大容量注射液密封性验证

大容量注射液密封系统完好性验证方案

1. 概述

本次容器密封系统的完好性试验采用灌装大豆胰蛋白胨肉汤培养基，经压塞、扎盖、灭菌、微生物侵入试验，试验分为2组，A组为正常微生物侵入试验，B组为微生物挑战试验，检查产品无菌可靠性是否达到要求，并对试验结果进行分析研究。

2. 试验流程

培养基的配置

灌装,压塞扎盖

培养基灭菌

70只带盖50只拧松铝盖

20只确认培养基生

长能力

50只(A组)微生物侵

入试验

35只(B组)微生物侵

入试验

各2只（未侵泡）确

认培养基生长能力

无菌检测

（A组）长菌

分析原因

无菌生长

A组10只B组5只确

认培养基生长能力

营养试验合格

试验有效

确认试验合格与否

营养试验合格

试验有效

营养试验合格试验有效倒立培养14天确认

无菌

培养7天或至阳性

并鉴定菌为铜绿

持续侵泡4h

菌液浓度1×106 CFU/ml 培养7天或至阳性

并鉴定菌为铜绿

培养7天或至阳性

并鉴定菌为铜绿

10只封口缺损

3. 验证内容

3.1 目的

证明灌装培养基的容器经压塞、扎盖、灭菌、微生物侵入试验后，保证无菌以确认大容量注射液密封系统的完好性。

3.2 试验样品的制备

3.2.1 在生产线上取足够量的输液瓶，灌装大豆胰蛋白胨肉汤培养基，使用自动压塞和压盖设备将容器密封。

3.2.2 将灌装好的容器经115℃、20分钟灭菌。

3.2.3 从灭菌柜中取出试样，冷却，将每一试样倒转，使培养基与容器内表面充分接触，在30~35℃下竖放培养14天。

3.2.4 小心拧松至少50个试样的铝盖，注意不要破坏其密封口。将拧松铝盖时不慎损坏容器密封性的所有试样剔除。按3.2.3培养样品。

3.2.5 挑选至少10个封口处缺损的容器，按3.2.3培养样品。

3.3 确定培养基促菌生长能力——营养性试验

3.3.1 所有试样培养14天均不长菌时，随即取20个带盖试样，每个试样内接种1ml的铜绿假单胞菌ATCC9027，菌液浓度：10~100CFU/1ml。

3.3.2 30~35℃下培养7天，或培养至所有试样都呈阳性结果。

3.3.3 若7天内，所有接种铜绿假单胞菌的试样中，微生物生长良好，则容器内培养基的促菌生长能力可判为合格。

3.3.4 使用革兰染色和紫外灯下肉汤呈蓝绿色荧光的性质，来签订并确认试样容器内生长的菌为接入的铜绿假单胞菌。

3.4 挑战菌悬浮液的制备

3.4.1 从铜绿假单胞菌ATCC9027的新鲜斜面上取一整环培养基，分别接入含10ml无菌培养基的试管中，在30~35℃下培养16~18h。

3.4.2 将每管的培养物分别转入含1000ml相同培养基（SCDM/2）的容器中，于30~35℃下培养22~24h。在培养结束时，能明显见容器内培养基出现浑浊。

3.4.3 培养结束后的菌悬液即可用来作容器/密封系统完好性试验。

3.5 微生物侵入试验操作步骤

3.5.1 本试验须在生物安全柜或其他不影响生产环境的地方进行。

3.5.2 将新鲜的铜绿假单胞菌ATCC9027的菌悬液倒入合适的盆中，用金属丝架固定试样容器，使试验样品倒置在菌悬液中。

3.5.3 将50个经最长灭菌程序灭菌的试样倒置，并侵入菌悬液中，该组试样为A组。试样容器内的无菌培养基应充分接触封口内表面，样品的颈部及封口的外表面应完全泡在菌悬液中，见图：

培养基

菌液

待确认的密封口

支架

容器

3.5.4

同时将25个拧松铝盖与10个容器封口缺损的试样容器倒置入菌悬液中，该组

试样为B 组。 3.5.5

实验开始时取一份菌悬液，平均计数每毫升所含活菌数。按3.3.4确认试验用

微生物是铜绿假单胞菌。 3.5.6 将A 组和B 组试样容器在菌悬液中持续浸泡约4小时。 3.5.7 浸泡结束时，再用平板计数菌悬液的浓度。

3.5.8

从菌悬液中取出试样，擦干试样容器外残余的菌悬液，然后用含0.5%过乙酸

的70%异丙醇消毒容器外表面。 3.5.9

取装满培养基未拧松铝盖与拧松铝盖的试样各2个，作阳性对照。阳性对照用

样品制备方法同试样，但不经菌悬液浸泡，其外表面用含0.5%过乙酸的70%异丙醇消毒。此后，接种入10~100CFU 铜绿假单胞菌ATCC9027，按步骤3.3进行培养基的营养试验。 3.5.10

将消毒后的容器放在塑料袋中，置30~35℃培养7天，操作中应特别注意不要

损坏B 组无铝盖试样胶塞的密封性。 3.5.11 挑战试验用菌悬液经灭菌后丢弃。

3.5.12 将挑战试验用的试样培养7天，观察检查试样容器内培养基中微生物的生长情

况。 3.5.13 对每一试样进行观察检查，有生长的记作十，无生长的记作一。

3.5.14 如果试样容器长菌，按3.3.4方法确认生长菌是挑战微生物——铜绿假单胞菌。 3.5.15

如果所有容器都不长菌，则从浸过菌悬液的A 组取10个试样，B 组5个试样，分别按3.3进行培养基的营养检查。 3.5.16 试验注意事项

3.5.16.1

步骤3.3、步骤3.5.9、步骤3.5.15中进行的营养试验都合格，试样的挑战试

验才有效。