乙肝dna检测规程模板

乙型肝炎病毒核酸扩增荧光定量检测标准操作程序

1.目的：明确乙肝病毒核酸定量检测的操作规程，指导检验人员正确进行乙肝病毒核酸定量的检测。

2.适用范围：

2.1适用于进行乙肝病毒核酸定量检测的检验人员。

2.2适合仪器：LightCycler型核酸扩增荧光检测仪

2.3方法原理：采用PCR方法结合荧光探针的扩增技术

2.4样品要求：血清

3.职责：实验操作人员应严格按操作规程进行实验。

4.试剂来源：中山大学达安基因股份有限公司HBV DNA荧光PCR检测试剂盒。

5.质控物：阴性、阳性对照及阳性参控品系列均来源于试剂盒

6.标准操作：

6.1 试剂准备（在试剂准备区操作）

6.1.1将试剂盒及其它所需试剂置室温解冻（Taq酶为液态试剂，临用前取出，用后立即放回冰格），完全融解后混匀。

6.1.2根据当次实验标本量，取出相应试剂总的需求量于一管中（其余随即放回原温度保存），如所需要的管数为n (n=标本数+1管阴性对照+1管阳性对照+1管临界阳性对照+4管阳性参控品)（定性检测无需做阳性参控品），取PCR反应管，转移至样本制备区。

6.2 样本制备及加样（在标本制备区操作）

6.2.1 取血清标本40ul，或阴阳性对照标准品各10ul（强阳性标准品使用前加入稀释液90ul 混匀），加等量DNA提取液打匀，（提取液内含不溶于水的物质，取样时需用加样器充分混匀后吸取。如出现因吸头嘴部太细不能吸取或取样后填满吸头的现象，可先用洁净无污染的剪刀将吸头嘴部剪去一截）。沸水浴10分钟，转至4℃静置8-12小时以保证病毒颗粒充分裂解。

6.2.2 10000rpm离心5分钟，取上清液2ul直接加入到PCR反应管中，6000rpm离心数秒。

6.2.3 将各反应管带入PCR仪。

6.3 PCR扩增（在扩增区操作）

按仪器使用说明或标准操作程序操作。

扩增条件如下：93℃→2分钟预变性

93℃30秒→55℃60秒（40个循环）

6.4 结果判断：

6.4.1 2个阴性对照的Ct值应无数值，1个强阳性对照的Ct值应小于等于30，1个临界阳性对照的Ct值应大于阳性对照的Ct值，并小于等于38，否则实验视为无效。

6.4.2 4个阳性参控品的基因拷贝浓度的对数值为横坐标，以其实际测得的Ct值为纵坐标，作标准曲线，标准曲线的拟合度R应大于等于0.990，否则应视为实验无效。

定量结果分析：上述两项质控标准均满足时，可对样品进行定量分析。分析数据时，根据标准曲线自动计算未知标本的相应基因拷贝浓度。若发现有标本Ct值小于15，须将其剔除此次结果分析，该标本稀释后再测直至其Ct值大于15。

6.5 报告

6.5.1 定量结果判断

检测样本中HBV-DNA≥1×103拷贝数/ml（copies/ml）时，按实际检测结果报告；

检测样本中HBV-DNA<1×103拷贝数/ml（copies/ml）时，均报告“低于检测下限”。

6.5.2报告的签发依据检测结果报告程序。

7.支持性文件：

7.1 《乙型肝炎病毒核酸扩增荧光检测试剂盒》说明书（中山大学达安基因股份有限公司）7.2 检测结果报告程序。

7.3 LightCycler型核酸扩增荧光检测仪

本记录归档周期1年保存期限5年管理编号：

生化检测流程记录表

实验日期＿＿年＿＿月＿＿日

本表使用说明：

①各项目执行后在相应的方框内打√。②实验室内的温度为１８-２８℃，湿度５０－７０％为合格范围。③实验室清洁、消毒按SOP文件执行。④本表保存在归档文件夹中，存放文件柜中保存2年。⑤日立7600生化分析仪中检验结果保存计算机中，保存2年。

检测记录

１、中文报告录入操作者＿＿＿＿

２、英文项目录入操作者＿＿＿＿

３、质控批号：＿＿＿＿＿＿＿＿室内质控物来源＿＿＿＿，

4、审核质控结果：在控□；失控□；失控记录（包括纠正措施）

HBV--DNA荧光定量基因检测过程记录表

实验日期：_______年____月____日SLAN6.0保存文件名：____________

细菌内毒素检查法标准操作规程

目的：

建立细菌内毒素检查的基本操作，为细菌内毒素检查人员提供正确的操作

规程。

2.依据：

《中华人民共和国药典》2000年版二部。

3.范围：

本标准适用于细菌内毒素检查的操作。

4.职责：

QC细菌内毒素检查人员对本标准的实施负责。

5.程序：

5.1. 定义：

5.1.1.细菌内毒素检查法：本法系利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应

的机理，

以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法，内毒素的量用内毒素单位（EU）表示。

5.1.2.细菌内毒素国家标准品：系自大肠杆菌精制得到的内毒素，用于标

定、复核、

仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。

5.1.3.细菌内毒素工作标准品：系以细菌内毒素国家标准品为基准进行标

定，确定

其重量相当效价，每1ng工作标准品效价应不小于2EU，不大于50EU。细菌内毒素工作标准品用于试验中鲎试剂灵敏度复核干扰试验及设置的各种对照。

5.1.4.细菌内毒素检查用水：系指与灵敏度为0.03EU/ml或更高灵敏度的

鲎试剂24

小时不产生凝集反应的灭菌注射用水。

5.2. 实验设备：电热干燥箱（50~300±1）℃、电热恒温水温箱。

实验用具：注射器(精度0.02ml)、针头、试管架、白胶布、砂轮、75%酒精棉球、金属直镊、注射器盒、时钟。

试剂：鲎试剂（其标示值用λ表示）、内毒素工作标准品、内毒素检查用水。

5.3. 用具除热原：试验中所用的试管、注射器、针头、金属直镊等冲洗干净，置电热干燥箱中（注射器、针头、金属直镊等放入注射器盒中封好，再放入