产漆酶筛选

实验材料：
称量纸、托盘天平、蒸馏水、量筒、移液管、吸耳球、 三角涂布棒，三角瓶、酒精灯、培养皿、接种环等 愈创木酚PDA培养基（G-PDA）：马铃薯(切块)200g， 用水煮沸30 min，取滤液，加葡萄糖20g，琼脂20g，水 补足1000 mL，加入0.04%浓度(质量体积比)的愈创木酚。 木质素降解选择培养基（LDSM）：麸皮水解液0.3g、 磷酸氢二钾1.0g、氯化钠0.5g、七水硫酸镁0.3g、硝酸钠 2.5g、氯化钙0.1 g、氯化铁0.01g、水1000mL，调节 pH至7.4。
实验步骤：
5、涂布平板：将三个漆酶产生菌的筛选培养基平板分别 标注10-4，10-3，10-2，10-1等四种稀释度，然后用加样枪分 别从稀释好的四种浓度的土壤样品稀释试管中吸取0.1mL 液体分别涂布在G-PDA 平板上涂布在G-PDA 平板上，同 法做3个平行对照组，共12组。 6、培养：涂布好的平板放入25℃培养箱内进行倒置培养 72小时，观察记录不同浓度土壤悬液平板上的漆酶生产能 力。
实验步骤：
1、实验所用器具和培养基的灭菌 2、 采样：选取一处树干低肥沃的阴湿土壤，去除表层5cm 表层的表土，取5~15cm深的土壤，取约50g土样。 3、土壤稀释液的制备：用称量纸和托盘天平称取2克土样放 入装有18mL无菌水的三角瓶中。 4、富集培养：取2mL土壤悬液接入装50mL LDSM的三角瓶， 30℃、20r/min 摇瓶培养5d。取培养后的2mL土壤悬液放 入装有18mL无菌水的三角瓶中，此时稀释度为10-1。从10-1 的土壤悬液取2mL放入装有18mL无菌水的三角瓶中制得 10-2悬液，用同样方法制备稀释度分别为10-3，10-4的悬液。
实验来自百度文库骤：
7、产漆酶土壤微生物的筛选：在12块筛选培养基平板上 挑选周围有明显褐色氧化带的单菌落，则为筛选的目标菌。 将该菌落用无菌接种环挑起在另一个新鲜的筛选平板上作 划线分离，以平板上出现的所有单菌落的形态特征都相同 作为被纯化的标准。
总结
从土壤中分离产漆酶菌株
2015013252 汪心妍 2015013254 江淑华
实验原理
漆酶是蓝色氧化酶家族中的一种多酚氧化酶，借助氧 将对苯二酚（氢醌）氧化成对苯醌的酚氧化酶 。 为从土壤中分离产漆酶菌株，选择适合产漆酶菌生长 的培养基进行富集培养，后经过平板划线分离纯化，使用 透明圈分离法使用分离培养基对微生物进行初步的分离。