哺乳动物细胞转染方法总结

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转染效率高适合难转染细胞转染
瞬时转染稳定转染特定细胞
利用病毒介导转染,外源基因整合较为稳定
逆转录病毒只选择感染分裂细胞
外源基因≤8kb
适用性广,适于质粒和几十kb的基因组片段
瞬时转染wk.baidu.com定转染各种细胞
针对不同的细胞要优化实验条件
细胞致死率高
显微注射法
利用显微操作系统和显微注射技术将DNA注射进入细胞
整合率高,适用于工程改造转基因动物
瞬时转染稳定转染各种细胞
设备昂贵外源基因的整合位点和拷贝数无法控制
会导致片段突变缺失
逆转录病毒转染
利用病毒的膜蛋白可以和细胞表面受体结合而进入细胞,利用宿主细胞酶自行转录复制合成DNA并随机整合到细胞基因组中
与阳离子脂质体类似,但是具有很低的毒性,操作简单实用性广,为新一代转染试剂
瞬时转染稳定转染各种细胞
磷酸钙法
磷酸钙-DNA沉淀附着在细胞膜,促进细胞的内吞作用
操作简单
瞬时转染稳定转染大部分细胞
磷酸钙-DNA沉淀附着在细胞膜
不适用于原代细胞
电穿孔法
高脉冲的电压破坏细胞膜,在细胞膜表面形成孔道,DNA由孔道进入细胞
细胞转染方法
转染原理
特点
阳离子脂质体转染法
带正电荷的脂质体靠静电作用和DNA结合形成脂质体-DNA复合物然后通过细胞的内吞作用进入细胞
操作简便
瞬时转染稳定转染各种细胞
适用于各种裸露DNA,RNA片段
适用于各种细胞
对DNA浓度有一定要求
对细胞有一定毒性
阳离子聚合物(PEI)
带正电的阳离子聚合物和核酸的磷酸基团结合形成带正点复合物与带负电的细胞膜接触,内吞进入细胞
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