小鼠淋巴成纤维细胞使用说明
小鼠成纤维细胞的marker基因_概述说明
小鼠成纤维细胞的marker基因概述说明1. 引言1.1 概述引言部分旨在给读者提供一个总览，介绍本篇长文的主题和内容逻辑。
本文将重点探讨小鼠成纤维细胞的marker基因，这些基因对于研究和治疗疾病具有重要意义。
在接下来的章节中，我们将详细讨论marker基因的定义、已知小鼠成纤维细胞marker基因以及它们的表达调控机制。
此外，我们还将介绍使用不同方法和技术检测marker基因的实用方法，并探讨这些marker基因在疾病诊断和治疗中的应用。
1.2 文章结构本文分为五个主要部分：引言、小鼠成纤维细胞的marker基因、marker 基因的检测方法和技术、marker基因在疾病诊断和治疗中的应用以及结论与展望。
1.3 目的本文目的在于为读者提供一份关于小鼠成纤维细胞marker基因领域最新进展以及相关应用领域的全面概述。
通过深入了解这些marker基因及其调控机制，我们可以更好地理解小鼠成纤维细胞的功能和性质，为疾病的诊断和治疗提供更准确、有效的方法。
此外，我们还将探讨当前marker基因研究的不足之处，并展望基于marker基因的治疗策略未来发展的前景。
归纳总结这些信息将为相关领域的科学家和医生提供指导，以推动其在临床实践中的应用和发展。
通过本文所呈现内容的详尽介绍，我们希望进一步促进对小鼠成纤维细胞marker基因及其潜力的理解和研究。
2. 小鼠成纤维细胞的marker基因2.1 marker基因的定义与意义在生物学研究中，marker基因是指特定细胞类型或组织中表达的特异性基因。
这些基因的表达模式可以用来标记和识别特定细胞类型或确定其功能。
对于小鼠成纤维细胞而言，marker基因的发现和研究对于了解成纤维细胞在生理和病理过程中的角色非常重要。
2.2 已知小鼠成纤维细胞marker基因已经有一系列已知的小鼠成纤维细胞marker基因被发现和研究。
其中一些已知的小鼠成纤维细胞marker基因包括：- COL1A1：编码胶原蛋白Iα链，是成纤维细胞合成和分泌的主要成分之一。
小鼠肾成纤维细胞使用说明
小鼠肾成纤维细胞小鼠肾成纤维细胞产品说明：为使能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。
派瑞金提供的小鼠肾成纤维细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。
研发的小鼠肾成纤维细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。
同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。
小鼠肾成纤维细胞注意事项：1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
3. 请用相同条件的培养基用于细胞培养。
培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。
4. 建议收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。
5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。
小鼠肾成纤维细胞其他相关小鼠原代细胞：小鼠小肠粘膜上皮细胞小鼠大隐静脉平滑肌细胞小鼠肺微血管内皮细胞小鼠冠状动脉平滑肌细胞小鼠肺血管平滑肌细胞小鼠大隐静脉内皮细胞小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞小鼠冠状动脉内皮细胞小鼠气管上皮细胞小鼠骨细胞小鼠气管平滑肌细胞小鼠滑膜细胞小鼠肺成纤维细胞小鼠骨骼肌细胞小鼠支气管上皮细胞小鼠表皮细胞小鼠支气管成纤维细胞小鼠真皮成纤维细胞小鼠肺大静脉平滑肌细胞小鼠破骨细胞小鼠肺大动脉平滑肌细胞小鼠皮肤肥大细胞小鼠肺大动脉内皮细胞小鼠前脂肪细胞小鼠肺动脉成纤维细胞小鼠成骨细胞小鼠肺大静脉内皮细胞小鼠关节软骨细胞小鼠气管和支气管上皮细胞小鼠胎儿表皮角质形成层细胞小鼠胰岛细胞小鼠成年表皮角质形成层细胞小鼠胰腺星状细胞小鼠皮下脂肪细胞小鼠胰腺导管上皮细胞小鼠内脏脂肪细胞小鼠颌下腺上皮细胞小鼠脑动脉血管内皮细胞小鼠腮腺细胞小鼠脑动脉血管平滑肌细胞小鼠乳腺上皮细胞小鼠脑静脉血管内皮细胞小鼠胰腺上皮细胞小鼠脑静脉血管平滑肌细胞小鼠甲状腺上皮细胞小鼠脑膜细胞小鼠淋巴管内皮细胞小鼠神经胶质细胞小鼠淋巴成纤维细胞小鼠海马神经元细胞小鼠外周血白细胞小鼠脑微血管内皮细胞小鼠骨髓基质细胞小鼠脑成纤维细胞小鼠食管上皮细胞小鼠神经小胶质细胞小鼠食管平滑肌细胞小鼠雪旺氏细胞小鼠肠动脉内皮细胞小鼠小脑颗粒细胞小鼠肠静脉内皮细胞小鼠嗅鞘细胞小鼠肝实质细胞小鼠视网膜微血管内皮细胞小鼠肝动脉内皮细胞小鼠小梁网细胞小鼠肝动脉平滑肌细胞小鼠视网膜色素上皮细胞小鼠小肠血管内皮细胞小鼠视网膜muller细胞小鼠小肠隐窝上皮细胞小鼠虹膜色素上皮细胞小鼠肝内胆管上皮细胞小鼠晶状体上皮细胞小鼠胃粘膜上皮细胞小鼠角膜上皮细胞小鼠肝窦内皮细胞小鼠视网膜神经节细胞小鼠肝星形细胞小鼠角膜成纤维细胞小鼠直肠平滑肌细胞小鼠脉络膜血管细胞小鼠小肠平滑肌细胞小鼠牙乳头细胞小鼠结肠平滑肌细胞小鼠肝外胆管上皮细胞小鼠肠上皮细胞小鼠肝Kupffer细胞小鼠肠微血管细胞小鼠骨髓间充质干细胞小鼠肠巨噬细胞小鼠下丘脑神经元细胞小鼠子宫内膜上皮细胞小鼠睾丸支持细胞小鼠卵巢颗粒细胞小鼠心肌微血管内皮细胞小鼠子宫颈上皮细胞小鼠真皮微血管上皮细胞小鼠子宫平滑肌细胞小鼠胚胎成纤维细胞小鼠卵巢上皮细胞小鼠心脏干细胞小鼠子宫成纤维细胞小鼠神经干细胞小鼠卵巢成纤维细胞小鼠骨髓来源内皮祖细胞小鼠肾实质细胞小鼠椎间盘髓核细胞小鼠肾系膜细胞小鼠肾足突细胞小鼠膀胱上皮细胞小鼠肾小管平滑肌细胞小鼠膀胱平滑肌细胞小鼠肾成纤维细胞小鼠肾动脉内皮细胞小鼠尿道上皮细胞小鼠肾动脉平滑肌细胞小鼠输尿管上皮细胞小鼠肾小管上皮细胞小鼠肾管状上皮细胞小鼠肾小球内皮细胞小鼠心肌细胞小鼠前列腺上皮细胞小鼠心肌成纤维细胞小鼠肾上皮细胞小鼠主动脉内皮细胞小鼠膀胱成纤维细胞小鼠主动脉平滑肌细胞小鼠血管外膜成纤维细胞。
MEF小鼠胚胎成纤维细胞知识总结
MEF小鼠胚胎成纤维细胞知识总结2008-06-19 00:00 来源：丁香园点击次数：1517 关键词：MEF小鼠胚胎成纤维细胞知识总结分享到：收藏夹腾讯微博新浪微博开心网小鼠胚胎成纤维细胞的富集1、给13-14天的孕鼠注射大约0.5ml阿佛丁。
当鼠麻醉后，实施断颈法处死小鼠。
2、用70％乙醇擦拭腹部，把皮肤向后拉，暴露出腹膜。
用消毒过的工具，剪开腹壁以暴露出子宫角。
将子宫角移到10cm的皿里。
用10ml不含钙镁离子的PBS洗三遍。
3、用剪刀剪开每一测的胚囊,并将胚胎移到培养皿中。
4、用两副钟表镊子将胎盘和膜与胚胎分离开，分离后切除内脏（所有深色的东西）。
将胚胎转移到(有盖)培养皿中，用10ml不含钙镁离子的PBS洗三遍。
5、用带有弯钩的眼科剪将组织剪碎，当你剪的很累以致于不能再剪的时候，加入2ml胰蛋白酶/ED TA继续剪。
再加入另外5ml胰蛋白酶/EDTA，并在37℃孵育大约20分钟。
此时，返回至第一步，对下一只鼠进行操作。
6、执行1－4步，到将胚胎置于胰蛋白酶/EDTA中这一步。
7、吹打胰蛋白酶/EDTA中的胚胎，直到有很少的组织物残留。
将皿放回培养箱再孵育10分钟。
8、用20ml培养基以终止胰蛋白酶/EDTA的消化，将皿中的物质转移至50ml锥形管中。
9、混匀管内的物质，加入到含有20ml培养基的T75培养瓶中。
每个培养瓶中装大约3个胚胎。
10、将这些培养瓶放在培养箱中37℃培养过夜。
11、将胚胎置于PBS中，并重复第5步。
12、第二天更换培养基，以去除碎片和中毒的细胞及其分泌的物质。
13、当培养瓶中的细胞长到80-90%汇合时并仍处于指数生长期时，是冻存细胞的最佳时期。
一般说来，这发生在准备胚胎的第二天。
这可能或早或晚发生，所以请注意观察你的培养瓶。
注释：我们已用CF－1品系的鼠制备了成纤维细胞。
培养基成分：88％DMEM10％FBS1％NEAA1% 双抗对于新建立的细胞系，要对样本进行支原体检测。
原代小鼠心肌成纤维细胞提取
原代小鼠心肌成纤维细胞提取方法1.提前配置0.8%胰酶 3mL、0.1%胶原酶II 10mL（均用DMEM配置），放入37℃水浴锅中预热15min；准备1个50mL的离心管，提前加入10mL含10%FBS的完全培养基，冰浴备用；2.取5-10只7天出生内的C57乳鼠，用灭菌或消毒的组织剪剪开胸腔，迅速取出心脏，置于含2%双抗的预冷的DMEM培养基中；3.将心脏组织转移至超净台，用DMEM反复清洗，取出血液、大血管组织，将组织放入1个1.5mL的EP管中，充分剪碎（小于1mm3）;4.用巴氏管向组织块中加入1mL预热的胰酶，反复吹打、吸入至含胰酶的离心管中，37℃水浴加热3min，适当振荡；[循环1]5.吸取上清液丢弃，余下的组织块中加入2mL胶原酶，37℃水浴加热5min，期间每分钟振荡1次，吸取上层液体至冰浴的完全培养基中；[循环2]6.向组织块中再次加入2mL新鲜、预热的胶原酶,用巴氏管或移液枪吹打混匀1min后（约20次）后水浴消化4min，随后吸取上层液体至冰浴的完全培养基中；[循环3]7.向组织块中再次加入2mL新鲜、预热的胶原酶,用巴氏管或移液枪吹打混匀2min后（约30次），此时肉眼可见组织块逐渐变小，呈透明粘液状，随后再次水浴消化4min，随后吸取上层液体至冰浴的完全培养基中；[循环4、5]8.向组织块中再次加入1mL新鲜、预热的胶原酶,用巴氏管或移液枪吹打混匀1min后（约20次），此时肉眼可见组织块逐渐消失，消化液变得浑浊，再次水浴消化3min，随后吸取上层液体至冰浴的完全培养基中；[循环6、7]；9.将50mL离心管中的液体分装入2个15mL离心管中，1000rpm离心6min，小心吸去上清液，组织/细胞沉淀加入1mL完全培养基吹打混匀后转移至50mL的培养瓶中，加3mL完全培养基（含4%双抗），2h后可见细胞贴壁，12h内换液；2-3d后常规传代（1:2），P1-2用于实验。
3T3-L1 细胞说明书
小鼠胚胎成纤维细胞3T3-L1说明书目录号：SCSP-5038细胞名称：3T3-L1细胞描述：这株细胞是3T3（Swiss albino）通过克隆分离而得到的能连续传代的亚株，表达insulin受体。
当细胞从快速分裂到汇合和接触抑制状态的过程中，细胞会经历脂肪前向脂肪的转化。
培养基中的高血清含量会增加脂肪的积累。
检测表明鼠痘病毒（ectromelia virus，ECTV）阴性。
小鼠品系：Swiss albino细胞来源：2018年引进生物安全等级：BSL-1完全培养液配方：见下方备注批次/冻存日期：详见冻存管/培养瓶标识参考传代周期：3天左右参考传代比例：1:2-1:4参考换液频率：每周2次冻存液：完全培养液95%，DMSO5%细胞状态：成纤维细胞，贴壁生长。
支原体检测结果：阴性STR鉴定结果：①该株细胞DNA进行小鼠细胞STR分型结果显示，扩增后图谱清晰，分型结果良好：1-1：10,15；1-2：13；2-1：9；3-2：14；4-2：19.3；5-5：13,15；6-4：15.3；6-7：12, 15；7-1：25.2,29；8-1：15,16；11-2：15；12-1：19；13-1：15.1；15-3：20.3；17-2：12,15；18-3：17,21；19-2：12；X-1：26。
②该株细胞确为小鼠细胞，没有人源细胞污染。
小鼠胚胎成纤维细胞3T3-L1细胞照片参考文献：备注：1.小鼠胚胎成纤维细胞3T3-L1完全培养液配方（100ml）：DMEM(Invitrogen11960044)87mlNewborn calf serum(Ausbian)10mlGlutamax（invitrogen35050061）1mlNon-essential Amino Acids,100⨯(Invitrogen11140050)1mlSodium pyruvate100mM Solution（invitrogen11360070）1ml不可使用胎牛血清（FBS）2.该细胞起始接种密度应在3⨯103/cm2，并且在细胞达到80%融合或者密度介于5⨯104-6⨯104/cm2时传代，避免细胞完全融合。
达优 小鼠 TGF-β1 ELISA 试剂盒说明书
产品信息和操作指南Mouse TGF-β1Precoated ELISA kitCat#:1217102本试剂盒专用于科研，而非用于诊断Mouse TGF-β11217102目录产品简介 (1)知识背景 (1)试剂盒组分 (2)需要实验者自行准备的试剂与仪器 (2)注意事项 (3)试剂的配制 (6)操作过程 (8)结果分析 (10)试剂盒的保存 (10)操作步骤一览表 (11)参考文献 (12)ELISA测定中可能出现的问题及解决方法 (13)达优®ELISA系列产品 (16)1、产品简介：达优®小鼠TGF-β1ELISA试剂盒是通过酶联免疫吸附技术，体外定量检测小鼠血清、血浆、缓冲液或细胞培养液中的TGF-β1，可同时检测天然的和重组的TGF-β1。
本试剂盒为预包被板，整个过程孵育时间不超过4小时，洗涤12次。
本试剂盒专用于科研，而非用于诊断。
使用前请仔细阅读说明书并检查试剂盒组分，若有任何疑问请与北京行健雅生物技术有限公司联系，E-mail：**********************。
检测范围：1000-15.6pg/mL灵敏度：5pg/mL重复性：板内变异系数＜10％，板间变异系数＜15％。
2、知识背景：转化生长因子-β1（TGF-β1）能使正常的成纤维细胞的表型发生转化,具有细胞抑制和促进生长双重作用。
TGF-β1分子量25kDa，非糖基化同型二聚体蛋白，由二硫键连接。
TGF-β1基因结构具有高度保守性，人和小鼠TGF-β1的同源性高达99%（1-4）。
TGF-β1在治疗伤口愈合，促进软骨和骨修复以及通过免疫抑制治疗自身免疫性疾病和移植排斥等方面发挥重要作用（5）。
3、试剂盒组分：4、需要实验者自行准备的试剂与仪器：1．酶标仪（建议参考仪器使用说明提前预热）2．微量加液器及吸头：P10，P50，P100，P200，P1000 3．蒸馏水或去离子水4．全新滤纸5．旋涡振荡器和磁力搅拌器6．37℃温箱5、注意事项：1.试剂应按标签说明储存，使用前室温平衡20-30分钟。
NIH-3T3 细胞使用说明书
NIH-3T3细胞使用说明书细胞基本信息产品货号YC-A013细胞名称NIH-3T3中文名称小鼠胚胎成纤维细胞细胞形态上皮样，贴壁细胞传代比例1:3~1:5培养体系90%DMEM+10%FBS源井细胞培养未加双抗，客户可视实际情况选择添加。
冻存液体系50%DMEM+40%FBS+10%DMSO特殊备注无细胞接收1)冻存细胞：如果是干冰运输的冻存细胞，收到后请立即转入液氮储存或短暂（24H)放至-80℃冰箱保存，或直接进行细胞复苏。
2)活细胞：如果是T25瓶活细胞运输，收到后用75%的酒精对T25瓶外表面进行消毒，之后放在5%CO2、37℃的细胞培养箱静置2h，静置后取出细胞瓶在显微镜下观察细胞贴壁情况和细胞汇合度，分别在200X和40X下各拍2个不同视野的细胞拍照记录。
如果汇合度达到80%以上的传代密度，可以进行传代操作，如果细胞汇合度没有达80%以上不够传代，可以将细胞瓶内的培养基吸出在50ml离心管中并标记该细胞专用培养基后备用，保留8-10ml继续培养至可传代。
注意：收到细胞后，活细胞首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否漏液、浑浊等现象。
冻存细胞若发现干冰已挥发完、冻存管瓶盖脱落、破损等异常情况，请务必拍照保留，并于收货24h内与我们联系（电话：400-688-9033；https://）。
细胞复苏1)准备工作：将完全培养液置37℃水浴锅预热30分钟，随后将冻存的细胞从液氮中取出，转移到-80℃冰箱，放置数分钟让残余液氮挥发；2)在超净台内用吸管吸取6-7mL完全培养液至15mL离心管中；3)将细胞从-80℃冰箱取出暂时放置于干冰里，复苏时稍稍甩动，去除残留的干冰和液氮，再迅速用镊子夹住盖子放入37℃水浴中快速晃动（注意：水不能没过盖子），使其在1分钟左右完全融化；4)在超净台内，用酒精棉球擦拭冻存管外壁消毒，稍稍晾干。
用单道移液器将所有融化的细胞悬液转至提前准备好的完全培养液中，盖上盖子，1100rpm室温离心4分钟收集细胞；5)超净台内小心吸弃上清，用单道移液器吸取1mL新鲜完全培养液重悬细胞至单细胞悬液，再转移至装有4mL完全培养液的T25cm2培养瓶中，写上细胞名称、复苏日期、代次，放置37℃、5%CO2饱和湿度培养箱内培养。
小鼠淋巴细胞增殖测定步骤
小鼠淋巴细胞增殖测定步骤
小鼠淋巴细胞增殖测定是用来评估免疫功能和细胞毒性的常用方法。
以下是一般的小鼠淋巴细胞增殖测定的步骤：
1. 准备小鼠：选择合适的小鼠品系和年龄，并确保小鼠健康。
2. 分离淋巴细胞：采集小鼠淋巴组织（例如脾脏或淋巴结）并进行细胞分离。
常用的方法包括机械破碎和离心分离。
3. 细胞计数与稀释：用血细胞计数器或显微镜计数细胞数目，并进行适当的稀释以获得合适的细胞密度。
4. 细胞悬液制备：将分离的淋巴细胞与培养基混合，使细胞悬浮于培养基中。
5. 细胞培养：将细胞悬液移至培养皿中，并在37°C、5% CO2
的条件下培养一段时间。
一般培养24-72小时。
6. 刺激因子处理：在培养皿中添加适当的刺激因子（如细胞激动剂或抗原），以刺激细胞增殖。
7. 溶菌酶处理：在培养结束后，加入溶菌酶等溶解剂，使未被细胞内的放射性同位素取代的DNA释放到培养基中。
8. 获得DNA：收集并离心细胞上清液，将其中的DNA沉淀。
9. 放射性测定：使用放射性技术，如液体闪烁计数器，测量
DNA中的放射性同位素含量。
10. 统计分析：根据放射性同位素的计数，计算细胞增殖水平，并进行统计分析。
这些步骤可以根据具体实验目的和方法的需求进行适当的调整和修改。
四正柏生物 小鼠IL-6 ELISA试剂盒说明书
REV20190712仅供研究，不用于临床诊断。
客服热线: 400-7060-959﹡技术支持邮箱: **************公司官网: 目录简介 ........................................................................................................................................................... - 3 -检测原理 ................................................................................................................................................... - 3 -试剂盒组分 ............................................................................................................................................... - 4 -储存条件 ................................................................................................................................................... - 5 -其他实验材料(不提供，但可协助购买) : ............................................................................................. - 5 -注意事项 ................................................................................................................................................... - 5 -样本收集处理及保存方法 ....................................................................................................................... - 6 -试剂准备 ................................................................................................................................................... - 6 -操作步骤 ................................................................................................................................................... - 8 -操作流程图 ............................................................................................................................................... - 8 -操作要点提示 ........................................................................................................................................... - 9 -结果判断 ................................................................................................................................................... - 9 -结果重复性 ............................................................................................................................................. - 10 -灵敏度 ..................................................................................................................................................... - 10 -特异性 ..................................................................................................................................................... - 10 -参考文献 ................................................................................................................................................. - 10 -该产品由北京四正柏生物科技有限公司研制。
淋巴细胞增殖实验报告
淋巴细胞增殖实验报告一、实验目的本实验旨在通过体外培养淋巴细胞，观察不同刺激条件下淋巴细胞增殖的情况，探讨淋巴细胞增殖与免疫应答的关系，为进一步研究免疫调节机制提供实验依据。
二、实验材料1. 实验动物：昆明种小鼠，体重20-25g，雌雄不限。
2. 试剂：RPMI-1640培养基、胎牛血清、淋巴细胞分离液、植物血凝素（PHA）、刀豆素A（ConA）、胰蛋白酶、二甲基亚砜（DMSO）、ELISA试剂盒等。
3. 仪器：超净工作台、CO2培养箱、倒置显微镜、酶标仪、流式细胞仪等。
三、实验方法1. 淋巴细胞分离：取小鼠颈椎脱臼处死，无菌操作下取出脾脏，加入胰蛋白酶消化，离心洗涤，再用淋巴细胞分离液分离淋巴细胞。
2. 淋巴细胞培养：将分离得到的淋巴细胞用RPMI-1640培养基重悬，调整细胞密度为1×10^6个/mL，加入PHA或ConA作为刺激剂，分别设置无刺激组、PHA刺激组、ConA刺激组等。
3. 细胞增殖观察：将培养的淋巴细胞置于CO2培养箱中培养，分别在24h、48h、72h、96h和120h取样，用倒置显微镜观察细胞形态变化，并计算细胞数量。
4. ELISA检测：取培养上清液，按照ELISA试剂盒说明书检测细胞因子（如IL-2、IFN-γ等）含量。
5. 流式细胞术检测：取培养的淋巴细胞，用荧光标记的抗体检测T细胞亚群（如CD4+、CD8+等）和细胞周期分布。
四、实验结果1. 细胞形态观察：随着培养时间的延长，淋巴细胞在PHA或ConA刺激下逐渐转变为淋巴母细胞，细胞体积增大，核仁明显，细胞浆内出现空泡。
2. 细胞增殖：在PHA或ConA刺激下，淋巴细胞数量显著增加，且呈时间依赖性。
3. 细胞因子检测：ELISA结果显示，在PHA或ConA刺激下，培养上清液中IL-2、IFN-γ等细胞因子含量显著升高。
4. 流式细胞术检测：流式细胞术结果显示，在PHA或ConA刺激下，T细胞亚群CD4+和CD8+的比例发生改变，且细胞周期分布发生变化。
小鼠成纤维细胞 分类
小鼠成纤维细胞可以根据其基因表达和功能特性被分为不同的类别。
以下是一些小鼠成纤维细胞的分类：
1. 泛组织成纤维细胞：这类成纤维细胞在多个组织中普遍存在，具有通用的转录图谱，例如Pi16和Col15a1基因表达集群。
2. 特化成纤维细胞：这些成纤维细胞存在于特定组织中，可能代表了特定组织特有的成纤维细胞状态，如肌成纤维细胞（myofibroblast）、炎症性成纤维细胞（inflammatory fibroblast）和抗原提呈成纤维细胞（antigen-presenting fibroblast）等。
3. 静息成纤维细胞：这些是处于非激活状态的成纤维细胞，它们在组织中的活动较低。
4. 肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）：在肿瘤微环境中，成纤维细胞可以分为不同亚群，如肌成纤维细胞和CAF1、CAF2等。
成纤维细胞具有多向分化潜能，能够在不同的微环境中分化为不同类型的细胞，并且在组织工程和损伤修复中具有重要的应用潜力。
EL-4细胞
EL-4细胞系EL-4 小鼠淋巴瘤细胞，ATCC 细胞|细胞系|细胞株|肿瘤细胞株|细胞|贴壁细胞|悬浮细胞|；细胞库管理规范，提供的细胞株背景清楚，提供参考文献和最优培养条件EL-4 小鼠淋巴瘤细胞的详细介绍EL-4 小鼠淋巴瘤细胞培养条件：完全培养基：RPMI 1640+10%胎牛血清培养条件：37.0C carbon dioxide(CO2),5%传代方法：收到细胞后，取出培养瓶在倒置显微镜下观察细胞生长情况。
（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。
具体步骤如下：1. 接收到细胞，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。
2. 用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。
3. 严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4. 细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒）。
5. 1000rpm，5min离心，重悬细胞。
6, 换新的细胞培养瓶和新鲜培养基，37℃，5%CO2培养。
注意：传代后一半用我们的培养基，一半用你们的，以免细胞不适应而造成生长不好。
冻存方法：冻存液：95%完全培养液，5%DMSO储存：液氮储存EL-4 小鼠淋巴瘤细胞，ATCC 细胞|细胞系|细胞株|肿瘤细胞株|细胞|贴壁细胞|悬浮细胞|；细胞库管理规范，提供的细胞株背景清楚，提供参考文献和最优培养条件EL-4 小鼠淋巴瘤细胞的详细介绍EL-4 小鼠淋巴瘤细胞培养条件：完全培养基：RPMI 1640+10%胎牛血清培养条件：37.0C carbon dioxide(CO2),5%传代方法：收到细胞后，取出培养瓶在倒置显微镜下观察细胞生长情况。
（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。
小鼠淋巴细胞的分离培养
小鼠淋巴细胞的分离培养
一、血液中淋巴细胞的分离：
1在1.5ML离心管中加入淋巴细胞分离液0.7ML；
2眼部采集小鼠的抗凝血，抗凝剂20%.。
3轻轻将血液加入淋巴细胞分离液的表面，立即以2000—2500转/分离心10MIN。
4小心吸取上层细胞，转移至另一1.5ML离心管中,再用HANK’S 悬浮至1.5ML，再离心，去上清，再悬浮，等待分型用。
二、鼠脾脏中淋巴细胞的分离：
1无菌采集鼠的脾脏，且灭菌注射器的弯针头轻轻扎取，尽可能使单个细胞分离，再分别用4层灭菌纱布过滤2次。
2将滤液小心加入淋巴细胞分离液中。
离心。
3 吸取上层淋巴细胞，HANK‘S液洗涤2次（尽可能去除淋巴
细胞分离液）。
4加入1640培养液进行培养。
、
*淋巴细胞分离液不低于全部液体的50%。
人类小鼠原代肺成纤维细胞分离方法
⼈类⼩⿏原代肺成纤维细胞分离⽅法Primary human/mouse lung fibroblast isolation⼈类/⼩⿏原代肺成纤维细胞分离⽅法参考⽂献(H: 1.Katharina Heinzelmann et al. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 2018; 2. Claudia A Staab-Weijnitz et al. Am J Respir Crit Care Med. 2015. FK506-Binding Protein 10, a Potential Novel Drug Target for Idiopathic Pulmonary Fibrosis; M: Isolation and characterization of mouse fibroblasts, Benjamin L. Edelman and Elizabeth F. Redente)Materials:材料：1. Digestion solution: a).Liberase TM (5401119001, Merck) solution,2.5mg/ml (HBSS);b).DNAse (D4263-5VL, Sigma), 2000U/ml(PBS)消化液：a) Liberase TM 溶液（5401119001, Merck）：溶于HBSS（终浓度2.5mg/ml）b) DNAse溶液（D4263-5VL, Sigma）：溶于PBS（终浓度2000U/ml）2. Nylon filters 40/70 µm3. Complete medium (Mouse: DMEM/F12 + 20% FBS + 1% Penicillin/Streptomycin + 0.1% Amphotericin B + 1% Glu; Human: DMEM/F12 + 20% FBS + 1%Penicillin/Streptomycin + 0.1% Amphotericin B)4. Knife (disposable)5. Syringe6. PBSDigestion solution:Steps: (Mouse from 1-13, Human from 7-13)步骤：1. Weight the mouse, calculate the amount of anesthesia, Xylazin : Kelamin : NaCl =1:4:5, 100ul/10g weight;称重⼩⿏后⿇醉2. Inject and wait 10min till the mouse sleep腹腔注射后等待10分钟3. Open abdomen and cut the artery of the kidney打开腹腔切断肾动脉4. Use syringe insert the heart and rinse with 15ml PBS until it’s white注射器灌注15ml PBS后插⼊⼼脏冲洗⾄肺部变⽩5. Take out the lung and heart in the tube with ice将⼼脏和肺取出置于冰盒中保存6. Wash with 80% ethanol in 10s在80%酒精中漂洗10秒7. Wash with PBS 3 times, 10min (Mouse); PBS 3 times, 30min (Human)PBS洗3次，每次10分钟（⽼⿏），每次30分钟（⼈），清洗时保存于冰盒中8. Dissected into pieces of 1cm2 in size and digested by digestion solution at 37°C for 1hours (shake vigorously every 15min)使⽤⼀次性⽆菌⼑⽚将组织切成⼩块，并加⼊消化液在37度⽔浴锅中静置1⼩时（每15分钟猛烈上下摇晃试管）9. Samples were filtered through nylon filters with a pore size of 70 µm使⽤70微⽶过滤器过滤标本10. Centrifuged at 400 g, 4°C for 5 minutes, resuspended in complete medium400 g, 4°C, 离⼼5分钟，离⼼后加⼊完全培养基重悬11. Samples were filtered through nylon filters with a pore size of 40 µm使⽤40微⽶过滤器过滤标本12. Centrifuged at 400 g, 4°C for 5 minutes, resuspended in complete medium400 g, 4°C, 离⼼5分钟，离⼼后加⼊完全培养基重悬13. Medium was changed after 2 days (first check) and cells were split after reaching aconfluence of 80–90%. For the present study, phLF were used in passages 4-9.2天后检查细胞状态并换液，当密度达到80–90%时可传代，原代成纤维细胞最佳使⽤为4-9代。
小鼠成纤维细胞原代培养
实验—小鼠成纤维细胞得原代培养一、实验目得１.掌握哺乳动物细胞原代培养与传代培养中得取材、消化及无菌操作等基本实验技术与操作过程。
2。
熟悉在倒置相差显微镜下观察培养细胞得形态与生长状况得方法．3。
了解细胞原代培养与传代培养得原理与方法。
二、实验原理自１７世纪下半叶Robｅrt Hooｋｅ提出“细胞"概念直至2０世纪中叶，细胞培养(Cell culture)才逐渐发展起来.现代生命科学以及相关领域得研究前提就是细胞得维持与增殖，因此,细胞培养不仅就是细胞生物学得密不可分得组成部分,而且已经成为生物化学、生物物理学、遗传学、免疫学、肿瘤学、生理学、分子生物学与神经科学、甚至临床医学得重要内容。
细胞培养也就是细胞生物学延伸至相关学科得一条主要途径。
如今,细胞培养已经成为生命科学与医学研究最常用得基础技术之一。
细胞培养就是模拟机体内生理条件,将细胞从机体中取出,在人工条件下,使其生存、生长、繁殖与传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题得研究。
细胞培养得直接目得就是维持或扩增细胞数量。
依据取材于动物组织或培养细胞,细胞培养分为原代培养与传代培养．1.原代培养(pｒimary culture)就是从供体取得组织或细胞后在体外进行首次培养直至成功地进行首次传代之前得培养。
但实际上通常把第一代至第十代以内得培养细胞统称为原代细胞培养.原代培养就是建立细胞系得第一步,其最基本得方法有两种：组织块培养法与消化培养法.组织块培养法就是指直接从机体取下组织与器官,通过组织块直接长出单层细胞,该培养法就是最常用得原代培养方法，其将刚刚离体得、生长活力旺盛得组织剪成小块接种在培养瓶中作为实验材料，一天后细胞可从贴壁得组织块四周游出并生长。
组织块培养法操作过程简便、易行,培养得细胞较易存活，适用于一些来源有限、数量较少得组织得原代培养。
消化培养法利用酶或机械方法将组织分散成单个细胞后，在不加任何粘附剂得情况下，直接移植在培养瓶壁上,加入培养基立即进行培养得方法。
淋巴细胞增殖试验的标准操作规程
淋巴细胞增殖试验的标准操作规程（编号：035）
1、目的及适用范围
该SOP用来规范MTT法检测淋巴细胞转化效率的操作。
2、主要仪器
CO2细胞培养箱、普通光学显微镜。
超净工作台（生物安全级别）、电动吸引器、移液器、细胞计数器
3、试剂及配制方法
RPIM-1640培养基、淋巴细胞分离液、MTT噻唑蓝（5mg/mL用PBS，pH=7.4配制后，过滤除菌）
4、相关器皿的预处理
玻璃制品和金属制品高压灭菌
5、操作步骤
5.1分离小鼠脾细胞
5.1.1 断颈处死小鼠，浸入75%的乙醇中浸泡1-2min。
5.1.2 在超净台中用大头针固定，小心剪开小鼠的腹部外皮，再剪开小鼠的腹腔，用镊子取出小鼠脾脏。
注意无菌操作。
5.1.3 在60mm培养皿中放入4-5mL淋巴细胞分离液，用镊子把尼龙网固定在皿上。
然后用注射器活塞轻轻研磨小鼠脾脏，使得分散的单细胞透过尼龙网进入淋巴细胞分离液中。
5.1.4 把悬有脾脏细胞的分离液转移到离心管中，然后覆盖上大约1mL的1640培养基。
5.1.5 800g离心30min。
离心结束后淋巴细胞会漂浮上来，在1640覆盖层下面聚集。
5.1.6 吸出淋巴细胞层，加入10mL 1640培养基洗涤一次，250g离心10min。
倾倒上清液，加入3-5mL含5%FBS的1640培养基重悬，细胞计数。
5.2接种细胞：用含10％FBS1640培养基配成单个细胞悬液，以每孔（1~8）×105个细胞/孔接种到96孔板，每孔体积200μL；
5.3培养细胞：同一般培养条件，培养1～2d（可根据试验目的和要求决定培养时间）；
70。
淋巴实验增殖实验报告
通过本实验，了解淋巴细胞增殖的基本原理和实验方法，掌握淋巴细胞增殖实验的操作技能，并学会分析实验结果，以期为免疫学研究和临床诊断提供理论依据。
二、实验原理淋巴细胞增殖是机体免疫系统在受到抗原刺激后，通过细胞分裂和增殖产生大量效应细胞的过程。
本实验采用丝裂原诱导法，以植物血凝素（PHA）为诱导剂，刺激外周血单个核细胞（PBMC）进行增殖，观察细胞增殖过程中细胞形态和数量的变化。
三、实验材料1. 实验动物：健康小鼠，体重18-22g。
2. 试剂：植物血凝素（PHA）、RPMI-10完全培养基、胎牛血清、二甲基亚砜（DMSO）、台盼蓝染液等。
3. 仪器：细胞培养箱、酶标仪、倒置显微镜、细胞计数板等。
4. 器材：细胞培养皿、移液器、离心机、吸管等。
四、实验方法1. 细胞制备：取小鼠外周血，加入抗凝剂，分离PBMC，用RPMI-10完全培养基洗涤、离心，弃上清，用RPMI-10完全培养基重悬细胞。
2. 细胞培养：将PBMC以1×10^6细胞/孔的密度接种于96孔板，每孔加入100μg/ml的PHA，设阴性对照孔（不加PHA）和阳性对照孔（加入PHA），置细胞培养箱中培养48小时。
3. 细胞计数：用细胞计数板对培养48小时的细胞进行计数，计算细胞增殖倍数。
4. 细胞形态观察：用倒置显微镜观察细胞形态变化，记录细胞浆扩大、出现空泡、核仁明显、核染色质疏松等特征。
五、实验结果1. 细胞计数结果：与阴性对照孔相比，PHA诱导孔的细胞数量显著增加，细胞增殖倍数约为2倍。
2. 细胞形态观察结果：PHA诱导孔的细胞浆扩大、出现空泡、核仁明显、核染色质疏松，符合淋巴细胞转化的特征。
本实验结果表明，PHA能够有效诱导PBMC增殖，细胞增殖倍数约为2倍。
这与文献报道相符，表明淋巴细胞在体外培养条件下，能够对PHA产生增殖反应。
本实验中，细胞形态观察结果显示，PHA诱导孔的细胞形态发生明显变化，符合淋巴细胞转化的特征。
小鼠淋巴细胞转化实验报告
小鼠淋巴细胞转化实验报告背景淋巴细胞转化实验是一种常用的实验方法，用于研究免疫系统对外界刺激的反应。
该实验通过刺激小鼠淋巴细胞，观察和分析其增殖和分化情况，以了解免疫细胞对特定抗原的应答能力。
淋巴细胞是免疫系统中的重要组成部分，主要负责识别和攻击入侵体内的病原体。
在免疫应答过程中，淋巴细胞会发生转化，即从静止状态进入活跃状态，并开始增殖和分化为具有特定功能的效应细胞。
实验设计本次实验旨在通过刺激小鼠淋巴细胞，观察其在不同条件下的转化情况，并进一步分析其增殖和分化能力。
具体实验设计如下：1.实验组：将小鼠淋巴细胞与特定抗原共培养。
2.阳性对照组：将小鼠淋巴细胞与已知刺激剂共培养。
3.阴性对照组：将小鼠淋巴细胞与无刺激剂共培养。
4.观察时间点：分别在培养开始后的24、48和72小时观察和采样。
实验步骤1.准备工作：消毒实验器具，准备所需培养基和试剂。
2.提取淋巴细胞：通过离心法从小鼠脾脏中提取淋巴细胞。
3.细胞计数和调整浓度：使用显微镜计数室计数细胞数量，并根据实验要求调整细胞浓度。
4.培养实验组、阳性对照组和阴性对照组：将相应的淋巴细胞与特定抗原或刺激剂共培养。
5.培养条件控制：保持适宜的温度、湿度和二氧化碳浓度，定期更换培养基。
6.观察和采样：在规定的时间点，观察细胞形态变化，并采集样本用于后续分析。
分析结果细胞形态观察在实验进行的不同时间点，观察到了细胞形态的变化。
刺激后的淋巴细胞在24小时内开始出现细胞体积增大、核浓缩和细胞质深染的特点。
随着时间的推移，细胞数量逐渐增多，并呈现出更多分裂和分化的特征。
细胞增殖分析使用MTT法对不同时间点的培养物进行细胞增殖分析。
结果显示，在实验组和阳性对照组中，细胞增殖率明显高于阴性对照组。
并且，在实验组中，随着时间的延长，细胞增殖率逐渐增加。
细胞表面标记物检测通过流式细胞术检测实验组中转化后淋巴细胞表面标记物的表达情况。
结果显示，在实验组中，与阴性对照组相比，特定抗原诱导了一系列免疫相关标记物的表达上调。
小鼠B细胞淋巴瘤因子2 (Bcl-2)-ELISA试剂盒说明书
小鼠B细胞淋巴瘤因子2 (Bcl-2)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书产品编号：E-EL-M0175（本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!）声明：尊敬的客户，感谢您选用本公司的产品。
本产品选用世界著名生产厂家的原料，采用专业ELISA kit生产技术制造。
适用于体外定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆或细胞培养上清液中天然和重组Bcl-2浓度。
使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分！如有疑问，请及时联系伊莱瑞特生物科技有限公司。
*: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整）检测原理:本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。
用抗小鼠Bcl-2抗体包被于酶标板上，实验时标本或标准品中的Bc l-2会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。
依次加入生物素化的抗小鼠Bcl-2抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。
抗小鼠Bcl-2抗体与结合在包被抗体上的小鼠Bcl-2结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。
加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下现蓝色，加终止液后变黄。
用酶标仪在450nm波长处测OD值，Bcl-2浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线求出标本中Bc l-2的浓度。
标本收集:1.血清：全血标本于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。
2.血浆：抗凝剂推荐使用EDTA.Na2，标本采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。
避免使用溶血，高血脂标本。
3.组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，以去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。
将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样本对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。
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小鼠淋巴成纤维细胞
小鼠淋巴成纤维细胞产品说明：
为使客户能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。
派瑞金提供的小鼠淋巴成纤维细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。
研发的小鼠淋巴成纤维细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。
同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。
小鼠淋巴成纤维细胞注意事项：
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
3. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。
培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。
4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。
5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。
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