不同产地淫羊藿中4种活性成分含量的高效液相色谱法测定_雷永涛

箭叶淫羊藿 朝鲜淫羊藿
Epimedium sagittatum （ Sieb． et Zucc． ） Maxim． Epimedium koreanum Nakai
时测定四种产地淫羊藿中朝藿定 A、朝藿定 B、朝藿定 C 及淫羊 2． 2 供试品溶液的制备 分别取 4 种产地样品粗粉约 0． 2 g，精
淫羊藿为小檗科植物淫羊藿 Epimedium breviconru Maxim． ， 2 方法与结果
箭叶淫羊藿 Epimedium sagittatum （ Sieb． et Zucc． ） Maxim． ，柔毛淫 2． 1 混合对照品溶液的制备 取朝藿定 A、朝藿定 B、朝藿定
羊藿 Epimedium pubescens Maxim． ，或朝鲜淫羊藿 Epimedium ko- C、淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇配制成浓度依次为 reanum Nakai 的干燥叶。味辛甘，性温，具有补肾阳，强筋骨，祛 52． 0，50． 0，92． 0，40． 0 mg· L －1 的混合标准溶液，用 0． 45 μm 微
r = 0． 999 7 r = 0． 999 5 r = 0． 999 9 r = 0． 999 7
线性范围 / μg
0． 052 ～ 4． 160 0． 050 ～ 4． 000 0． 092 ～ 7． 360 0． 040 ～ 3． 200
检测限 / ng（ S / N = 3）
8． 1 10 9． 2 8
提取 2 次。提取液用 0． 45 μm 微孔滤膜抽滤，取滤液即得。
1 仪器与试药
2． 3 色谱条件 色谱柱为 Dikma C18 （ 250 mm × 4． 6 mm，5 μm） ；
美国 Aglient1200 高效液相色谱仪 （ 含自动进样器、四元泵、 流动相： 流动相以乙腈 （ A） － 水 （ B） 梯度洗脱 （ 0 ～ 35 min，15
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2013 VOL． 24 NO． 6
时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 6 期
HPLC 分析，考察加样回收率。这 4 种黄酮类成分的加样回收率的测定结 果见表 3。 2． 7 样品测定 取 4 种产地淫羊藿，按上述“2． 2”供试品溶液制备方法及 “2． 3”色谱条件进行测定，以外标法计算含量。样品测定结果见表 4。对照 品，淫羊藿样品色谱图见图 1。
曼思特生物科技有限公司，批号依次为： MUST － 11070901、MUST 值为纵坐标 （ Y） 对进样质量 μg 为横坐标 （ X） 进行回归，得到各
－ 11062311、MUST － 11062312、MUST － 11062313。甲醇、乙腈均 对照品溶液标准曲线，回归方程见表 2。结果表明朝藿定 A、朝
测定结果表明，这四个产地淫羊藿中的朝藿定 A、 朝藿定 B、朝藿定 C 及淫羊藿苷的含量差异较大，其 中产自甘肃的淫羊藿品质较好，4 种活性成分的含量 都 高 于 其 他 三 个 产 地，且 淫 羊 藿 苷 的 含 量 最 高 （ 17． 203 mg·g － 1 ） 。产自贵州的淫羊藿中的朝藿定 C 含量约为淫羊藿苷含量的 4． 5 倍，产自吉林的淫羊藿 中的朝藿定 C 含量约为淫羊藿苷含量的 2． 4 倍，产自 陕西的淫羊藿中的朝藿定 C 含量约为淫羊藿苷含量 的 2． 6 倍，该结果表明，朝藿定 C 在这 3 个产地中的 含量均高于淫羊藿苷的含量。由此可见，对淫羊藿的 品质评价，应当综合考虑朝藿定 A、朝藿定 B、朝藿定 C 及淫羊藿苷的含量。
时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 6 期
LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2013 VOL． 24 NO． 6
不同产地淫羊藿中 4 种活性成分 含量的高效液相色谱法测定
雷永涛，梁 妍，郝小燕* ，裘 璐，胡朝阳
（ 贵阳医学院药学院，贵州 贵阳 550004）
为色谱纯，水为纯化水，其余试剂均为分析纯。淫羊藿 （ 产地依 藿定 B、朝藿定 C 和淫羊藿苷四种溶液的进样量依次在 0． 052 ～
次为甘肃、贵州、吉林、陕西） 经贵阳医学院药学院生药学教研室 4． 160 μg，0． 050 ～ 4． 00 0 μg，0． 092 ～ 7． 630 μg，0． 040 ～
朝藿定 A 3． 349 0． 390 1． 625 1． 266
朝藿定 B 4． 859 0． 754 2． 591 2． 138
朝藿定 C 11． 768 3． 967 10． 887 9． 818
mg·g － 1
淫羊藿苷 17． 203 0． 886 4． 125 4． 124
将外标法实测含量与一测多评法计算的含量，经 t 检验比较，P ＞ 0． 05 ，表明两种方法没有显著性差异。 本实验结果进一步表明一测多评法用于淫羊藿的品质 评价是可行的。 3 讨论
定量限 / ng （ S / N = 10）
26． 7 33． 3 30． 6 26． 4
名称 朝藿定 A 朝藿定 B 朝藿定 C 淫羊藿苷
n =6
表 3 四种黄酮成分的加样回收率测定
样品中含量 / mg 0． 039 0． 075 0． 397 0． 089
加入量 / mg 0． 040 0． 075 0． 400 0． 090
风湿功效［1］。早在《神农本草经》中就将其列为中品，被认为有 孔滤膜抽滤，取滤液即得，置于 4 ℃ 冰箱，备用。
“利小便，益气力，强志”等功效，主治“阴痿绝伤，茎中痛”等症。
淫羊藿的主要化学成分为黄酮类化合物、多糖、木质素、生物碱、 挥发油及一些微量的元素［2］。黄酮类化合物在淫羊藿中含量较
产地 甘肃
检出量 / mg 0． 076 0． 147 0． 785 0． 173
平均回收率（ % ） 96． 20 98． 00 98． 49 96． 64
RSD（ % ） 2． 32 2． 03 1． 82 2． 47
样品编号 1 2 3 4
n =3
产地
甘肃 贵州 陕西 吉林
表 4 不同产地淫羊藿含量测定结果
光二极管阵列检测器 DAD、柱温箱） ，日本岛津 AY － 120 电子分 % A ～ 27% A； 35 ～ 55 min，27% A ～ 35% A ） ； 流 速 1． 0 ml · 析天平，KQ － 2508 型超声波清洗器 （ 昆山市超声仪器有限公 min －1 ； 柱温 30℃ ； 紫外检测波长 270 nm。
名称 淫羊藿
Hale Waihona Puke 表 1 淫羊藿样品拉丁名 Epimedium breviconru Maxim．
高，有较强的生理活性，这些黄酮类化合物主要为朝藿定 A、朝藿 贵州
黔岭淫羊藿
Epimedium leptorrhizum Stearn
定 B、朝藿定 C 及淫羊藿苷等。目前关于中药材多指标含量测
陕西 吉林
定主要有外标法和一测多评法［3，4］，本文采用 HPLC － DAD 法同
表 2 四种黄酮的回归方程，线性范围以及检测限和定量限
名称
回归方程
相关系数
朝藿定 A Y = 1 390． 1 X + 30． 276 朝藿定 B Y = 1 783． 8 X － 80． 899 朝藿定 C Y = 1 820． 4 X + 16． 883 淫羊藿苷 Y = 2 162． 7 X － 49． 101
2． 8 一测多评法计算指标成分含量 于霄等［5］通过实验证实，一测多评法 与外标法在淫羊藿的质量控制中没有显著性差异，不同实验条件下各成分 之间的校正因子重现性良好。我们通过实验，以淫羊藿苷（ 简称： 苷） 为内 标，所得淫羊藿苷对朝藿定 A、朝藿定 B、朝藿定 C （ 简称： A，B，C） 的校正 因子依次为： f苷/A = 0． 923，f苷/B = 0． 791，f苷/C = 0． 869，计算出不同产地淫 羊藿中朝藿定 A、朝藿定 B、朝藿定 C 的含量． 见表 5。
关键词： 朝藿定 A； 朝藿定 B； 朝藿定 C； 淫羊藿苷； 品质评价 DOI 标识： doi： 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2013． 06． 050 中图分类号： R284． 2 文献标识码： A 文章编号： 1008-0805（ 2013） 06-1404-02
的色谱条件进行 HPLC 分析，连续进样 5 次，发现朝藿定 A、B、C 以及淫羊藿苷的峰面积的相对标准偏差（ RSD） 依次为 0． 11% ， 0． 12% ，0． 14% ，0． 17% ，说明仪器精密度良好。
按“2． 2”中的样品处理方法制备样品溶液，存放于 4 ℃ 冰箱 中，每隔 3 h 按“2． 3”中的色谱条件进样分析，连续分析 24 h，计 算各组分峰面积的 RSD 值。结果表明，朝藿定 A、B、C 以及淫羊 藿苷的峰面积的 RSD 分别为 1． 46% ，1． 75% ，2． 03% ，1． 96% 。 表明样品在 24 h 内稳定可满足分析测定要求。 2． 6 加样回收率试验 取已知含量的同一批淫羊藿粉末 （ 贵州） 约 0． 1 g，共取 6 份，精密称定。按照 1∶ 1 比例分别加入适量混 合 对 照 品 （ 以 溶 液 的 形 式 加 入 ） ，按 照“2 ． 2 ”方 法 处 理 ，进 行
中药字（ 2010） 5021］； 贵阳市科学技术计划项目［黔科合中药字（ 2010） 筑科农合同 字 1 － 中 － 06 号］ 作者简介： 雷永涛（ 1986-） ，男（ 汉族） ，陕西宝鸡人，现为贵阳医学院在读 硕士研究生，学士学 位，主 要 从 事 天 然 产 物 工 艺 研 究 及 质 量 标 准 研 究 工 作． * 通讯作者简介： 郝小燕（ 1955-） ，女（ 汉族） ，贵州贵阳人，现任贵阳医学 院药学院教授，学士学位，主要从事天然产物成分分析和中药制剂制备工 艺及质量标准工作．
藿苷的含量，且比较了一测多评法与外标法的测定结果，两种方 密称定，置于具赛三角瓶中，加入 60% 乙醇 10 ml，摇匀，称重，40
法所得结果经 t 检验比较，无显著性差异，为用多指标测定评价 ℃ 超声波提取 40 min 后再次称重（ 用溶剂补足减少的重量） ，共
淫羊藿的品质提供了一定的科学依据。
司） ，日本东京 N1000DNA 旋转蒸发仪，DFT － 200 型手提式高速 2． 4 线性关系考察 精密量取混合对照品溶液 0． 1，0． 5，1． 5，
中药粉碎机（ 温岭市林大机械有限公司） 。
2． 5，4． 0，8． 0 ml，分别置于 10 ml 量瓶中，用甲醇定容，分别进样
淫羊藿苷、朝藿定 A、朝藿定 B 及朝藿定 C 对照品购于成都 10 μl，照上述色谱条件测定其峰面积。以各对照品峰面积积分
摘要： 目的 用 HPLC 法同时测定淫羊藿中朝藿定 A、朝藿定 B、朝藿定 C 及淫羊藿苷的含量，对不同产地淫羊藿进行品
质评价。方法 采用 Dikma C18 色谱柱 （ 250 mm × 4． 6 mm，5 μm） ，流动相以乙腈 （ A） － 水 （ B） 梯度洗脱 （ 0 ～ 35 min， 15 % A ～ 27 % A； 35 ～ 55 min，27 % A ～ 35 % A ） ，流速： 1． 0 ml·min －1 ，检测波长： 270 nm，柱温： 30 ℃ 。结果 4 种成分均 能达到基线分离，线性良好。不同产地淫羊藿中 4 种成分含量差异较大，其中产自甘肃的淫羊藿品质较好。结论 该方 法操作简便，重现性好，可作为淫羊藿的品质评价方法。
关于淫羊藿 质 量 控 制 的 相 关 研 究 较 多［6，7］，大 多 采用传统的外标法，但是朝藿定 A、朝藿定 B、朝藿定 C 等黄酮类对照品不宜获得且价格昂贵，这就给实际 工作带来麻烦。本文在前人的研究基础上，进一步证 实了一测多评法可用于淫羊藿的品质评价。
参考文献：
a － 淫羊藿酮对照品 b － 甘肃样品 c － 贵州样品 d － 陕西样品 e － 吉林样品 图 1 淫羊藿样品色谱图
龙庆德老师鉴定为小檗科植物。鉴定结果见表 1。
3． 200 μg范围之间与峰面积积分值线性关系良好。
2． 5 精密度与稳定性试验 将 4 种黄酮对照品溶液按“2． 3”中
收稿日期： 2012-11-02； 修订日期： 2013-04-03 基金项目： 贵州省科技厅中药现代化科技产业研究开发专项项目［黔科合