新生小鼠皮肤成纤维细胞的分离培养与鉴定

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Ｍｅｈｏ：Ｆｒｔｙｋｎｗａａｅｒｍｅｏｌｂｃｍｉｅａｄｍａｅｉｔｔｄｓｉｓ，ｓｉｓｔｋｎｆｏｎｗｂｒＢａ／ｃｎｄｎｏ１ｍｍｔｓｕｓｗｉｃｓｏｓｓｅｉｌ．ｅｏｄｙｌｎｉｓｅｔｓｉｓｒｔｒｌｙＳｃｎｌ，ｈｅ
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ＨＵＳｘｎＮＸａｙｎ，ＡＧＪｘｎＧ０Ｆｎｇａｆｉ１Ｉｉａ￣ＷＮａｕ２Ａｅｇｕｎｕａ，ｏｉ，
【要】目的：立一种简单易行的自新生小鼠皮肤分离培养成纤维细胞的方法，摘建并对分离细胞进行鉴定。法：菌方无取新生Ｂｌ／鼠背部皮肤，碎呈１ｍｍ大小，织块均匀放置于培养皿并以ＤＭ（１％胎牛血清）养基对ａｂｃ小剪组ＭＥ含０培组织块进行培养；以胰蛋白酶消化分离细胞一新贴壁法对分离培养细胞进行纯化；ＮＨ３３细胞为对照，重以ＩＴ免疫荧光、流式细胞术、ｓｒｌｔ测波形蛋白表达情况以对培养的成纤维细胞进行鉴定。结果：生小鼠背部皮肤组Ｗｅｔｎｂｏ检ｅ新织培养３ｄ时可见细胞呈细长梭形或呈多角形，织培养５ｄ后可见大量细胞自组织块游离生长．织培养７ｄ后组组可见细胞呈单层漩涡状排列或纵横交错。壁细胞团呈放射状生长。免疫荧光、式细胞术、ｓｒｌ检测发现贴流Ｗｅｔｎｂｏｅｔ分离细胞和ＮＨ３３细胞均表达波形蛋白：流式细胞术证实分离的成纤维细胞波形蛋白表达阳性率和平均荧光密ＩＴ
Ｔｉｄｙｈｕｆａｉｎｏｉｒｂａｔｓｃｍｐｅｅｙｄｇｓｉｇｃｌｔｒｐｉｄｒ — ｘｌｎｉｇｃｌｓｉｔｉｈｓｈｒｌ，ｔｅｐｒｉｔｆｆｏｌｓｓｗａｏｌｔｄｂｉｅｔｎｅｌｗｉｔｓｎａｅｅｐａｔｅｌｎｏｄｓｅ．ｉｃｏｂｓｈｙｎｎＬｓｌ，ｈｉｎｉｘｒｓｉｎｏｂｏｌｓｓｗａｄｎｉｅｙｉａｔｔｅｖｍｅｔｅｐｅｓｏｆｆｒｂａｔｓｉｅｔｄｂｍｍｕｏｌｏｅｃｎｅｌｏｃｔｍｅｒｄＷｅｔｒｌｔｙｎｉｉｆｎｆｕｒｓｅｃ，ｆｗｙｏｔａｓｅｂｏ．Ｒｅｙｎｎ－
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度分别为１．３３３％和９８，ＮＨ３３细胞波形蛋白阳性率和平均荧光密度分别为２．１．９而ＩＴ８１％和１．６４１。结论：分离培养的细胞具有成纤维细胞的形态学特征，表达成纤维细胞的特征分子波形蛋白。并以组织块直接培养法成功自新生小
２１１第卷２０年Ｏ８第９１月期
・专家论坛・
新生小鼠皮肤成纤维细胞的分离培养与鉴定
胡素贤，晓妍，嘉逊，倪王高丰光１厦门大学附属第一医院呼吸内科，．福建厦门３１０２厦门大学医学院基础医学部免疫学实验室，建厦门６０３；．福３１０６０５
鼠皮肤分离培养成纤维细胞，建立肿瘤体外模拟微环境提供实验材料和研究基础。为
【键词１生小鼠；纤维细胞；外培养；形蛋白关新成体波
【中图分类号１３２１９．Ｒ【文献标识码】Ａ【章编号】１７ — ２０（０１１ｂ）０５０文６３７１２１）０（一０ — ４
１ＤｐｒｎｆＲｅｐｒｔｒｄｃｎ，ｔｅＦｒｔＡｆｉｔｄＨｏｐｔｌｏｉｍｅｎｖｒｉ，ＦｊｎＰｏｉｃ，Ｘｉｍｎ．ｅａｔｔｏｓｉｏｙＭｅｉｉｅｈｉｆｌｅｓｉｆＸａｎＵｉｅｔｕｉｒｖｎｅｍｅａｓｉａａｓｙａａｅ３１０，ｈｎ；．ｐｒｎｆＩｍｕｏｏｙＢｓｄｃｅＳｉｃｎｔｅＭｅｉａＣｌｇｆｉｍｅｎｖｒｉ，ｕｉ６０３Ｃｉａ２Ｄｅａｔｔｍｅｏｍｎｌｇ，ａｉＭｅｉｉｃｎｅｉｄｃｌｏｅｅｏａｎＵｉｅｔＦｊｎｃｎｅｈｌＸｓｙａ
ｔｓｅｅｅｅｐａｔｄｉｔｕｔｒｉｅｑｉｂｕｎｅｉＭＥ（ｃｕｉｇ１％ｆｔｏｉｅｓｒｍ）ｄｕｉｕｓｒｘｌｎｅｏｃｌｅｄｓｓｉｅｕｌｒｍｍａｎｒｗｔＤＭｉｌｄｎ０ｅｂｖｎｅｕｍｅｉｍ．ｓｗｎｕｈｎｉｉｈｎｌａ