利用ELISA法检测乙肝五项操作过程中的几点注意事项

利用ELISA法检测乙肝五项操作过程中的几点注意事项

发表时间：2009-07-09T11:05:30.310Z 来源：《中外健康文摘》2009年第13期供稿作者：张晓然 (哈尔滨市阿城区中医院黑龙江哈尔滨1503

[导读] 目前，临床乙肝五项检测一般采用ELISA法，因为ELISA法是当前灵敏度较高，特异性较好的方法

【中图分类号】R512.6+2 【文献标识码】B 【文章编号】1672-5085(2009)13-0236-02

目前，临床乙肝五项检测一般采用ELISA法，因为ELISA法是当前灵敏度较高，特异性较好的方法，被临床广泛认可，而且操作非常简单。但在操作过程中各个环节对检测结果影响较大。望广大检验工作者引起高度重视，要严格遵守操作规程。一般涉及标本的采集和保存、试剂的选择和准备、加样、浴温、冲板、显色、比色各步骤。

下面将操作过程中各个环节的注意事项做以下简介：

1 标本的采集及保存

采血管，优点是既可以预防血液中的气溶胶粒子在空气中传播，对工作人员造成危害，又可以防止标本被污染。采血过程一定按无菌操作，保证采血顺畅,不要进行剧烈震荡，避免产生溶血现象，因溶血标本或长菌标本会造成假阳性结果。血液标本采集后要使其充分凝固再分离血清，最好放置1小时，然后再用3000rmp离心15分钟，若当天检测可以放在室温，如果在次日或几天内检测，可分离血清后，放在2-8℃冰箱内保存，用时提前取出，恢复至室温温度时方可检测，如果长时间保存，必须分离血清后置于-20℃低温冰箱内密封保存，用时先置于2-8℃冰箱中使之溶解，然后在室温下使之全溶，方可使用。

2 试剂的选择及准备

选择质量优质的试剂盒，严格阅读使用说明书，操作前将试剂在室温平衡30分钟，目的主要是为了保证试剂及反应微孔在后面浴温过程中能够较快达到所要求的温度，稀释洗板液所用蒸馏水或去离子水一定要保证质量，而且要当天用当天配制。

3 加入样本及反应试剂

血清或血浆标本一定要分离好，决不能将纤维蛋白原或血球带入反应微孔中，避免出现假阳性或假阴性。加样器必须经过校准；加样速度不可以太快，加样太快无法保证微量加样器的准确性和均一性；避免加在孔壁上部，加在孔壁上部的非包被区易导致非特异性吸附；避免样本溅出或产生气泡，溅出会对邻近孔造成污染，出现气泡则反应液界面有差异。在手工操作中，如果标本过多要分批检测，因为加样过多会造成放入浴箱前等待时间过长，特别是室内温度较高时。在滴加试剂时一定注意滴加的角度和速度，滴加太快容易出现重复滴加或加在两孔之间，这样会在孔内非包被区出现非特异吸附，而引起非特异显色。加样完毕后及时封板、震荡、放入浴箱。注意震荡的速度不易过快，避免样本溅到封条上影响反应效果，而且在揭封时容易把封条上的溅滴污染到邻孔。

4 技巧浴温

因为ELISA是一种固相免疫测定，抗原抗体的结合反应在固相上进行（必须在一定的温度和一定的时间条件下）。因此，一定要按使用说明步骤严格控制温度和时间，值得注意的是如果室温达不到25℃左右，可能会出现弱阳性样本测定漏检情况，为了使反应微孔尽早达到37℃，可事先在水浴箱中放一方盘或大饭盒，内附一层浸透水的纱布，然后将反应板直接放在纱布上，这样就会使反应微孔底部直接与37℃湿布接触，而充分达到反应温度。

5 标准洗板

为保证检测的准确性，洗板是及其关键的一步，如果洗板不正规，极易造成花板现象。因此，配制洗板液的浓度尤为重要。如果是手工洗板，既要保证微孔中加满洗液，又要避免孔与孔之间液体交叉，而且在每次加入洗液后，一定要放置2-3分钟，然后甩干，再用吸水纸拍干，甩板的速度一定要快，动作要干脆利落，这样可以避免洗液甩入邻孔，洗涤次数不可少于4-5次，特别是最后一次洗涤后，一定要彻底拍干，然后进行下一步操作。如果是洗板机洗板，一定注意洗液量要充足，洗板针要通畅，洗板机内部管道要清洁。

6 检测结果

经过以上严谨的操作后，在判断结果时不可忽视终止液。在最后加入终止液时要避免滴液产生气泡，从而导致假阳性出现。要保证酶标板底部清洁，确保检测质量。

7 质量控制

每次实验应设阳性与阴性对照，且要求设双孔对照。有些实验室为了节约或其他原因，只设单孔对照，这样做法不符合要求，应避免。为了保证实验室的质量，必须制备标准曲线，根据标准曲线的走向，判断其监测的质量，如果未做到这一点，其监测质量没有客观的指标进行衡量，因此，应该引起高度重视。

以上是我在长期的检验工作中积累的经验。为保证检验质量，在实际工作中，要养成严谨的工作作风，严格执行操作规程。