【CN110075122A】一种肝癌治疗性外泌体药物【专利】
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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910383325.5
(22)申请日 2019.05.09
(71)申请人 复旦大学附属中山医院
地址 200032 上海市徐汇区枫林路180号
(72)发明人 周俭 樊嘉 胡捷 刘维峰 王征
周凯乾
(74)专利代理机构 上海申浩律师事务所 31280
代理人 贾师英
(51)Int.Cl.
A61K 35/13(2015.01)
A61K 9/50(2006.01)
A61K 47/46(2006.01)
A61K 31/7105(2006.01)
A61P 35/00(2006.01)
C12N 15/90(2006.01)
C12N 9/22(2006.01)C12N 15/867(2006.01) (54)发明名称
一种肝癌治疗性外泌体药物
(57)摘要
本发明公开了一种肝癌治疗性外泌体药物,
其为VPS35基因表达下调的肝癌细胞分泌的外泌
体,并且导入了用于治疗肝癌的微小RNA分子。本
发明的肝癌治疗性外泌体药物能够用于肝癌临
床治疗,降低高危患者术后复发率,抑制肝癌进
展,
从而改善肝癌切除或肝移植的预后。权利要求书1页 说明书9页序列表1页 附图2页CN 110075122 A 2019.08.02
C N 110075122
A
权 利 要 求 书1/1页CN 110075122 A
1.一种肝癌治疗性外泌体药物,其为VPS35基因表达下调的肝癌细胞分泌的外泌体,并且导入了用于治疗肝癌的微小RNA分子。
2.如权利要求1所述的肝癌治疗性外泌体药物,其特征在于,所述肝癌细胞来源于肝癌手术切除或者肝移植术后肿瘤组织。
3.如权利要求1所述的肝癌治疗性外泌体药物,其特征在于,所述微小RNA分子是miR-26a。
4.一种制备如权利要求1所述肝癌治疗性外泌体药物的方法,其包括如下步骤:
1)通过RNA干扰技术或者基因编辑技术下调或敲除肝癌细胞的VPS35基因,得到VPS35基因表达下调的肝癌细胞;
2)培养步骤1)中得到的VPS35基因表达下调的肝癌细胞,收集其分泌的外泌体;
3)通过电转导或者化学转导法将微小RNA分子导入到步骤2)中得到的外泌体中,组装得到外泌体药物。
5.如权利要求4所述的方法,其特征在于,所述基因编辑技术是CRISPR/Cas9系统。
6.如权利要求4所述的方法,其特征在于,所述RNA干扰技术包括如下操作步骤:
a)针对VPS35基因,设计靶向该基因的siRNA;
b)设计用于表达siRNA的shRNA;
c)将shRNA编码序列克隆入质粒,构建表达shRNA的慢病毒;
d)用步骤c)构建的慢病毒转化肝癌细胞。
7.如权利要求6所述的方法,其特征在于,所述siRNA为SEQ ID NO:2。
8.如权利要求7所述的方法,其特征在于,所述shRNA的正义链为SEQ ID NO:3,反义链为SEQ ID NO:4。
9.如权利要求1至3中任一项所述的肝癌治疗性外泌体药物在制备抗肝癌药物中的应用。
10.如权利要求9所述的应用,其特征在于,通过将所述抗肝癌药物与体外Organoid模型共培养、并且/或者通过尾静脉注射进入肝癌PDX动物模型体内予以验证肝癌抑制效果后,再施用于肝癌细胞来源的肝癌手术切除患者或者接受肝移植术的肝癌患者。
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