基因表达载体构建优秀课件
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基因表达载体构建PPT15页
基因表达载体构建
11、获得的成功越大，就越令人高兴 。野心 是使人 勤奋的 原因， 节制使 人枯萎 。 12、不问收获，只问耕耘。如同种树 ，先有 根茎， 再有枝 叶，尔 后花实 ，好好 劳动， 不要想 太多， 那样只 会使人 胆孝懒 惰，因 为不实 践，甚 至不接 触社会 ，难道 你是野 人。(名 言网) 13、不怕，不悔(虽然只有四个字，但 常看常 新。 14、我在心里默默地为每一个人祝福 。我爱 自己， 我用清 洁与节 制来珍 惜我的 身体， 我用智 慧和知 识充实 我的头 脑。 15、这世上的一切都借希望而完成。 农夫不 会播下 一粒玉 米，如 果他不 曾希望 它长成 种籽； 单身汉 不会娶 妻，如 果他不 曾希望 有小孩 ；商人 或手艺 人不会 工作， 如果他 不曾希 望因此 而有收 益。-- 马钉路 德。
56、书不仅是生活，而且是现在、过 去和未 来文化 生活的 源泉。 ——库 法耶夫 57、生命不可能有两次，但许多人连一 次也不 善于度 过。— —吕凯 特 58、问渠哪得清如许，为有源头活水来 。—— 朱熹 59、我的努力求学没有得到别的好处， 只不过 是愈来 愈发觉 自己的 无知。 ——笛 卡儿
拉
60、生活的道路一旦选定，就要勇敢地 走到底 ，决不 回头。 ——左
ห้องสมุดไป่ตู้
11、获得的成功越大，就越令人高兴 。野心 是使人 勤奋的 原因， 节制使 人枯萎 。 12、不问收获，只问耕耘。如同种树 ，先有 根茎， 再有枝 叶，尔 后花实 ，好好 劳动， 不要想 太多， 那样只 会使人 胆孝懒 惰，因 为不实 践，甚 至不接 触社会 ，难道 你是野 人。(名 言网) 13、不怕，不悔(虽然只有四个字，但 常看常 新。 14、我在心里默默地为每一个人祝福 。我爱 自己， 我用清 洁与节 制来珍 惜我的 身体， 我用智 慧和知 识充实 我的头 脑。 15、这世上的一切都借希望而完成。 农夫不 会播下 一粒玉 米，如 果他不 曾希望 它长成 种籽； 单身汉 不会娶 妻，如 果他不 曾希望 有小孩 ；商人 或手艺 人不会 工作， 如果他 不曾希 望因此 而有收 益。-- 马钉路 德。
56、书不仅是生活，而且是现在、过 去和未 来文化 生活的 源泉。 ——库 法耶夫 57、生命不可能有两次，但许多人连一 次也不 善于度 过。— —吕凯 特 58、问渠哪得清如许，为有源头活水来 。—— 朱熹 59、我的努力求学没有得到别的好处， 只不过 是愈来 愈发觉 自己的 无知。 ——笛 卡儿
拉
60、生活的道路一旦选定，就要勇敢地 走到底 ，决不 回头。 ——左
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基因表达载体构建-PPT课件
（三） 将目的基因导入微生物细胞
目的基因导入大肠杆菌最常用的转化方法是： 1 用Ca2+ 处理大肠杆菌细胞，使细胞处于能 够 吸收环境中DNA分子的生理状态，这种细胞称 为感受态细胞。
2 用大肠杆菌质粒与目的基因进行重组形成基 因——质粒重组DNA分子。
3 将基因——质粒重组DNA分子与感受态细胞 混合，在一定温度下，感受态细胞吸收周围重 组DNA分子，完成转化过程。
3 基因表达载体之基本组成是什么？
（1）结构基因——即提取的目的基因核苷酸序列，负责 编码目标蛋白质。
（2）启动子——位于编码蛋白质结构基因之首一段殊结 构的DNA片段，RNA聚合酶的识别部位和结合部位。 （3）终止子——位于编码蛋白质结构基因末端一段特殊 结构的DNA片段，具有终止基因转录过程的作用。
进入棉细胞，并能在棉细胞中遗传和表达，你
应当采取什么办法？你能说出其中的理由吗 ？
（一 ）基因表达载体的构建
1 基因工程操作中，构建基因表达载体之目的 是什么？ 确保目的基因在受体细胞中稳定存在、 复制、遗传和表达，使其发挥作用。 2 请你定义：基因表达载体构建之含义？ 将目的基因、启动子和终止子科学按装 在经修饰和改造完备的载体之上。
（4）复制原点——能够自我复制保证目的基因在受体细 胞中复制遗传和表达。
（5）遗传标记基因——检测受体细胞中是否含有目的基 因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。
请你以质粒作载体构建基因表达载体之模式图
插入目的基因 启动子 终止子
基因表达载体 基因表达载体
复制原点 遗传标记基因
4 建构基因表达载体方法
（1）用某种限制酶如EcoRI限制酶，在基因插 入位点切割质粒，使质粒出现一个切口， 露出两个黏性末端。 （2）用同种限制酶切割目标DNA分子，截取目 的基因，使其产生与质粒相同的末端。
1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】
1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT )【优 秀课件 】
1.日本那些再现曲水宴的表演，有着 不少“中 国元素”，但是 由于现 代年轻 人对古 代中国 文化了 解甚少 ，并不 知道哪 些元素 来自中 国。 2.本着保证校车安全的原则，公安机 关将会 同教育 行政等 部门对 校车驾 驶人进 行逐一 审查， 坚决清 退不符 合安全 规定的 校车驾 驶人。 3.山寨文化是一种平民文化、草根文 化，自 然有其 存在的 意义和 价值， 但山寨 产品的 泛滥则 是中国 知识产 权意识 不足的 揭露与 讽刺。
谢谢观赏 4.神舟7号宇宙飞船载着三位航天英雄胜利返回地球，这艘宇宙飞船是我们国家自行研制的，每一个中国人不能不为之骄傲。 5.这家工厂虽然规模不大，但曾两次 荣获省 科学大 会奖， 三次被 授予省 优质产 品称号 ，产品 远销全 国各地 和东南 亚地区 。 6.杭州湾跨海大桥是一座由我国自行 建造、 自行设 计、自 行管理 、自行 投资的 特大型 交通基 础设施 ，是我 国跨海 大桥建 设史上 的一个 重要里 程碑。 7、为防止东南亚地区发生的禽流感 传入我 国，国 家质检 总局和 农业部 今天联 合发出 通知， 自即日 暂行禁 止进口 来自疫 区的禽 类及其 产品。
基因工程的基本操作程序P8
目的基因的获取 方法
目的基因的获取可以从自然界中已有的物种中分离出来，也可以用人工 的方法合成。1.从基因中获取2.利用PCR
技术扩增目 的基因
3.化学方法直
接人工合成
第二步：基因表达载体的构建（核心步骤）
1.基因表达载体构建的
使目的基因在受体细胞中 稳定存在 ，并且可以遗传给下一代 使目的基因能够___表_达____和 发挥作用 。
1.下列有关抗虫基因表达载体的叙述，正确的是（ C ）
1.日本那些再现曲水宴的表演，有着 不少“中 国元素”，但是 由于现 代年轻 人对古 代中国 文化了 解甚少 ，并不 知道哪 些元素 来自中 国。 2.本着保证校车安全的原则，公安机 关将会 同教育 行政等 部门对 校车驾 驶人进 行逐一 审查， 坚决清 退不符 合安全 规定的 校车驾 驶人。 3.山寨文化是一种平民文化、草根文 化，自 然有其 存在的 意义和 价值， 但山寨 产品的 泛滥则 是中国 知识产 权意识 不足的 揭露与 讽刺。
谢谢观赏 4.神舟7号宇宙飞船载着三位航天英雄胜利返回地球，这艘宇宙飞船是我们国家自行研制的，每一个中国人不能不为之骄傲。 5.这家工厂虽然规模不大，但曾两次 荣获省 科学大 会奖， 三次被 授予省 优质产 品称号 ，产品 远销全 国各地 和东南 亚地区 。 6.杭州湾跨海大桥是一座由我国自行 建造、 自行设 计、自 行管理 、自行 投资的 特大型 交通基 础设施 ，是我 国跨海 大桥建 设史上 的一个 重要里 程碑。 7、为防止东南亚地区发生的禽流感 传入我 国，国 家质检 总局和 农业部 今天联 合发出 通知， 自即日 暂行禁 止进口 来自疫 区的禽 类及其 产品。
基因工程的基本操作程序P8
目的基因的获取 方法
目的基因的获取可以从自然界中已有的物种中分离出来，也可以用人工 的方法合成。1.从基因中获取2.利用PCR
技术扩增目 的基因
3.化学方法直
接人工合成
第二步：基因表达载体的构建（核心步骤）
1.基因表达载体构建的
使目的基因在受体细胞中 稳定存在 ，并且可以遗传给下一代 使目的基因能够___表_达____和 发挥作用 。
1.下列有关抗虫基因表达载体的叙述，正确的是（ C ）
人教版生物选修三1.2节DNA重组技术的基本操作程序(2)基因表达载体的构建课件(共18张PPT)(
组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添 加 抗生素B 的培养基进行培养。
巩 固提 高
例2、【2016年江苏高考33题（节选）】下表是几种限制酶识别序 列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中 切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题：
（1）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用
抗生素 抗性基因
破 思考讨论：
选用EcoRⅠ和Hind Ⅲ两种限制酶切割外源DNA和质粒，
可以形成哪些连接产物？
质粒和含目的基因的外源DNA正向连接
限制酶的选择：EcoRⅠ和HindⅢ切割结果分析
EcoRⅠ
… GAATTC … CTTAAG
目的基因
HindⅢ
AAGCTT … TTCGAA…
HindⅢ EcoRⅠ
BclⅠ和Hind Ⅲ 两种限制酶切割。
（2）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板
培养基中添加
四环素 。
筛选导入重组质粒的受体细胞
【2019年江苏高考33题（改编）】下图是某基因工程中构建
重组质粒的过程示意图，载体质粒P0具有四环素抗性基因（
tetr)和氨苄青霉素抗性基因（ampr）。
模拟制作——基因表达载体的构建
方法步骤
3.一种限制酶切割：用剪刀（代表EcoRⅠ，识别序列及切
割位点为G↓AATTC）切割“质粒”和“含目的基因的外源 DNA”。用双手代表DNA连接酶，分别体验质粒自身环 化、含目的基因的外源DNA自身环化、质粒和含目的基因 的外源DNA正、反向连接的过程。
1和2连接， 1 '和2'连接 正向 相互连接
1和2'连接，1 '和2连接 反向
巩 固提 高
例2、【2016年江苏高考33题（节选）】下表是几种限制酶识别序 列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中 切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题：
（1）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用
抗生素 抗性基因
破 思考讨论：
选用EcoRⅠ和Hind Ⅲ两种限制酶切割外源DNA和质粒，
可以形成哪些连接产物？
质粒和含目的基因的外源DNA正向连接
限制酶的选择：EcoRⅠ和HindⅢ切割结果分析
EcoRⅠ
… GAATTC … CTTAAG
目的基因
HindⅢ
AAGCTT … TTCGAA…
HindⅢ EcoRⅠ
BclⅠ和Hind Ⅲ 两种限制酶切割。
（2）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板
培养基中添加
四环素 。
筛选导入重组质粒的受体细胞
【2019年江苏高考33题（改编）】下图是某基因工程中构建
重组质粒的过程示意图，载体质粒P0具有四环素抗性基因（
tetr)和氨苄青霉素抗性基因（ampr）。
模拟制作——基因表达载体的构建
方法步骤
3.一种限制酶切割：用剪刀（代表EcoRⅠ，识别序列及切
割位点为G↓AATTC）切割“质粒”和“含目的基因的外源 DNA”。用双手代表DNA连接酶，分别体验质粒自身环 化、含目的基因的外源DNA自身环化、质粒和含目的基因 的外源DNA正、反向连接的过程。
1和2连接， 1 '和2'连接 正向 相互连接
1和2'连接，1 '和2连接 反向
植物基因工程载体及其构建ppt课件
一、T-DNA的加工及转移
Vir基因操纵子系统被活化后，在农杆菌中可测到单链TDNA（ss T-DNA，亦称T链或正链），T链的形成取决于 VirD1及VirD2两种蛋白，这些蛋白一起决定内切酶活性， 在边界重复序列的特定位点形成切口，产生单链断裂。因 为T链的合成是从右边界至左边界，即5′→3′，若右边界缺 失，则T链的合成便无法开始，故目前认为T-DNA是以T链 形式向植物细胞转移的，而不是双链的T-DNA分子。左边 界作为DNA合成起始点的效率比右边界低，这并不是因为 左、右边界的核苷酸序列有什么不同，而是因为在右边界 的右边约17bp的超驱动序列，它可使T链的形成大大增加， 故 被 称 作 为 “ 转 化 增 强 子 （ transfer enhancer 或 overdrive），除去增强子序列导致菌株致病力消失。T链 的形成过程如图8-1示出。
左边界（TL）缺失突变仍能致瘤,但右边界（TR）缺失则不再能
致瘤,这里几乎完全没有T-DNA的转移,这说明右边界(TR)在T-DNA 转移中的重要性。
3. T-DNA上的编码基因及功能
T-DNA的转录有下述共同点：
①T-DNA的两条链都是有意义链,即都能被转录。
②T-DNA上每个基因都有各自的启动子。
第二节 根癌农杆菌Ti质粒的结构与功能
一、Ti质粒的遗传特性、结构及功能 二、T-DNA的基因结构与功能 三、Vir区操纵子的基因结构与功能
一、Ti质粒的遗传特性、结构及功能
1. Ti质粒的遗传特性及类型
Ti质粒是根癌农杆菌染色体外的遗传 物质，为双股共价闭合的环状DNA分子， 其分子量为95～156×106D, 约有200kb组 成。
3. VirG操纵子的诱导表达及功能
VirG操纵子小于VirA，只有1.0kb，同样是单基因 结构，只能编码一条多肽，被称为VirG蛋白，即DNA结 合活化蛋白（DNA-binding activator protein）。它的C 端已知有DNA结合活性。它的N未端部分具有磷酸化的 酸性结构。当磷酸化的A蛋白将其磷酸基转到VirG蛋白 （30kD）保守的天冬氨酸盐残基上时，使VirG蛋白活化。 活化的VirG蛋白可能以二体或多体形式结合到Vir区启动 子的特定区域，从而成为其它Vir基因转录的激活因子， 打开VirB、C、D、E、H等几个基因。并己证明，VirA或 VirG突变后会减弱或完全失去对其它Vir位点活化的诱导。 VirA及VirG的这种调控作用被称为双因子调控体系（two 一component regu1atory system）。
基因表达载体构建PPT文档15页
基因表达载体构建
11、战争满足了，或曾经满足过人的 好斗的 本能， 但它同 时还满 足了人 对掠夺 ，破坏 以及残 酷的纪 律和专 制力的 欲望。 ——查·埃利奥 特 12、不应把纪律仅仅看成教育的手段 。纪律 是教育 过程的 结果， 首先是 学生集 体表现 在一切 生活领 域—— 生产、 日常生 活、学 校、文 化等领 域中努 力的结 果。— —马卡 连柯(名 言网)
13、遵守纪律的风气的培养，只有领 导者本 身在这 方面以 身作则 才能收 到成效 。—— 马卡连 柯 14、劳动者的组织性、纪律性、坚毅 精神以 及同全 世界劳 动者的 团结一 致，是 取得最 后胜利 的保证 。—— 列宁 摘自名言网15、机会是不Fra bibliotek纪律的。——雨果
31、只有永远躺在泥坑里的人，才不会再掉进坑里。——黑格尔 32、希望的灯一旦熄灭，生活刹那间变成了一片黑暗。——普列姆昌德 33、希望是人生的乳母。——科策布 34、形成天才的决定因素应该是勤奋。——郭沫若 35、学到很多东西的诀窍，就是一下子不要学很多。——洛克
11、战争满足了，或曾经满足过人的 好斗的 本能， 但它同 时还满 足了人 对掠夺 ，破坏 以及残 酷的纪 律和专 制力的 欲望。 ——查·埃利奥 特 12、不应把纪律仅仅看成教育的手段 。纪律 是教育 过程的 结果， 首先是 学生集 体表现 在一切 生活领 域—— 生产、 日常生 活、学 校、文 化等领 域中努 力的结 果。— —马卡 连柯(名 言网)
13、遵守纪律的风气的培养，只有领 导者本 身在这 方面以 身作则 才能收 到成效 。—— 马卡连 柯 14、劳动者的组织性、纪律性、坚毅 精神以 及同全 世界劳 动者的 团结一 致，是 取得最 后胜利 的保证 。—— 列宁 摘自名言网15、机会是不Fra bibliotek纪律的。——雨果
31、只有永远躺在泥坑里的人，才不会再掉进坑里。——黑格尔 32、希望的灯一旦熄灭，生活刹那间变成了一片黑暗。——普列姆昌德 33、希望是人生的乳母。——科策布 34、形成天才的决定因素应该是勤奋。——郭沫若 35、学到很多东西的诀窍，就是一下子不要学很多。——洛克
课件2：3.2.1 目的基因的筛选与获取、基因表达载体的构建
因 文
单链互补DNA
库 （
DNA聚合酶催化
如
双链cDNA片段
cDNA
与载体连接
文
导入受体菌中储存
库
）
体内全部DNA
限制酶
许多DNA片段
与运载体连接导入受体菌群体 基因组某种生物某个时期的mRNA
反转录
cDNA
与运载体连接导入受体菌群体 部分基因（cDNA）PCR技术
DNA复制
碱基互补配对
四种脱氧核苷酸
模板、能量、酶
解旋方式 DNA在高温下变性解旋
不 场所 同 点酶
结果
体外复制 耐高温的DNA聚合酶
大量的DNA片段
解旋酶催化
细胞内（主要在细胞核内） 解旋酶、DNA聚合酶 形成整个DNA分子
第
二
基关于因公表司达载体的构建
步
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使DNA聚合酶能够从引物3′端开始连接脱氧核苷酸
3 扩增方式： 以指数方式扩增，即__2_n_（n为扩增循环的次数）
4 扩增过程：
4 扩增过程：
PCR扩增的计算：
（1）若开始只有一个DNA提供模板，则循环n次后获得的 子代DNA数目为 2n 个。 （2）若开始有N0个DNA提供模板，则循环n次后获得的子 代DNA数目为 N0∙2n个。
〘思考〙用DNA连接酶处理后会出现几种产物？
如何避免质粒的自我环化和目的基因反向连接的问题？
质粒
目的基因
将同一种限制酶切割获得的目的基因和质粒混合后加DNA连接酶会出现的
连接方式有：
目的基因自连
自连
目的基因
质粒自连 目的基因与质粒连接
质粒
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（一 ）基因表达载体的构建
1 基因工程操作中，构建基因表达载体之目的 是什么？
确保目的基因在受体细胞中稳定存在、 复制、遗传和表达，使其发挥作用。
2 请你定义：基因表达载体构建之含义？
将目的基因、启动子和终止子科学按装 在经修饰和改造完备的载体之上。
3 基因表达载体之基本组成是什么？
（1）结构基因——即提取的目的基因核苷酸序列，负责 编码目标蛋白质。
农杆菌
农杆菌转化法示意图
农杆菌
T—DNA Ti质粒
EcoRI酶
核—DNA 目 标
目标细胞
DNA 重组
侵染 转化 转基因植物
三 将目的基因导入受体细胞
基因导入受体细胞的标志是什么？
1目的基因与载体在受体细胞共同复制、遗 传和表达。或目的基因插入细胞染色体上DNA分 子之中，随同受体细胞DNA分子复制、遗传和表 达。
2 实际上外源目的基因变成了受体细胞的一部 分，这种现象叫做转化。
2 目的基因导入受体细胞遵循的基本原理是什么？ 通常借鉴细菌或病毒侵染细胞和寄生之途径。
基因表达载体构建优秀课件
4 从苏云金芽孢杆菌细胞DNA分子中提取得到 Bt毒蛋白基因能否直接进入普通棉细胞中？ 如果把目的基因人工注射到普通棉细胞中， 那么该基因在棉细胞中会稳定存在，复制和表 达吗？
5 假如你是一个基因工程操作者，若使目的基因 进入棉细胞，并能在棉细胞中遗传和表达，你 应当采取什么办法？你能说出其中的理由吗 ？
（3）依据目的基因表达的特点和位置，用限制 酶切割受体细胞相应终止子与目的基因连 接起来，成为一个整体。
（5）将目的 基因 插入质 粒切口处，用 E•coli DNA连接酶把基因与质粒缝合起来，成功 创建一个重组DNA分子。
建议模拟完成建构大肠杆菌基因表达载体 ，并写出具体步骤。
（2）启动子——位于编码蛋白质结构基因之首一段殊结 构的DNA片段，RNA聚合酶的识别部位和结合部位。
（3）终止子——位于编码蛋白质结构基因末端一段特殊 结构的DNA片段，具有终止基因转录过程的作用。
（4）复制原点——能够自我复制保证目的基因在受体细 胞中复制遗传和表达。
（5）遗传标记基因——检测受体细胞中是否含有目的基 因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。
请你以质粒作载体构建基因表达载体之模式图
启动子
插入目的基因
基因基因表表达达载载体体
终止子
复制原点
遗传标记基因
4 建构基因表达载体方法
（1）用某种限制酶如EcoRI限制酶，在基因插 入位点切割质粒，使质粒出现一个切口， 露出两个黏性末端。
（2）用同种限制酶切割目标DNA分子，截取目 的基因，使其产生与质粒相同的末端。
（一）将目的基因导入植物细胞
1 农杆菌转化法 农杆菌是一种在土壤中生活的微生物，在
自然条件下易感染双子叶植物和裸子植物，而 对大多数单子叶植物没有感染力 。
2 感染原理： 当植物体受到损伤时，伤口处细胞分泌大
量的酚类化合物，吸引农杆菌移向这些细胞， 这时农杆菌中的Ti质粒上的T—DNA分子可转 移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色DNA 分子之上。