白胆固醇试剂盒。
表1 黄连生物碱对鹌鹑TC 、TG 、LDL -C 、HDL -C 的影响( x ?s ,n =10)mmol/L组 别T C TGL DL -CHDL -C正常组 6.29?0.81 2.37?0.971.83?0.902.54?0.57模型组34.88?1.01## 5.65?1.92# 28.36?1.16#5.32?0.33##脂脉康组33.97?1.27 2.76?0.48 21.23?1.74v 6.30?0.27 小檗碱组22.46?2.72v2.74?0.4517.72?2.87v v 5.62?0.41黄连碱组23.54?3.75v2.56?0.2216.36?3.76v v5.87?0.46巴马汀组25.55?4.75v 2.96?0.52 20.78?3.13v 5.77?1.05 总生物碱组31.79?7.393.27?0.8125.48?2.346.01?0.46注:与正常组比较,#P <0.05,##P <0.01;与模型组比较,v P <0.05,v v P <0.01。
3 小结高血压、高血脂等心脑血管疾病的增加已成为当今社会影响人类健康的一大难题,因此,具有降压、降脂功效的药物研发一直受到人们的重视。
本实验建立鹌鹑高血脂模型,结果表明小檗碱、黄连碱、巴马汀均能显著降低TC 、TG 及LDL -C,有望开发为降血脂类药物。
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