食品实验 尿负荷维生素B2测定

缺乏 （μg）
＜400
不足 （μg）
400 ～ 799
正常 （μg）
800 ～ 1300
充裕 （μg）
1300
5/27/2020
注意事项
避光操作，酸性体系，迅速操作； 低亚硫酸钠不能加入过多，否则影响吸光值，加
入后必需立即读数，否则维生素B２又会被空气氧 化成荧光型； 拿比色皿侧棱，并保证比色皿四面清洁； 注意标准品的配制及保存； 若尿液过于浑浊，可过硅镁层析柱后再进行测定 等。
B
注：样品管要再做一只平行管，最后计算的时候，取平均值。
5/27/2020
实验计算及结果
A-B
总尿量(ml)
尿中核黄素含量（μg）= [(C-D)-(A-B)] ×内标核黄素量（μg）× 分析用尿量(ml)
F=KC ﹦〉C=F/K, K=F/C ﹦〉 K= [(C-D)-(A-B)]∕内标核黄素量
5/27/2020
谢谢！
作业提交：下周一 公卫514室
食物中维生素B2来源
5/27/2020
实验目的 应用尿负荷试验评价人体维生素B2营养状况。
5/27/2020
实验原理
代谢角度：
水溶性维生素，在机体内存留时间短，满足机体 需求后，多余部分迅速从尿中排出。
当日常摄入量达不到机体需要量时，摄入的维生 素制剂将首先留在体内满足机体需要，从而尿中 排出量较少，反之亦然。
2 测定前读取尿液PH值，确保PH=3～5
3 负荷尿维生素B2测定
5/27/2020
负荷尿维生素B2的测定
标准管
样品管
尿样(ml)
1
B2标准应用液(ml)
1.5
酸性水(ml)
7.5
混匀
荧光光度计读值（420、530nm） C
低亚硫酸钠
1平匙
混匀
背景荧光值（420、530nm） D
1 0 9
A 1平匙
因此，可由尿中排出的维生素量来判断体内水溶 性维生素的水平。
5/27/2020
方法角度
✓ 荧光化合物，在一定波长的光波照射下发黄绿色荧光。 ✓ 荧光分析法，荧光强度F与溶液浓度C成线性关系—— F=KC
5/27/2020
仪器与试剂
荧光光度计 酸性水：取浓硫酸0.3ml，加蒸馏水至200ml; 核黄素储备液(已配好)：50μg/ml。酸性水配制，
棕色瓶低温保存 核黄素标准应用液：1μg/ml。吸取核黄Baidu Nhomakorabea储备液
1ml，用酸性水稀释至50ml，棕色瓶低温保存，现 用现配； 低亚硫酸钠（荧光熄灭剂） 总尿量:1号尿样：800ml
2号尿样：1340ml
5/27/2020
实验步骤
1 收集负荷尿 清晨排空小便后，空腹口服维生素B25mg，根据季节饮水 200-500ml，收集服药后4h内所有尿液，并在瓶中加入1g左 右草酸，使尿液保持在PH3-5，防止维生素B2降解，必要时 还可加甲苯防腐。用量筒量取总尿液量并记录，做好标记后 4℃短期保存，-20℃长期保存。
负荷尿中维生素B2测定 ——荧光分析法
维生素B2（核黄素）
代谢活性形式：黄素单核苷酸（FMN），黄素腺嘌呤二核
苷酸辅酶（FAD）
生理功能： 1、 辅酶 2 、 生物氧化还原反应中的电子传递的中间体
维生素B2缺乏
口腔：口角炎，唇炎，舌炎，地图舌 皮肤：脂溢性皮炎等 眼： 对光有过度敏感的反应等
5/27/2020