细胞凋亡实验(课堂PPT)
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细胞凋亡PPT教学课件
DNA电泳结果 凋亡细胞DNA链断裂示意图
三、细胞凋亡的调控
• （一）细胞凋亡相关因素：
• 1、诱导性因素：启动预定程序的因素。
• （1）激素和生长因子失衡：
•
激素和生长因子是细胞正常生长必不可少的因素，两者失
衡可启动凋亡。如应激时糖皮质激素增加可启动淋巴细胞凋亡。
• （2）理化因素：
•
放射线、高温、强酸、强碱、乙醇、抗癌药、氧自由基等。
B．Ni(OH)2
C．Cd
D．NiO(OH)
2、判断下列原电池中的正负极:
A
B
C
D
方法归纳：
原电池正负极判断方法：
1、根据两极材料判断 2、根据电子或电流的方向判断 3、根据电解质溶液离子的定向流动方向判断 4、根据原电池两极的反应来判断 5、根据现象判断
考查二： 电极反应方程式的书写
(07宁夏高考)将锌片和银片浸入稀硫酸中组成原电池， 两电极间连接一个电流计。
•
受损、突变、衰老的细胞以及针对自身抗原的细
胞、癌前病变细胞等大多通过细胞凋亡清除。
•
3、防御功能：
•
被病毒感染的细胞通过细胞凋亡、DNA降解，阻止
病毒复制。
二、细胞凋亡过程与调控
• （一）细胞凋亡过程： • 1、凋亡信号转导、凋亡基因的激活、细胞
凋亡的执行、凋亡细胞的清除： • 细胞内外因素通过受体、第二信使（cAMP、
回归课本：
阅读选修《化学反应原理》P12页 以铜锌原电池为例复习归纳原电池原理
真题巩固：
（07全国II理综）在盛有稀H2SO4的烧杯中放 入导线连接的锌片和铜片，下列叙述正确 的是 D
A．正极附近的SO42—离子浓度逐渐增大 B．电子通过导线由铜片流向锌片 C．正极有O2逸出 D．铜片上有H2逸出
细胞凋亡作用机理PPT课件
细胞衰老与细胞凋亡
.
1
衰老和死亡是生命的基本现象，生命要不断 的更新，种族要不断的繁衍。
而这种过程就是在生与死的矛盾中进行的。 至少从细胞水平来看，死亡是不可避免的。
衰老过程发生在生物界的整体水平、种群水 平、个体水平、细胞水平以及分子水平等不同 的层次。
.
2
第1节 细胞衰老
（CELL AGING, CELL SENESCENCE）
.
22
如果能发现所有的调控基因，分析其功 能，研究出能发挥或抑制这些基因功能的 药物，那么就可加速癌细胞自杀，达到治 疗癌症的目的，而同时提高免疫细胞的生 命力，则达到抵御艾滋病的目的。
.
19
包括人类在内的生物是由细胞组成的， 细胞的诞生固然非常重要，但细胞的死 亡也重要。。
.
20
早在２０世纪６０年代初期，科学家 就开始探索“程序性细胞死亡”的奥秘。 但要揭开这一奥秘，需要选择一个合适的 研究对象，像细菌这样的单细胞生物太简 单，而像哺乳动物这样由大量细胞组成的
生物又太复杂，科学家最终选择了线虫。
• 1972年澳大利亚Kerr和Curry提出~
.
9
12000
10000
publications
8000
6000
4000
2000
0
1970 1975 1980 1985 1990 1995 2000 2005
Thirty years on apoptosis
.
10
凋亡的回顾
* 线虫(C.elegant)中的细胞程序性死亡
➢细胞衰老的研究 衰老是细胞的一种重要的生命活动。
100多年前
1960s
➢Hayflick界限
.
1
衰老和死亡是生命的基本现象，生命要不断 的更新，种族要不断的繁衍。
而这种过程就是在生与死的矛盾中进行的。 至少从细胞水平来看，死亡是不可避免的。
衰老过程发生在生物界的整体水平、种群水 平、个体水平、细胞水平以及分子水平等不同 的层次。
.
2
第1节 细胞衰老
（CELL AGING, CELL SENESCENCE）
.
22
如果能发现所有的调控基因，分析其功 能，研究出能发挥或抑制这些基因功能的 药物，那么就可加速癌细胞自杀，达到治 疗癌症的目的，而同时提高免疫细胞的生 命力，则达到抵御艾滋病的目的。
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19
包括人类在内的生物是由细胞组成的， 细胞的诞生固然非常重要，但细胞的死 亡也重要。。
.
20
早在２０世纪６０年代初期，科学家 就开始探索“程序性细胞死亡”的奥秘。 但要揭开这一奥秘，需要选择一个合适的 研究对象，像细菌这样的单细胞生物太简 单，而像哺乳动物这样由大量细胞组成的
生物又太复杂，科学家最终选择了线虫。
• 1972年澳大利亚Kerr和Curry提出~
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9
12000
10000
publications
8000
6000
4000
2000
0
1970 1975 1980 1985 1990 1995 2000 2005
Thirty years on apoptosis
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10
凋亡的回顾
* 线虫(C.elegant)中的细胞程序性死亡
➢细胞衰老的研究 衰老是细胞的一种重要的生命活动。
100多年前
1960s
➢Hayflick界限
细胞的凋亡 PPT课件1 中图版
第二章第一节 细胞凋亡
高贯讲
第一节 细胞凋亡
• 细胞凋亡的概念 • 细胞凋亡的过程 • 细胞凋亡的机制 • 细胞凋亡的生物学意义 • 细胞凋亡与人类健康 • 细胞凋亡与细胞坏亡的概念：
细胞凋亡 是指生物个体 生长发育过程 中,由基因控 制的,按照一 定程序发生的 细胞死亡,因 而又称为编程 性细胞死亡.
•
17、一个人只要强烈地坚持不懈地追求，他就能达到目的。你在希望中享受到的乐趣，比将来实际享受的乐趣要大得多。
•
18、无论是对事还是对人，我们只需要做好自己的本分，不与过多人建立亲密的关系，也不要因为关系亲密便掏心掏肺，切莫交浅言深，应适可而止。
•
19、大家常说一句话，认真你就输了，可是不认真的话，这辈子你就废了，自己的人生都不认真面对的话，那谁要认真对待你。
激活肿瘤细胞的自杀程序。
2、帕金森氏综合症、再生障碍性贫血 等（神经系统退行性疾病）与细胞凋亡 过盛有关。
治疗措施：运用神经生长因子延缓神经 细胞凋亡。
返回
凋亡与坏死
细胞凋亡与细胞坏死是截然不同的过 程与生物现象。
坏死常常是由于严重紊乱了细胞外环 境条件所致，并伴有不可控制的细胞肿胀 和破裂，细胞坏死首先是膜通透性的增加
•
3、无论正在经历什么，都请不要轻言放弃，因为从来没有一种坚持会被辜负。谁的人生不是荆棘前行，生活从来不会一蹴而就，也不会永远安稳，只要努力，就能做独一无二平凡可贵的自己。
•
4、努力本就是年轻人应有的状态，是件充实且美好的事，可一旦有了表演的成分，就会显得廉价，努力，不该是为了朋友圈多获得几个赞，不该是每次长篇赘述后的自我感动，它是一件平凡而自然而然的事，最佳的努力不过是：但行好事，莫问前程。愿努力，成就更好的你！
高贯讲
第一节 细胞凋亡
• 细胞凋亡的概念 • 细胞凋亡的过程 • 细胞凋亡的机制 • 细胞凋亡的生物学意义 • 细胞凋亡与人类健康 • 细胞凋亡与细胞坏亡的概念：
细胞凋亡 是指生物个体 生长发育过程 中,由基因控 制的,按照一 定程序发生的 细胞死亡,因 而又称为编程 性细胞死亡.
•
17、一个人只要强烈地坚持不懈地追求，他就能达到目的。你在希望中享受到的乐趣，比将来实际享受的乐趣要大得多。
•
18、无论是对事还是对人，我们只需要做好自己的本分，不与过多人建立亲密的关系，也不要因为关系亲密便掏心掏肺，切莫交浅言深，应适可而止。
•
19、大家常说一句话，认真你就输了，可是不认真的话，这辈子你就废了，自己的人生都不认真面对的话，那谁要认真对待你。
激活肿瘤细胞的自杀程序。
2、帕金森氏综合症、再生障碍性贫血 等（神经系统退行性疾病）与细胞凋亡 过盛有关。
治疗措施：运用神经生长因子延缓神经 细胞凋亡。
返回
凋亡与坏死
细胞凋亡与细胞坏死是截然不同的过 程与生物现象。
坏死常常是由于严重紊乱了细胞外环 境条件所致，并伴有不可控制的细胞肿胀 和破裂，细胞坏死首先是膜通透性的增加
•
3、无论正在经历什么，都请不要轻言放弃，因为从来没有一种坚持会被辜负。谁的人生不是荆棘前行，生活从来不会一蹴而就，也不会永远安稳，只要努力，就能做独一无二平凡可贵的自己。
•
4、努力本就是年轻人应有的状态，是件充实且美好的事，可一旦有了表演的成分，就会显得廉价，努力，不该是为了朋友圈多获得几个赞，不该是每次长篇赘述后的自我感动，它是一件平凡而自然而然的事，最佳的努力不过是：但行好事，莫问前程。愿努力，成就更好的你！
细胞凋亡检测方法ppt课件
1. 大分子染色体DNA片段的测定
• 细胞凋亡的早期,染色体断裂成为50~300kbp长的DNA大 片段。所有超过一定分子量大小的双链DNA分子在琼脂糖 凝胶中的迁移速度相同。线性DNA的双螺旋半径超过凝胶 半径时，即达到分辨力的极限。此时凝胶不再按分子量的 大小来筛分DNA，DNA像通过弯管一样，以其一端指向电 场一极而通过凝胶，这种迁移模式称之为"爬行"。因此， 细胞凋亡早期产生的50~300kbp长的DNA大片段不能用普 通的琼脂糖凝胶电泳来分离。通常采用脉冲电泳技术可圆 满地解决这一问题。这个方法是在凝胶上外加正交的交变 脉冲电场。每当电场方向改变后，大的DNA分子便滞流在 爬行管中，直至新的电场轴向重新定向后，才能继续向前 移动。DNA分子量越大，这种重排所需要的时间就越长。 当DNA分子变换方向的时间小于电脉冲周期时，DNA就可 以按其分子量大小分开。
• 线粒体跨膜电位的存在，使一些亲脂性阳离子荧光染料如 Rhodamine 123、3，3-Dihexyloxacarbocyanine iodide[DiOC6（3）]、Tetrechloro-tetraethylbenzimidazol carbocyanine iodide[JC-1]、Tetramethyl rhodamine methyl ester(TMRM)等可结合到线粒体基质，其荧光的增 强或减弱说明线粒体内膜电负性的增高或降低。
结果
注意事项：1. 整个操作动作要尽量 轻柔，勿用力吹打细胞。 2. 操作时注意避光，反应完毕后尽 快在一小时内检测。
三、线粒体膜势能的检测
• 线粒体在细胞凋亡的过程中起着枢纽作用，多种细胞凋亡 刺激因子均可诱导不同的细胞发生亡，而线粒体跨膜电 位的下降，被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的 事件，它发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA断裂 ）出现之前，一旦线粒体DYmt崩溃，则细胞凋亡不可逆 转
细胞凋亡及其检测方法PPT课件
2、培养细胞 对细胞株或原代培养的细胞几乎所 有的方法都可用。
细胞凋亡的检测方法
普通光学显微镜观察方法 透射电子显微镜观察方法 荧光显微镜观察方法 琼脂糖凝胶电泳 原位末端标记技术 流式细胞仪染色法
Astrocytes under Ischemia
(Electron Micrograph)
domain）， TRADD （TNFR1-associated death domain protein）； 3、 Bcl-2蛋白家族； 4、细胞色素C及Caspase蛋白酶； 5、 P53
Bcl-2家族
抑制凋亡 促进凋亡
家族成员 bcl-2 bcl-XL mcl-1 bax bcl-Xs bad bak
– 2、Ca2+的释放打破了细胞内结构的稳定，使得细胞凋 亡效应系统的关键成分与细胞结构正常时不能接触到的 基质接触，从而触发细胞凋亡。
（四）胞浆pH值的变化 – 1、胞浆酸化主要通过激活酸性DNaseⅡ启动细胞凋亡； – 2、[pH]i降低也增强了一些酸性蛋白质功能，如转谷氨 酰胺酶、酸性鞘磷脂酶；
(6)加入20μl TE缓冲液溶解DNA。
(7)取标记DNA20μl加上样缓冲液4μl，混匀后加样于1.8%琼脂糖凝 胶，50V 电泳约2h。
(8)电泳后的凝胶置滤纸上烘干，进地放射自显影。
有助于疾病的防治——激活或抑制细胞“自
杀程序” ；
重大挑战
控制细胞凋亡的信号通道的正常与异常机理
王晓东教授主要研究成果集中在对于哺乳动物细胞凋 亡的生化调控机制和信号通路的研究。2004年4 月21 日当选为美国科学院最年轻的院士。
教学目的
1、掌握细胞凋亡的特征。 2、通过对细胞凋亡检测方法的学习，能结
细胞凋亡的检测方法
普通光学显微镜观察方法 透射电子显微镜观察方法 荧光显微镜观察方法 琼脂糖凝胶电泳 原位末端标记技术 流式细胞仪染色法
Astrocytes under Ischemia
(Electron Micrograph)
domain）， TRADD （TNFR1-associated death domain protein）； 3、 Bcl-2蛋白家族； 4、细胞色素C及Caspase蛋白酶； 5、 P53
Bcl-2家族
抑制凋亡 促进凋亡
家族成员 bcl-2 bcl-XL mcl-1 bax bcl-Xs bad bak
– 2、Ca2+的释放打破了细胞内结构的稳定，使得细胞凋 亡效应系统的关键成分与细胞结构正常时不能接触到的 基质接触，从而触发细胞凋亡。
（四）胞浆pH值的变化 – 1、胞浆酸化主要通过激活酸性DNaseⅡ启动细胞凋亡； – 2、[pH]i降低也增强了一些酸性蛋白质功能，如转谷氨 酰胺酶、酸性鞘磷脂酶；
(6)加入20μl TE缓冲液溶解DNA。
(7)取标记DNA20μl加上样缓冲液4μl，混匀后加样于1.8%琼脂糖凝 胶，50V 电泳约2h。
(8)电泳后的凝胶置滤纸上烘干，进地放射自显影。
有助于疾病的防治——激活或抑制细胞“自
杀程序” ；
重大挑战
控制细胞凋亡的信号通道的正常与异常机理
王晓东教授主要研究成果集中在对于哺乳动物细胞凋 亡的生化调控机制和信号通路的研究。2004年4 月21 日当选为美国科学院最年轻的院士。
教学目的
1、掌握细胞凋亡的特征。 2、通过对细胞凋亡检测方法的学习，能结
细胞的凋亡ppt1 优秀课件
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细胞凋亡的生物学意义
• 1、有利于清除多余、无用细胞。 • 2、有利于清除完成正常使命的衰 老细胞。 • 3、有利于清除体内的有害细胞。 • 4、维持器官和组织中细胞数目的 相对稳定。
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细胞凋亡与人类健康 • 1、肿瘤的发生、自身免疫疾病等
与细胞凋亡不足有关。 • 治疗措施：放射疗法或化学疗法来 激活肿瘤细胞的自杀程序。
2002诺贝尔奖得主
英国的西德尼· 布伦纳(Sydney Brenner)
约翰· E· 苏尔斯顿 (John E.Sulston)
•
美国的H· 罗伯特· 霍维兹 (H.Robert Horvitz)
85.每一年，我都更加相信生命的浪费是在于：我们没有献出爱，我们没有使用力量，我们表现出自私的谨慎，不去冒险，避开痛苦，也失去了快乐。――[约翰· B· 塔布] 86.微笑，昂首阔步，作深呼吸，嘴里哼着歌儿。倘使你不会唱歌，吹吹口哨或用鼻子哼一哼也可。如此一来，你想让自己烦恼都不可能。――[戴尔· 卡内基] 87.当一切毫无希望时，我看着切石工人在他的石头上，敲击了上百次，而不见任何裂痕出现。但在第一百零一次时，石头被劈成两半。我体会到，并非那一击，而是前面的敲打使它裂开。――[贾柯· 瑞斯] 88.每个意念都是一场祈祷。――[詹姆士· 雷德非] 89.虚荣心很难说是一种恶行，然而一切恶行都围绕虚荣心而生，都不过是满足虚荣心的手段。――[柏格森] 90.习惯正一天天地把我们的生命变成某种定型的化石，我们的心灵正在失去自由，成为平静而没有激情的时间之流的奴隶。――[托尔斯泰] 91.要及时把握梦想，因为梦想一死，生命就如一只羽翼受创的小鸟，无法飞翔。――[兰斯顿· 休斯] 92.生活的艺术较像角力的艺术，而较不像跳舞的艺术；最重要的是：站稳脚步，为无法预见的攻击做准备。――[玛科斯· 奥雷利阿斯] 93.在安详静谧的大自然里，确实还有些使人烦恼.怀疑.感到压迫的事。请你看看蔚蓝的天空和闪烁的星星吧!你的心将会平静下来。[约翰· 纳森· 爱德瓦兹] 94.对一个适度工作的人而言，快乐来自于工作，有如花朵结果前拥有彩色的花瓣。――[约翰· 拉斯金] 95.没有比时间更容易浪费的,同时没有比时间更珍贵的了，因为没有时间我们几乎无法做任何事。――[威廉· 班] 96.人生真正的欢欣，就是在于你自认正在为一个伟大目标运用自己；而不是源于独自发光.自私渺小的忧烦躯壳，只知抱怨世界无法带给你快乐。――[萧伯纳] 97.有三个人是我的朋友爱我的人.恨我的人.以及对我冷漠的人。 爱我的人教我温柔；恨我的人教我谨慎；对我冷漠的人教我自立。――[J·E·丁格] 98.过去的事已经一去不复返。聪明的人是考虑现在和未来，根本无暇去想过去的事。――[英国哲学家培根] 99.真正的发现之旅不只是为了寻找全新的景色，也为了拥有全新的眼光。――[马塞尔· 普劳斯特] 100.这个世界总是充满美好的事物，然而能看到这些美好事物的人，事实上是少之又少。――[罗丹] 101.称赞不但对人的感情，而且对人的理智也发生巨大的作用，在这种令人愉快的影响之下，我觉得更加聪明了，各种想法，以异常的速度接连涌入我的脑际。――[托尔斯泰] 102.人生过程的景观一直在变化，向前跨进，就看到与初始不同的景观，再上前去，又是另一番新的气候――。[叔本华] 103.为何我们如此汲汲于名利，如果一个人和他的同伴保持不一样的速度，或许他耳中听到的是不同的旋律，让他随他所听到的旋律走，无论快慢或远近。――[梭罗] 104.我们最容易不吝惜的是时间，而我们应该最担心的也是时间；因为没有时间的话，我们在世界上什么也不能做。――[威廉· 彭] 105.人类的悲剧，就是想延长自己的寿命。我们往往只憧憬地平线那端的神奇【违禁词，被屏蔽】，而忘了去欣赏今天窗外正在盛开的玫瑰花。――[戴尔· 卡内基] 106.休息并非无所事事，夏日炎炎时躺在树底下的草地，听着潺潺的水声，看着飘过的白云，亦非浪费时间。――[约翰· 罗伯克] 107.没有人会只因年龄而衰老，我们是因放弃我们的理想而衰老。年龄会使皮肤老化，而放弃热情却会使灵魂老化。――[撒母耳· 厄尔曼] 108.快乐和智能的区别在于：自认最快乐的人实际上就是最快乐的，但自认为最明智的人一般而言却是最愚蠢的。――[卡雷贝· C· 科尔顿] 109.每个人皆有连自己都不清楚的潜在能力。无论是谁，在千钧一发之际，往往能轻易解决从前认为极不可能解决的事。――[戴尔· 卡内基] 110.每天安静地坐十五分钟· 倾听你的气息，感觉它，感觉你自己，并且试着什么都不想。――[艾瑞克· 佛洛姆] 111.你知道何谓沮丧---就是你用一辈子工夫，在公司或任何领域里往上攀爬，却在抵达最高处的同时，发现自己爬错了墙头。－－[坎伯] 112.「伟大」这个名词未必非出现在规模很大的事情不可；生活中微小之处，照样可以伟大。――[布鲁克斯] 113.人生的目的有二：先是获得你想要的；然后是享受你所获得的。只有最明智的人类做到第二点。――[罗根· 皮沙尔· 史密斯] 114.要经常听.时常想.时时学习，才是真正的生活方式。对任何事既不抱希望，也不肯学习的人，没有生存的资格。 ――[阿萨· 赫尔帕斯爵士] 115.旅行的精神在于其自由，完全能够随心所欲地去思考.去感觉.去行动的自由。――[威廉· 海兹利特] 116.昨天是张退票的支票，明天是张信用卡，只有今天才是现金；要善加利用。――[凯· 里昂] 117.所有的财富都是建立在健康之上。浪费金钱是愚蠢的事，浪费健康则是二级的谋杀罪。――[B·C·福比斯] 118.明知不可而为之的干劲可能会加速走向油尽灯枯的境地，努力挑战自己的极限固然是令人激奋的经验，但适度的休息绝不可少，否则迟早会崩溃。――[迈可· 汉默] 119.进步不是一条笔直的过程，而是螺旋形的路径，时而前进，时而折回，停滞后又前进，有失有得，有付出也有收获。――[奥古斯汀] 120.无论那个时代，能量之所以能够带来奇迹，主要源于一股活力，而活力的核心元素乃是意志。无论何处，活力皆是所谓“人格力量”的原动力，也是让一切伟大行动得以持续的力量。――[史迈尔斯] 121.有两种人是没有什么价值可言的：一种人无法做被吩咐去做的事，另一种人只能做被吩咐去做的事。――[C·H·K·寇蒂斯] 122.对于不会利用机会的人而言，机会就像波浪般奔向茫茫的大海，或是成为不会孵化的蛋。――[乔治桑] 123.未来不是固定在那里等你趋近的，而是要靠你创造。未来的路不会静待被发现，而是需要开拓，开路的过程，便同时改变了你和未来。――[约翰· 夏尔] 124.一个人的年纪就像他的鞋子的大小那样不重要。如果他对生活的兴趣不受到伤害，如果他很慈悲，如果时间使他成熟而没有了偏见。――[道格拉斯· 米尔多] 125.大凡宇宙万物，都存在着正、反两面，所以要养成由后面.里面，甚至是由相反的一面，来观看事物的态度――。[老子] 126.在寒冷中颤抖过的人倍觉太阳的温暖，经历过各种人生烦恼的人，才懂得生命的珍贵。――[怀特曼] 127.一般的伟人总是让身边的人感到渺小；但真正的伟人却能让身边的人认为自己很伟大。――[G.K.Chesteron] 128.医生知道的事如此的少，他们的收费却是如此的高。――[马克吐温] 129.问题不在于：一个人能够轻蔑、藐视或批评什么，而是在于：他能够喜爱、看重以及欣赏什么。――[约翰· 鲁斯金]
细胞凋亡的生物学意义
• 1、有利于清除多余、无用细胞。 • 2、有利于清除完成正常使命的衰 老细胞。 • 3、有利于清除体内的有害细胞。 • 4、维持器官和组织中细胞数目的 相对稳定。
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细胞凋亡与人类健康 • 1、肿瘤的发生、自身免疫疾病等
与细胞凋亡不足有关。 • 治疗措施：放射疗法或化学疗法来 激活肿瘤细胞的自杀程序。
2002诺贝尔奖得主
英国的西德尼· 布伦纳(Sydney Brenner)
约翰· E· 苏尔斯顿 (John E.Sulston)
•
美国的H· 罗伯特· 霍维兹 (H.Robert Horvitz)
85.每一年，我都更加相信生命的浪费是在于：我们没有献出爱，我们没有使用力量，我们表现出自私的谨慎，不去冒险，避开痛苦，也失去了快乐。――[约翰· B· 塔布] 86.微笑，昂首阔步，作深呼吸，嘴里哼着歌儿。倘使你不会唱歌，吹吹口哨或用鼻子哼一哼也可。如此一来，你想让自己烦恼都不可能。――[戴尔· 卡内基] 87.当一切毫无希望时，我看着切石工人在他的石头上，敲击了上百次，而不见任何裂痕出现。但在第一百零一次时，石头被劈成两半。我体会到，并非那一击，而是前面的敲打使它裂开。――[贾柯· 瑞斯] 88.每个意念都是一场祈祷。――[詹姆士· 雷德非] 89.虚荣心很难说是一种恶行，然而一切恶行都围绕虚荣心而生，都不过是满足虚荣心的手段。――[柏格森] 90.习惯正一天天地把我们的生命变成某种定型的化石，我们的心灵正在失去自由，成为平静而没有激情的时间之流的奴隶。――[托尔斯泰] 91.要及时把握梦想，因为梦想一死，生命就如一只羽翼受创的小鸟，无法飞翔。――[兰斯顿· 休斯] 92.生活的艺术较像角力的艺术，而较不像跳舞的艺术；最重要的是：站稳脚步，为无法预见的攻击做准备。――[玛科斯· 奥雷利阿斯] 93.在安详静谧的大自然里，确实还有些使人烦恼.怀疑.感到压迫的事。请你看看蔚蓝的天空和闪烁的星星吧!你的心将会平静下来。[约翰· 纳森· 爱德瓦兹] 94.对一个适度工作的人而言，快乐来自于工作，有如花朵结果前拥有彩色的花瓣。――[约翰· 拉斯金] 95.没有比时间更容易浪费的,同时没有比时间更珍贵的了，因为没有时间我们几乎无法做任何事。――[威廉· 班] 96.人生真正的欢欣，就是在于你自认正在为一个伟大目标运用自己；而不是源于独自发光.自私渺小的忧烦躯壳，只知抱怨世界无法带给你快乐。――[萧伯纳] 97.有三个人是我的朋友爱我的人.恨我的人.以及对我冷漠的人。 爱我的人教我温柔；恨我的人教我谨慎；对我冷漠的人教我自立。――[J·E·丁格] 98.过去的事已经一去不复返。聪明的人是考虑现在和未来，根本无暇去想过去的事。――[英国哲学家培根] 99.真正的发现之旅不只是为了寻找全新的景色，也为了拥有全新的眼光。――[马塞尔· 普劳斯特] 100.这个世界总是充满美好的事物，然而能看到这些美好事物的人，事实上是少之又少。――[罗丹] 101.称赞不但对人的感情，而且对人的理智也发生巨大的作用，在这种令人愉快的影响之下，我觉得更加聪明了，各种想法，以异常的速度接连涌入我的脑际。――[托尔斯泰] 102.人生过程的景观一直在变化，向前跨进，就看到与初始不同的景观，再上前去，又是另一番新的气候――。[叔本华] 103.为何我们如此汲汲于名利，如果一个人和他的同伴保持不一样的速度，或许他耳中听到的是不同的旋律，让他随他所听到的旋律走，无论快慢或远近。――[梭罗] 104.我们最容易不吝惜的是时间，而我们应该最担心的也是时间；因为没有时间的话，我们在世界上什么也不能做。――[威廉· 彭] 105.人类的悲剧，就是想延长自己的寿命。我们往往只憧憬地平线那端的神奇【违禁词，被屏蔽】，而忘了去欣赏今天窗外正在盛开的玫瑰花。――[戴尔· 卡内基] 106.休息并非无所事事，夏日炎炎时躺在树底下的草地，听着潺潺的水声，看着飘过的白云，亦非浪费时间。――[约翰· 罗伯克] 107.没有人会只因年龄而衰老，我们是因放弃我们的理想而衰老。年龄会使皮肤老化，而放弃热情却会使灵魂老化。――[撒母耳· 厄尔曼] 108.快乐和智能的区别在于：自认最快乐的人实际上就是最快乐的，但自认为最明智的人一般而言却是最愚蠢的。――[卡雷贝· C· 科尔顿] 109.每个人皆有连自己都不清楚的潜在能力。无论是谁，在千钧一发之际，往往能轻易解决从前认为极不可能解决的事。――[戴尔· 卡内基] 110.每天安静地坐十五分钟· 倾听你的气息，感觉它，感觉你自己，并且试着什么都不想。――[艾瑞克· 佛洛姆] 111.你知道何谓沮丧---就是你用一辈子工夫，在公司或任何领域里往上攀爬，却在抵达最高处的同时，发现自己爬错了墙头。－－[坎伯] 112.「伟大」这个名词未必非出现在规模很大的事情不可；生活中微小之处，照样可以伟大。――[布鲁克斯] 113.人生的目的有二：先是获得你想要的；然后是享受你所获得的。只有最明智的人类做到第二点。――[罗根· 皮沙尔· 史密斯] 114.要经常听.时常想.时时学习，才是真正的生活方式。对任何事既不抱希望，也不肯学习的人，没有生存的资格。 ――[阿萨· 赫尔帕斯爵士] 115.旅行的精神在于其自由，完全能够随心所欲地去思考.去感觉.去行动的自由。――[威廉· 海兹利特] 116.昨天是张退票的支票，明天是张信用卡，只有今天才是现金；要善加利用。――[凯· 里昂] 117.所有的财富都是建立在健康之上。浪费金钱是愚蠢的事，浪费健康则是二级的谋杀罪。――[B·C·福比斯] 118.明知不可而为之的干劲可能会加速走向油尽灯枯的境地，努力挑战自己的极限固然是令人激奋的经验，但适度的休息绝不可少，否则迟早会崩溃。――[迈可· 汉默] 119.进步不是一条笔直的过程，而是螺旋形的路径，时而前进，时而折回，停滞后又前进，有失有得，有付出也有收获。――[奥古斯汀] 120.无论那个时代，能量之所以能够带来奇迹，主要源于一股活力，而活力的核心元素乃是意志。无论何处，活力皆是所谓“人格力量”的原动力，也是让一切伟大行动得以持续的力量。――[史迈尔斯] 121.有两种人是没有什么价值可言的：一种人无法做被吩咐去做的事，另一种人只能做被吩咐去做的事。――[C·H·K·寇蒂斯] 122.对于不会利用机会的人而言，机会就像波浪般奔向茫茫的大海，或是成为不会孵化的蛋。――[乔治桑] 123.未来不是固定在那里等你趋近的，而是要靠你创造。未来的路不会静待被发现，而是需要开拓，开路的过程，便同时改变了你和未来。――[约翰· 夏尔] 124.一个人的年纪就像他的鞋子的大小那样不重要。如果他对生活的兴趣不受到伤害，如果他很慈悲，如果时间使他成熟而没有了偏见。――[道格拉斯· 米尔多] 125.大凡宇宙万物，都存在着正、反两面，所以要养成由后面.里面，甚至是由相反的一面，来观看事物的态度――。[老子] 126.在寒冷中颤抖过的人倍觉太阳的温暖，经历过各种人生烦恼的人，才懂得生命的珍贵。――[怀特曼] 127.一般的伟人总是让身边的人感到渺小；但真正的伟人却能让身边的人认为自己很伟大。――[G.K.Chesteron] 128.医生知道的事如此的少，他们的收费却是如此的高。――[马克吐温] 129.问题不在于：一个人能够轻蔑、藐视或批评什么，而是在于：他能够喜爱、看重以及欣赏什么。――[约翰· 鲁斯金]
《细胞凋亡》幻灯片PPT
细胞坏死
apoptosis 概述
一般过程：因补体反响或烈性病毒感染破坏了质 膜，或者能量依赖性离子泵被破坏产生的钠钾等 离子沿着各自的浓度梯度进入细胞，从而导致细 胞吸水膨胀，最终破膜而死。
特征：线粒体膨胀，细胞骨架降解，溶酶体释放酶， 细胞核内染色质沉淀靠近核膜边，蛋白质合成下降， 由于膜破裂，出现炎症反响。
移，使骨架蛋白交联形成，有利于凋亡小体形成。
3〕激活核转录因子，加速细胞凋亡相关基因的转录。
4〕Ca 2+在ATP的配合下使DNA舒展，暴露出核小体之 间的连接区内的酶切位点。
apoptosis
〔二〕细胞凋亡信号的转导
多样性：不同种类的细胞有不同的信号转导系统
偶联性：死亡信号的转导系统与细胞增殖、分化过 程中的信号转导系统在某些环节上有穿插、偶联。
apoptosis 概述
凋亡的病理意义
•器官功能障碍 •恶性肿瘤发生
apoptosis
细胞凋亡过程的三个阶段
• 诱导期 • 效应期 • 降解期
apoptosis
凋亡
诱导 +受体 因素
cAMP
死
Ca2+
亡
神经酰胺
信
〔第二信使〕 号
诱导期
Dnase激活 Caspases激活
降解期
凋亡相关基因激活
效应期 巨噬细胞吞噬 分解凋亡细胞
分布：造血细胞，上皮细胞，淋巴细胞等多 种瘤细胞
抗凋亡机制： •直接抗氧化 •抑制线粒体释放促凋亡蛋白质 •抑制凋亡调节蛋白对细胞的毒作用 •抑制凋亡蛋白酶的激活
P53基因
wtP53
修复受损的DNA，如修复失败那么诱导细胞
凋亡
射线，毒素
细胞凋亡的机理PPT课件
24
凋亡相对不足
肿瘤、自身免疫性疾病、 病毒感染等
-
25
（三）凋亡与疾病
细胞凋亡与疾病的关系—— 该“死”的细胞不 死，不该“死”的细胞却死了，也就是说无论凋 亡过度或凋亡不足都可以导致疾病的发生。 • 细胞凋亡不足：肿瘤，自身免疫病， • 细胞凋亡过度：心肌缺血，心力衰竭，神经元退 行性疾病，病毒感染 • 不足与过度并存：动脉粥样硬化
凋亡相关 基因激活
死亡信号
信 号 转 导
Dnase激活
细胞核
Caspases激活
凋亡过- 程Ⅰ
2
Caspases激活 DNase激活
凋亡执行
apoptosis 凋亡过程与调控
凋亡细胞的 清除
凋亡过程Ⅱ
-
3
• 线虫Caenorhabditis elegans是研究个体发育和细胞 程序性死亡的理想材料（生命周期短，细胞数量少）。
丧失监视DNA损伤的功能
-
14
4．myc
• 在许多人类恶性肿瘤细胞中都发现有cmyc的过度表达，它能促进细胞增殖、抑 制分化。 在凋亡细胞中c-myc也是高表达， 作为转录调控因子，一方面它能激活那些 控制细胞增殖的基因，另一方面也激活促 进细胞凋亡的基因，给细胞两种选择：增 殖或凋亡。当生长因子存在、Bcl-2基因表 达时，促进细胞增殖，反之细胞凋亡。
的发生中起重要作用
表现为
线粒体内膜通透性↑
线粒体内膜的跨膜电位Δψm↓
能量合成水平↓
线粒体功能和结构破坏引起细胞凋亡的可能机制：
凋亡诱导因素作用于细胞后
线粒体内膜跨膜电位（Δψm）下降， 线粒体内外膜 之间的通透性转换孔PTP开放；
使细胞凋亡启动因子（Cyt.C）,凋亡蛋白酶激活因子
凋亡相对不足
肿瘤、自身免疫性疾病、 病毒感染等
-
25
（三）凋亡与疾病
细胞凋亡与疾病的关系—— 该“死”的细胞不 死，不该“死”的细胞却死了，也就是说无论凋 亡过度或凋亡不足都可以导致疾病的发生。 • 细胞凋亡不足：肿瘤，自身免疫病， • 细胞凋亡过度：心肌缺血，心力衰竭，神经元退 行性疾病，病毒感染 • 不足与过度并存：动脉粥样硬化
凋亡相关 基因激活
死亡信号
信 号 转 导
Dnase激活
细胞核
Caspases激活
凋亡过- 程Ⅰ
2
Caspases激活 DNase激活
凋亡执行
apoptosis 凋亡过程与调控
凋亡细胞的 清除
凋亡过程Ⅱ
-
3
• 线虫Caenorhabditis elegans是研究个体发育和细胞 程序性死亡的理想材料（生命周期短，细胞数量少）。
丧失监视DNA损伤的功能
-
14
4．myc
• 在许多人类恶性肿瘤细胞中都发现有cmyc的过度表达，它能促进细胞增殖、抑 制分化。 在凋亡细胞中c-myc也是高表达， 作为转录调控因子，一方面它能激活那些 控制细胞增殖的基因，另一方面也激活促 进细胞凋亡的基因，给细胞两种选择：增 殖或凋亡。当生长因子存在、Bcl-2基因表 达时，促进细胞增殖，反之细胞凋亡。
的发生中起重要作用
表现为
线粒体内膜通透性↑
线粒体内膜的跨膜电位Δψm↓
能量合成水平↓
线粒体功能和结构破坏引起细胞凋亡的可能机制：
凋亡诱导因素作用于细胞后
线粒体内膜跨膜电位（Δψm）下降， 线粒体内外膜 之间的通透性转换孔PTP开放；
使细胞凋亡启动因子（Cyt.C）,凋亡蛋白酶激活因子
细胞的凋亡ppt1 中图版精选教学PPT课件
作者简介：谈笑在指尖 文章，诗歌多见于省内外报刊和网络平台。喜欢把日子中的点点滴如同一次旅行，一次不清楚哪里是终点的旅行。在人生的旅程中，有些人走的很从容，一边走一边欣赏着沿途的风景，春天踏青，感受万物复苏时生命的萌动；夏日赏荷，嗅闻花儿的芳香，聆听悠扬的蝉鸣；秋时听风，欣赏落叶在秋风中忘情的舞动；冬日品雪，品味银装素裹的晶莹，让自己的人生如四季绚烂，多姿多彩。有些人却是步履匆匆，他们只顾埋头盯着脚下的道路，拼命的赶完余下的旅程，一路上，只顾疲于奔跑，疲于生存，疲于生，看不见路边花儿的美丽，也注意不到蔚蓝天空中白云的漂浮，一心只忙于到达目的地，一程又一
凡事都是多棱镜，不同的角度会看到不同的结果。若能把一些事看淡了，就会有个好心境，若把很多事看开了，就会有个好心情。让聚散离合犹如月缺月圆那样寻常，让得失利弊犹如花开花谢那样自然，不计较，也不刻意执着；让生命中各种的喜怒哀乐，就像风儿一样，来了，不管是清风拂面，还是寒风凛冽，都报以自然的微笑，坦然的接受命运的馈赠，把是非曲折，都当作是人生的定数，不因攀比而困惑，不为贪婪而费神，无论欢乐还是忧伤，都用平常心去接受；无论得到还是失去，都用坦然的心去面对，人生原本就是在得与失中轮回的，让一切所有的经历，都化 人的一生说白了，也就是三万余天，贫穷与富贵，都是一种生活境遇。懂得爱自己的人，对生活从来就没有过高的奢望，只是对生存的现状欣然接受。漠漠红尘，芸芸众生皆是客，时光深处，流年似水，转瞬间，光阴就会老去，留在心头的，只是弥留在时光深处的无边落寞。轻拥沧桑，淡看流年，掬一捧岁月，握一份懂得，红尘纷扰，我自心安；书一笔清远，盈一抹恬淡，浮华三千，只做自己；人间有情，心中有爱，携一米阳光，微笑向暖。
的，辉用了最短的时间好了起来！ 距离并不是他们製造浪漫的障碍，除了电话，他们能选择的只有电话了，电话比网络真实好多，至少可以听到对方的声音。
凡事都是多棱镜，不同的角度会看到不同的结果。若能把一些事看淡了，就会有个好心境，若把很多事看开了，就会有个好心情。让聚散离合犹如月缺月圆那样寻常，让得失利弊犹如花开花谢那样自然，不计较，也不刻意执着；让生命中各种的喜怒哀乐，就像风儿一样，来了，不管是清风拂面，还是寒风凛冽，都报以自然的微笑，坦然的接受命运的馈赠，把是非曲折，都当作是人生的定数，不因攀比而困惑，不为贪婪而费神，无论欢乐还是忧伤，都用平常心去接受；无论得到还是失去，都用坦然的心去面对，人生原本就是在得与失中轮回的，让一切所有的经历，都化 人的一生说白了，也就是三万余天，贫穷与富贵，都是一种生活境遇。懂得爱自己的人，对生活从来就没有过高的奢望，只是对生存的现状欣然接受。漠漠红尘，芸芸众生皆是客，时光深处，流年似水，转瞬间，光阴就会老去，留在心头的，只是弥留在时光深处的无边落寞。轻拥沧桑，淡看流年，掬一捧岁月，握一份懂得，红尘纷扰，我自心安；书一笔清远，盈一抹恬淡，浮华三千，只做自己；人间有情，心中有爱，携一米阳光，微笑向暖。
的，辉用了最短的时间好了起来！ 距离并不是他们製造浪漫的障碍，除了电话，他们能选择的只有电话了，电话比网络真实好多，至少可以听到对方的声音。
细胞凋亡实验PPT课件
（一）形态学改变
初期：
中期：
细胞变圆 微绒毛消失 胞质浓缩 空泡化
核染色质高度浓缩 凝集在核周边,边集 细胞体积缩小
胞膜内陷 出芽
浓缩核裂解 膜自行分割
凋亡小体
后期：
邻近的上皮细胞、MΦ、
瘤细胞.等吞噬凋亡小体
5
Normal Cell
Apoptotic cell
.
6
（二）、生化改变
１、DNA片段化－主要特征 2、内源性核酸内切酶（Ｄnase)激活 3、凋亡蛋白酶（Caspases）激活
.
25
.
26
谢谢！
.
27
A
B
.
16
（二）Annexinⅴ/PI双染色
• 原理：磷脂酰丝氨酸（PS）主要存在于细胞膜内侧，细胞凋 亡时，它移向细胞外侧。可能是PS膜内外转位酶的早期激活 有关。Annexinⅴ是一种Ca2＋依赖磷脂结合蛋白，对PS有高度 亲和性。
• PS外翻不是凋亡细胞所特有，坏死细胞也可发生。 • 两种细胞的区别在于早期凋亡细胞细胞膜是完整的，而坏死
• Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用，其 中caspase-3为关键的执行分子，它在凋亡信号传导的许多途径 中发挥功能。Caspase-3正常以酶原(32KD)的形式存在于胞浆中， 在凋亡的早期阶段，它被激活，活化的Caspase-3由两个大亚基 (17KD)和两个小亚基(12KD)组成，裂解相应的胞浆胞核底物，最 终导致细胞凋亡。但在细胞凋亡的晚期和死亡细胞，caspase-3 的活性明显下降。
.
20
• 亲脂性阳离子荧光探针JC-1以单体形式存在，可发出绿色荧光 （527 nm），若以多聚体形式存在，可发出红色荧光（590 nm）.
初期：
中期：
细胞变圆 微绒毛消失 胞质浓缩 空泡化
核染色质高度浓缩 凝集在核周边,边集 细胞体积缩小
胞膜内陷 出芽
浓缩核裂解 膜自行分割
凋亡小体
后期：
邻近的上皮细胞、MΦ、
瘤细胞.等吞噬凋亡小体
5
Normal Cell
Apoptotic cell
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6
（二）、生化改变
１、DNA片段化－主要特征 2、内源性核酸内切酶（Ｄnase)激活 3、凋亡蛋白酶（Caspases）激活
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26
谢谢！
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27
A
B
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（二）Annexinⅴ/PI双染色
• 原理：磷脂酰丝氨酸（PS）主要存在于细胞膜内侧，细胞凋 亡时，它移向细胞外侧。可能是PS膜内外转位酶的早期激活 有关。Annexinⅴ是一种Ca2＋依赖磷脂结合蛋白，对PS有高度 亲和性。
• PS外翻不是凋亡细胞所特有，坏死细胞也可发生。 • 两种细胞的区别在于早期凋亡细胞细胞膜是完整的，而坏死
• Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用，其 中caspase-3为关键的执行分子，它在凋亡信号传导的许多途径 中发挥功能。Caspase-3正常以酶原(32KD)的形式存在于胞浆中， 在凋亡的早期阶段，它被激活，活化的Caspase-3由两个大亚基 (17KD)和两个小亚基(12KD)组成，裂解相应的胞浆胞核底物，最 终导致细胞凋亡。但在细胞凋亡的晚期和死亡细胞，caspase-3 的活性明显下降。
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20
• 亲脂性阳离子荧光探针JC-1以单体形式存在，可发出绿色荧光 （527 nm），若以多聚体形式存在，可发出红色荧光（590 nm）.
细胞凋亡及检测技术ppt课件
凋 亡 诱 因
受体
凋 亡 信 号 转 导
cAMP Ca2+ 神经酰胺
死 亡 信 号
凋 亡 基 因 激 活
DNase活化 ↓ DNA片断
细 胞 凋 亡
凋 亡 细 胞 清 除
Caspases活化 ∶ 巨噬细胞 ↓ 吞噬、分解 凋亡小体形成
• 细胞凋亡的调控
㈠ 细胞凋亡相关因素
激素和生长 因子失衡 理化因素 免疫性因素 微生物学因素
细胞凋亡及检测技术
概述 细胞凋亡过程 细胞凋亡的调控 细胞凋亡与疾病 细胞凋亡的检测
• 概述
悉尼· 布雷诺尔
罗伯特· 霍维茨
约翰· 苏尔斯顿
2002年诺贝尔生理与医学奖获得者
一、细胞死亡的模式
■ ■
Necrosis = 细胞病理性死亡 Apoptosis = 细胞自发性死亡
Caspase家族的分类
凋亡启动亚类Caspase蛋白酶： Caspase8， Caspase 9，Caspase10
凋亡效应亚类Caspase蛋白酶： Caspase3， Caspase6， Caspase7 ICE(interlukin-1βconverting enzyme)亚类 Caspase蛋白酶：参与炎症反应 Caspase1，Caspase4， Caspase5， Caspase11, Caspase12， Caspase13， Caspase14
大量糖皮质激素 ↓ 淋巴细胞凋亡
诱导性因素
射线/高温/强酸/强碱 /乙醇/抗癌药物 CTL分泌粒酶
HIV→CD4+细胞凋亡
细胞因子 (IL-2/NGF)
激素 (ACTH/睾丸酮/雌激素)
抑制性因素
金属阳离子 (Zn2+ ) 药物 (苯巴比妥/ 半胱氨酸酶抑制剂) 病毒 EB病毒/牛痘病毒
受体
凋 亡 信 号 转 导
cAMP Ca2+ 神经酰胺
死 亡 信 号
凋 亡 基 因 激 活
DNase活化 ↓ DNA片断
细 胞 凋 亡
凋 亡 细 胞 清 除
Caspases活化 ∶ 巨噬细胞 ↓ 吞噬、分解 凋亡小体形成
• 细胞凋亡的调控
㈠ 细胞凋亡相关因素
激素和生长 因子失衡 理化因素 免疫性因素 微生物学因素
细胞凋亡及检测技术
概述 细胞凋亡过程 细胞凋亡的调控 细胞凋亡与疾病 细胞凋亡的检测
• 概述
悉尼· 布雷诺尔
罗伯特· 霍维茨
约翰· 苏尔斯顿
2002年诺贝尔生理与医学奖获得者
一、细胞死亡的模式
■ ■
Necrosis = 细胞病理性死亡 Apoptosis = 细胞自发性死亡
Caspase家族的分类
凋亡启动亚类Caspase蛋白酶： Caspase8， Caspase 9，Caspase10
凋亡效应亚类Caspase蛋白酶： Caspase3， Caspase6， Caspase7 ICE(interlukin-1βconverting enzyme)亚类 Caspase蛋白酶：参与炎症反应 Caspase1，Caspase4， Caspase5， Caspase11, Caspase12， Caspase13， Caspase14
大量糖皮质激素 ↓ 淋巴细胞凋亡
诱导性因素
射线/高温/强酸/强碱 /乙醇/抗癌药物 CTL分泌粒酶
HIV→CD4+细胞凋亡
细胞因子 (IL-2/NGF)
激素 (ACTH/睾丸酮/雌激素)
抑制性因素
金属阳离子 (Zn2+ ) 药物 (苯巴比妥/ 半胱氨酸酶抑制剂) 病毒 EB病毒/牛痘病毒
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荧光显微镜
Ⅰ•期的细胞核 呈波纹状 (rippled)或呈折 缝样(creased)， 部分染色质出 现浓缩状态; Ⅱa期细胞核的 染色质高度凝 聚、边缘化; Ⅱb期的细胞核 裂解为碎块， 产生凋亡小体 (图1）
2、DNA片断化检测
• 细胞凋亡时主要的生化特征是其染色质发生浓缩, 染色质DNA在核 小体单位之间的连接处断裂, 形成50~300 kbp长的DNA大片段, 或 180~200 bp整数倍的寡核苷酸片段, 在凝胶电泳上表现为梯形电泳图 谱(DNA ladder)。细胞经处理后，采用常规方法分离提纯DNA，进行 琼脂糖凝胶和溴化乙啶染色，在凋亡细胞群中可观察到典型的DNA ladder。如果细胞量很少，还可在分离提纯DNA后，用32P-ATP和脱氧 核糖核苷酸末端转移酶(TdT)使DNA标记，然后进行电泳和放射自显影， 观察凋亡细胞中DNA ladder的形成
炎症反应 溶酶体破裂，局部炎症反应 凋亡小体 无 基因调控 无
溶酶体相对完整，局部无炎症反 应 有
有
三、细胞凋亡的生理意义
1. 确保正常发育、生长 如：指（趾）间隙的形成
2. 维持内环境稳定 如：清除受损、突变或衰老的细胞
3. 发挥防御功能 如：使受到病毒感染的细胞凋亡
四、凋亡时细胞的主要变化
（一）形态学改变
• 正常细胞：Annexin ⅴ-FITC (-)；PI (-)；
凋亡结果
坏死结果
C-myc ASO 200 nmol/L
4、线粒体膜势能的检测
线粒体在细胞凋亡的过程中起着枢纽作用，多种细胞凋亡刺激因 子均可诱导不同的细胞发生凋亡，而线粒体跨膜电位DYmt的下降， 被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件，它发生在细 胞核凋亡特征(染色质浓缩、DNA断裂)出现之前，一旦线粒体 DYmt崩溃，则细胞凋亡不可逆转。 线粒体跨膜电位的存在，使一些亲脂性阳离子荧光染料如可结合 到线粒体基质，其荧光的增强或减弱说明线粒体内膜电负性的增 高或降低。
内源性核酸内切酶的作用
180-200 bp
Hale Waihona Puke 内源性核酸内切酶H1 核心颗粒 连接区
Zn2+ Ca2+ Mg2+
五、细胞凋亡的检测方法
1、形态学检测 • （一） HE染色（凋亡细胞呈圆形，胞浆红染，细胞
核染色质聚集成团块状）
• （二）透射电镜观察
• （三）荧光显微镜观察
透射电镜观察
凋亡细胞体积变小，细胞 质浓缩。凋亡Ⅰ期 （pro-apoptosis nuclei） 的细胞核内染色质高度 盘绕，出现许多称为气 穴现象（cavitations） 的空泡结构(图2)；Ⅱa 期细胞核的染色质高度 凝聚、边缘化；细胞凋 亡的晚期，细胞核裂解 为碎块，产生凋亡小体。
细胞凋亡与检测方法
汇报人：
一、细胞的死亡方式
凋亡(apoptosis)：机体在正常生理或 病理状态下发生的一种自发的、程序化 的死亡过程。
坏死（Necrosis）：各种致病因子，干 扰和中和了细胞的正常代谢活动，造成 细胞的意外死亡。
二、细胞坏死与凋亡的比较
坏死
凋亡
性质
病理性、非特异性
生理性或病理性，特异性
• 细胞凋亡之初，由于核酸内切酶的激活，将DNA从核小体 间切断，产生游离寡核苷酸片段。这些片段弥散到胞浆中， 但是细胞膜完整，不能离开细胞。
• 乙醇固定，PBS洗涤，使细胞膜通透性增加，并从细胞浆 弥散出胞外。但是大分子DNA在胞内，不能被抽提。
• 判断：在直方图上，Go/G1期前有一个亚二倍体峰。 （检测晚期凋亡，但不能判断是晚期凋亡还是坏死）
初期：
中期：
细胞变圆 微绒毛消失 胞质浓缩 空泡化
胞膜内陷 出芽
后期：
核染色质高度浓缩 凝集在核周边,边集 细胞体积缩小
浓缩核裂解 膜自行分割
凋亡小体
邻近的上皮细胞、MΦ、 瘤细胞等吞噬凋亡小体
Normal Cell
Apoptotic cell
（二）、生化改变
１、DNA片段化－主要特征 2、内源性核酸内切酶（Ｄnase)激活 3、凋亡蛋白酶（Caspases）激活
• 亲脂性阳离子荧光探针JC-1以单体形式存在，可发出绿色荧光 （527 nm），若以多聚体形式存在，可发出红色荧光（590 nm）.
• JC-1可透过正常细胞膜以单体状态进入胞内，正常健康线粒体 的膜电位（△ψ）具有极性，JC-1依赖于△ψ的极性被迅速摄 入线粒体内，并形成多聚体，发出红色荧光（590 nm，线粒体） 和绿色荧光（527 nm，胞液）.
• 而细胞发生凋亡时，线粒体跨膜电位被去极化，JC-1从线粒体 内释放，线粒体内红光强度减弱（590 nm），以单体的形式存 在于胞液内而发绿色荧光（527 nm）.
3、流式细胞仪检测 flow cytometer
• （一）PI 单染 • （二）Annexinⅴ/ PI双染色
（一） PI 单染
• 荧光染料PI（碘化丙啶）是一种可对DNA染色的细胞核染 色试剂，常用于细胞凋亡检测，英文全称是Propidium Iodide。它是一种溴化乙啶的类似物，在嵌入双链DNA后 释放红色荧光。
诱导因素 强烈刺激，随机发生
较弱刺激，非随机发生
生化特点 DNA电泳 形态变化
被动过程，无新蛋白质合成，不 主动过程，有新蛋白质合成，耗
耗能
能
弥散性降解，电泳呈均一DNA片 状
细胞结构全面溶解、破坏、细胞 肿胀
DNA片段化（180—200 bp），电 泳呈“梯”状条带
胞膜及细胞器相对完整细胞皱缩， 核固缩
A
B
（二）Annexinⅴ/PI双染色
• 原理：磷脂酰丝氨酸（PS）主要存在于细胞膜内侧，细胞凋 亡时，它移向细胞外侧。可能是PS膜内外转位酶的早期激活 有关。Annexinⅴ是一种Ca2＋依赖磷脂结合蛋白，对PS有高度 亲和性。
• PS外翻不是凋亡细胞所特有，坏死细胞也可发生。 • 两种细胞的区别在于早期凋亡细胞细胞膜是完整的，而坏死
细胞膜完整性受到破坏, • 可用PI区分。
• 检测标准： • 早期凋亡细胞：Annexin ⅴ-FITC (+)；PI (-)；
• 坏死细胞和晚期凋亡继发性坏死细胞：
•
Annexin ⅴ-FITC (+)；PI (+)；
• 机械性坏死及非特异性染色：
•
Annexin ⅴ-FITC (-)；PI (+)；