黄连生物碱的提取纯化及降脂作用

黄连生物碱的提取纯化及降脂作用

侯 宏1,李学刚1*,李 平2,王小华2,冯 平2

(1.西南大学药学院,重庆400715;2.重庆北碚区中医院,重庆400700)

摘要 目的:提取纯化黄连主要生物碱并研究其降脂作用。方法:采用乙醇浸泡、加酸加碱及大孔吸附树脂提取总生物碱,用萃取、柱层析及重结晶分离黄连生物碱。以高脂饲料喂养鹌鹑建立高脂模型,观察各用药组对鹌鹑血清TC 、TG 、LDL -C 及HDL -C 影响。结果:小檗碱、黄连碱及巴马汀有明显降低TC 、LDL -C 水平的作用。结论:小檗碱、黄连碱及巴马汀有明显降脂作用。

关键词 黄连生物碱;提取;纯化;血脂;鹌鹑

中图分类号 R28511 文献标志码 A 文章编号 1007-4813(2011)01-0007-02 基金项目:重庆市科委攻关项目(CSTC 2010AC5007);科技部重大新药创制课题(2010ZX09401-306-3-10)。 作者简介:侯 宏(1986-),女,硕士研究生。研究方向:天然产物化学。*通信作者:李学刚,博士研究生导师。E -mail:xuegangli2000@

黄连为毛茛科植物黄连Co ptis chinensisFranch ,三角叶黄连Coptis deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao 或云连Coptis teeta wall.的干燥根茎。其活性成分为原小檗碱型生物碱,主要包括盐酸小檗碱、黄连碱、巴马汀

及总生物碱。研究[1-5]表明,黄连有抗菌、抗病毒、抗心律失常、抗肿瘤、降血糖及降血脂等作用。黄连提

取纯化方法很多,有水提、醇提以及柱层析纯化

等[6-8],本实验采用乙醇结合酸溶碱沉的方法提取生物碱并再进一步纯化,在降血脂方面研究提供依据。1 材料

111 药材和试剂 黄连采自重庆石柱黄连GAP 基地;柱层析硅胶D101大孔树脂、乙醇、硫酸、Ca(OH )2(成都科隆试剂公司);脂脉康胶囊(12粒@3板/盒,批号20090502,国药准字ZI4020737,山西安特生物制药股份有限公司);胆固醇(安徽天启化工科技有限公司,纯度\9218%)。猪油、鲁花花生油(超市购买),总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL -C)、血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL -C)测定试剂盒(南京建成生物研究所)。

112 主要仪器 RE -52AA 旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);SHZ -D(Ó)循环水式真空泵(巩义市英峪予华仪器厂);TG16-W 微量高速离心机(长沙湘仪离心机仪器有限公司);E OSBRAVO 全自动生化分析仪。113 动物 鹌鹑,雌雄各半,2个月龄,体质量(130?20)g,购于重庆万盛鹌鹑养殖场。

2 方法和结果

211 提取和分离 黄连干燥根茎(10kg)粉粹,95%乙醇浸泡24h 过滤,倒出滤液,反复3次,合并滤液,

减压浓缩得浸膏2000g,通过预实验,浸膏采用5倍

量的015%H 2SO 4溶解,放置2h,再加Ca(OH)2调pH 值9~10,然后其将一部分加入装有D101大孔树脂的柱中,先用蒸馏水洗至无色,再用95%乙醇以2B V/h 洗脱,收集洗脱液,减压浓缩得总生物碱的量;另一部分用氯仿、正丁醇萃取,其中取正丁醇萃取物上硅胶柱色谱,并利用重结晶手段,得到化合物小檗碱、黄连碱及巴马汀。212 黄连生物碱对血清TC 、TG 、LDL -C 及HDL -C 的影响 选用健康鹌鹑70只用普通饲料适应性喂养1周,随机分为7组:正常对照组,模型组,脂脉康组(460mg/kg,按人用量通过体表面积折算)及小檗碱、黄连碱、巴马汀、总生物碱组(剂量100mg/kg,根据前期血脂实验研究所得)。除正常组喂普通饲料外,其余各组喂高脂饲料(79%普通饲料+14%猪油+6%花生油+1%胆固醇)[9-10]

。于实验开始后第4周禁食12h,颈静脉取血1mL,分离血清,利用全自动生化分析仪测定血清中TC 、TG 、LDL -C 、HDL -C 。结果用均数?标准差( x ?s )表示,并进行t 检验,见表1。

结果显示,用高脂饲料连续喂养鹌鹑4周后血清TC 、LDL -C 、HDL -C 与正常组相比明显升高,表明造模成功;与模型组相比,所有药物组均可以降低鹌鹑血脂指标,其中,小檗碱、黄连碱、巴马汀可明显降低血清TC,差异有统计学意义,但总生物碱降TC 效果不明显,均可明显降TG,差异有统计学意义,在一定程度上药物组均可提高HDL -C,但差异无统计学意义。黄连碱降血脂指标最明显。

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7)

血脂灵片对高脂血症模型大鼠降血脂作用的实验研究

王 颖

(天津市中医药研究院附属医院,天津300120)

摘要 目的:观察血脂灵片和辛伐他汀对高脂血症大鼠模型降血脂的影响。方法:将30只雄性SD 大鼠分笼饲养,按体质量以随机分组方法分为6组:空白组、高脂模型组、血脂灵片高剂量组、血脂灵片中剂量组、血脂灵片低剂量组、辛伐他汀阳性对照组,每组5只。除空白组和模型组外,其余各组按给药剂量进行灌胃给药4d 。第4天灌胃给药前大鼠禁食12h,于末次给药后除空白组外均用Triton W R -1339进行尾静脉注射造模。造模后12h 再灌胃给药1次,测定造模后6、12、24、48h 大鼠血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL -C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL -C)。结果:与模型组比较,TG 在治疗后24h 降低,差异有统计学意义(P <0105);TC 在治疗后48h 降低,差异有统计学意义(P <0105);LDL -C 在治疗后12h 降低,差异有统计学意义(P <0105);HDL -C 在治疗后12h 升高,差异有统计学意义(P <0105)。结论:血脂灵片对高血脂症模型大鼠具有降血脂的作用。

关键词 血脂灵片;辛伐他汀;高脂血症;血脂;大鼠

中图分类号 R28515 文献标志码 A 文章编号 1007-4813(2011)01-0008-02作者简介:王 颖(1975-),女,大专学历,药师。研究方向:药学研究。

本文就血脂灵片对高脂血症大鼠降血脂的药效学作用进行了实验研究,现将实验结果报道如下。1 实验材料

111 实验动物 清洁级SD 雄性大鼠,30只,体重230~280g,由北京维通利华动物实验中心提供。

112 实验方法 受试药物:血脂灵片;阳性对照药:辛伐他汀;造模药物:Triton WR -1339。

113 实验试剂 013%C MC;019%氯化钠溶液;总胆固醇试剂盒;三酰甘油试剂盒;低密度脂蛋白胆固醇试剂盒;高密度脂蛋白胆固醇试剂盒。

表1 黄连生物碱对鹌鹑TC 、TG 、LDL -C 、HDL -C 的影响( x ?s ,n =10)

mmol/L

组 别T C TG

L DL -C

HDL -C

正常组 6.29?0.81 2.37?

0.97

1.83?

0.90

2.54?

0.57

模型组34.88?1.01## 5.65?1.92# 28.36?1.16#

5.32?0.33#

#脂脉康组33.97?1.27 2.76?0.48 21.23?1.74v 6.30?0.27 小檗碱组22.46?2.72v

2.74?0.45

17.72?2.87v v 5.62?0.41

黄连碱组23.54?3.75v

2.56?

0.22

16.36?3.

76v v

5.87?

0.46

巴马汀组25.55?4.75v 2.96?0.52 20.78?3.13v 5.77?1.05 总生物碱组31.79?7.39

3.27?0.81

25.48?2.34

6.01?0.46

注:与正常组比较,#P <0.05,##P <0.01;与模型组比较,v P <0.05,

v v P <0.01。

3 小结

高血压、高血脂等心脑血管疾病的增加已成为当今社会影响人类健康的一大难题,因此,具有降压、降脂功效的药物研发一直受到人们的重视。本实验建立鹌鹑高血脂模型,结果表明小檗碱、黄连碱、巴马汀均能显著降低TC 、TG 及LDL -C,有望开发为降血脂类药物。参考文献:

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(收稿日期:2010-10-13)

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