琼扩实验诊断鸡病毒性关节炎
实验二马立克氏病琼脂扩散实验
阴性、不出现或不清楚。
3. 加样时，注意 不要产生气泡， 以加满为度。
4. 每加完不同的 样后要更换枪 头，以免造成 污染。
注意事项
实验步骤
抗原检测
Ag+
2
6
Ab+
3
5
Ag+
检测羽髓抗原
2，3，5，6孔分别 加入倍比稀释的待体分子量相同时，以下六种情况中抗原和抗 体的浓度差异以及在凝胶中的扩散率大小（用＞、＜、≈表示）
A BCDEF
Ag Ab
1
2
6
Ag+
3
5
4
检测待检血清
1~5孔分别加入倍比稀释的待 测效价的血清，6孔加PBS
结果判定
当被检样品孔与中心孔之间形成清晰的沉淀线，并 与周边已知抗原孔的沉淀线互相融合时判为阳性； 不出现沉淀线者判为阴性
结果判定
Ag+
Ab+
待检血清 已知抗原与阳性血清之间所产生的沉淀线末端弯向 被检样品孔内侧时，则该被检样品判为弱阳性。
实验步骤
检测抗原时，中央孔加马立克氏病标准阳性 血清，周边1、4孔加马立克氏病标准琼扩抗 原，周边2、3、5、6孔加待检羽髓浸液，即 在试管内加入1～2滴PBS然后将羽髓在其中 挤压而成。加样后将琼脂平皿置湿盒内，于 37℃温箱孵育，8～24h内观察结果。
切勿剧烈振荡融化 后的琼脂糖，防止 气泡的出现。
仪器与材料
○ 器材：琼脂打孔器、微量移液器或带胶乳头滴管、平皿等。 ○ 试剂：马立克氏病标准抗原、标准阳性血清和标准阴性血清。
实验类型 单向单扩散、单向双扩散、双向单扩散、双向双扩散
一例鸡病毒性关节炎病的诊断与体会
7.4 该养殖户虽然从事养殖多年，有一定的养殖经验，能够按照免疫程序对鸡群进行鸡新城疫、传染性支气管炎、法氏囊、禽流感等疫苗的免疫接种，并实行全进全出、定期消毒的养殖模式，但对外来的突发性传染病没有足够的应对能力，预防意识的薄弱，导致遭受较大的经济损失。
7.5 在目前开放的市场流通和频繁的畜禽调运环境下，加强畜禽的调运管理，购入前、后的疫病检疫等环节，将规避一些外来性传染病的发生和流行，为养殖户减少不必要的经济损失。
7.2 本次在我县发生的鸡病毒性关节炎，属外来性传染病，给我县养禽业造成了极大地影响，经与养殖户沟通后采取了严格的控制措施，消除了在我县扩散流行的隐患，是非常必要的和可行的。
7.3 3―4月份正值季节交替，气候多变时节，容易引发各种动物疫病的发生和流行，同时由于养殖户鸡舍内采用火墙取暖，温度较难控制，加之北方气候较晾，通风换气不良，也是本病发国家参考实验室进行了确诊。
6.控制措施
6.1接到疫情报告后，为防止疫情进一步扩散蔓延，我们立即采取了隔离、监控措施，限制家禽移动及产品的流动。
6.2 因本县以前未发生过该病，为尽快确诊，以便采取有效防控措施，我们及时采集病料委托上级业务部门进行送检。
6.3确诊后，我们立即启动突发重大动物疫病应急预案，对感染发病的6219只鸡全部采取焚烧、深埋等处理；粪便、排泄物或可能被污染的垫料、经严格消毒后进行无害化处理；对禽舍、用具、院落、运载车辆进行严格消毒。
7.体会
7.1 提高疾病防控意识，杜绝外来疫病的传入。建议养殖户严把购雏关，严禁从有发病史鸡场购进种蛋和雏鸡，购入时严格检查，购入后采用全进全出的饲养模式。
2.流行特点
病毒性关节炎又称为病毒性腱鞘炎，是一种由禽呼肠孤病毒引起鸡和火鸡的病毒性传染病。本次发生的病毒性关节炎主要以发生关节肿胀、腱鞘炎、跛行及生长停滞为主要特征。病毒在鸡群中通过呼吸道和消化道水平传播，感染发病率、死亡率均较高。多见于30日龄以后出现症状。
鸡病毒性关节炎防治措施
鸡病毒性关节炎防治措施家禽病毒性关节炎主要发生于鸡，是由呼肠孤病毒引起关节滑膜炎、腱鞘炎的传染病。
一、病原呼肠孤病毒可经卵黄囊或绒毛尿囊膜接种在鸡胚内生长。
卵黄囊接种鸡胚，3-5天鸡胚死亡，鸡胚皮下广泛出血。
绒毛尿囊膜接种，在7-8天后鸡胚死亡，鸡胚肝脾肿大、坏死，绒毛尿囊膜出现分散的白色病灶。
病毒还可在原代鸡胚、肝、肺、肾、巨噬细胞和睾丸培养细胞内生长。
呼肠孤病毒对热有抵抗力，能耐受60℃8-12小时、56℃22小时，4℃下能存活3年以上。
对乙醚不敏感，对pH3、0.2%来苏儿、3%甲醛溶液均有抵抗力；70%酒精和0.5%有机碘可将其灭活。
二、流行特点本病只感染鸡，2周龄雏鸡较易感，自然发病多见于4-7周龄。
病鸡和易感鸡的直接或间接接触可引起传播。
病鸡可通过消化道和呼吸道排出病毒。
粪便是主要接触性传染源。
本病可以垂直方式传递。
病鸡产的蛋有的带毒，孵出的雏鸡发病。
潜伏期的长短因病毒的致病型、鸡的日龄和感染途径而不同。
气管内接种或直接接触病毒，其发病潜伏期分别为9天和13天。
三、临床症状肉用鸡和产蛋鸡都感染本病，以肉用鸡发病较多。
鸡群发病率5%-10%，死亡率约1%。
此外，慢性病鸡由于发育停滞，无商品价值而淘汰的可达20%-30%，对肉用鸡危害很大。
病鸡表现消瘦、贫血、排出水样稀粪及较多的白色尿酸盐，精神沉郁，食欲减退，步行困难，常伏在鸡舍一角，逐渐衰竭而死。
关节炎多发生在跗关节和趾关节，多数是两侧关节受侵害。
发病鸡群发育不整齐，出现多量跛行鸡。
四、病理变化多数病鸡的跗关节囊、趾关节囊、趾屈肌腱及伸肌腱出现潮红、肿胀病变，有的有波动感。
急性期的关节囊及腱鞘充血，有时伴有点状出血的水肿性肥厚，关节腔有草黄色或带血色的滑液增多，并混有纤维素性絮片。
大雏或成鸡易发生腓肠肌腱断裂。
转成慢性后，关节硬固变形，跗关节皮肤茶褐色，有的形成溃疡。
关节囊和腱鞘有纤维素性肥厚，关节两骨端形成溃疡。
病变部皮下水肿和出血。
肉鸡大肠杆菌性关节炎的临床症状、诊断和防控措施
肉鸡大肠杆菌性关节炎的临床症状、诊断和防控措施作者：崔丽来源：《现代畜牧科技》 2016年第9期崔丽（黑龙江省富锦市畜牧兽医局，黑龙江富锦156100）摘要：肉鸡大肠杆菌性关节炎在临床比较常见，主要是由于感染大肠杆菌而引起，主要特征是腿软，很难站立。
走动时，往往将跗关节着地，也就是所谓的用膝走路。
少数病鸡的关节处发生红肿，通常是跖关节和跗关节容易发生，且往往是单侧性的发生病变。
关键词：肉鸡；大肠杆菌性关节炎；临床症状；诊断；药物治疗；饲养管理；免疫预防中图分类号：S858. 31文献标识码：B文章编号：2095-9737(2016)09-0088-011 病原学大肠杆菌属于革兰氏阴性菌，无法形成芽孢，呈直杆状，两端钝圆，往往单个散在或者成对排列，大部分菌株周边生有鞭毛，能够自行运动，但也有部分变异菌株没有生长鞭毛或者丢失鞭毛而不能够运动。
除个别菌株外，一般都能够看到荚膜，但往往生有微荚膜，使用碱性染料能够让病菌着色良好，且菌体两端有时会略微深染。
2 临床症状病鸡表现出精神沉郁，羽毛蓬松、杂乱，双翅下垂，走动困难，往往呈俯卧状，症状严重时会发生瘫痪，只能够卧底不起；同时伴有腹泻，排出血样便，并散发恶臭味；往往有一侧或者两侧跗关节发生肿大，有些跗关节局部存在热感，经过触诊有波动感。
3 实验室诊断细菌学诊断。
在表现出明显症状的病鸡，取心脏、脾脏、肝脏、关节液分别在普通琼脂平板和兔鲜血平板上接种，置于37℃恒温下培养一段时间进行观察。
结果发现心脏、脾脏和肝脏接种的平板上都没有生长细菌；接种关节液的平板上在24h后都生长有菌落。
挑取单个菌落经过染色后进行观察，发现革兰氏阴性杆菌，将其接种在麦康凯培养基上能够长出粉红色菌落，判断是大肠杆菌。
病毒分离。
取肝脏、脾脏、肺脏等内脏组织和关节液分别进行研磨，以每分钟5000转的转速进行lOmin离心，取上清液添加在每毫升含有20001U的双抗中进行过夜处理，通过卵黄囊接种到5～7日龄鸡胚，置于37℃温度下进行5天的培养观察，并连续进行3代盲传，结果发现接种鸡胚没有出现死亡，也没有其他任何病变。
蛋鸡感染滑液囊支原体治疗案例分享
蛋鸡感染滑液囊支原体治疗案例分享
作者：陈巨清
来源：《兽医导刊》 2018年第5期
（一）背景描述
1. 饲养品种：海兰。
2. 饲养规模：50 000 羽。
3. 饲养日龄：55 d。
（二）临床症状
该公司为自养青年鸡场，该批次鸡养至55 日龄时大群中出现部分鸡消瘦、腿瘸站不起来等症状。
（三）病理特征
脚垫肿大
关节滑液囊分泌物增多
胸骨囊肿
（四）临床诊断
根据临床症状与剖解变化特点，初步诊断为滑液囊支原体。
（五）实验室诊断
1. ELISA 检测。
ELISA 结果统计
2. RT-PCR 检测。
通过RT-PCR 监测，结果为病毒性关节炎病毒阴性；而滑液囊支原体（MS）结果为阳性。
（六）病因分析
1. 该场蛋鸡不注射滑液囊支原体（MS）疫苗，而MS 的母源抗体在4 周龄时几乎已经消耗殆尽，导致机体本身MS 的抗体非常低。
2. 由于管理上存在的某些漏洞，对鸡群预防保健的重视程度不够，导致机体自身的抵抗力比较弱。
（七）治疗方案
1. 加强饲养管理，加强消毒、通风换气，降低水平传染的风险。
2. 盐酸沃尼妙林400 kg 水/ 袋，福欣50 兑水1 000 kg 水/ 袋，饮水，连用5 d。
3. 支原体疫苗0.5 ml/ 只，加免一次。
（八）治疗结果
经过两个疗程的治疗，鸡群中处一部分弱鸡淘汰处理以后，大群恢复正常，没有腿瘸的鸡出现，采食量恢复正常。
7、鸡马立克的琼脂扩散实验
马立克氏病抗体检测
• 操作方法同上，加样如下：用微量移液器 吸取标准抗原液(按产品使用说明书的要求 稀释)滴入中央孔，标准阳性血清分别加入 外周的第1孔中，待检血清按顺序分别加入 外周的第2、3、4、5、6孔中。加样时不要 产生气泡，每孔均以加满不溢出为度，每 加一个样品应换一个吸头。
1.双扩散用于疾病诊断： 以MD诊断为例，中心 孔加MD标准阳性血 清，周围孔分别加MD 标准抗原、生理盐水、 待检抗原。 2.双扩散用于抗体检测： 以免疫鸡MD抗体检测 为例，中心孔加MD标 准抗原，周围孔分别加 MD标准阳性血清.、 MD阴性血清、待检血 清 M。
实验七、 鸡马立克氏病的琼脂扩散试验
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ王晓泉 刘慧谋
一． MD诊断依据 二． MD琼脂扩散试验检测
技术
三． 目的和原理
四、材料 五、 方法与步骤
一、MD诊断依据
• MD是高度接触传染性的，在商业鸡群中几 乎是无所不在，但在感染鸡中仅有一小部 分发生MD，此外，接种疫苗的鸡虽然能得 到保护不发生MD，但仍能感染MD强毒， 因此是否感染MDV不能作为诊断MD的标准。 主要依据临诊症状和病理变化。血清学和 病毒学方法可用于鸡群感染情况的监测， 可以作为MD的诊断参考依据。
四、材料
琼脂平板、打孔器、针头、移液器、枪头、 MD标准阳性血清、MD标准琼扩抗原、待 检羽髓 • 家禽免疫球蛋白在8%NaCl凝胶中试验效果 好
五、 方法与步骤
血清学试验 琼脂扩散试验
马立克氏病病毒抗原检测 马立克氏病抗体检测
马立克氏病病毒抗原检测
(1)浇1%琼脂板：称1g琼脂粉、8 gNaCl，加适量蒸馏水融 化后定容至100ml蒸馏水，加热煮沸维持3min ，每直径 90mm培养皿注入20ml，平放凝固即可。 (2)打孔：用打孔器在琼脂平板上对照标准打孔图纸打孔，中 央打1个孔,周围再打6个孔（孔径4mm，孔距3mm），形 成梅花形图案。用针头挑出孔内琼脂,注意不要挑破孔缘。 (3)封底：用平底针头在火焰上烧烫使孔周围的琼脂少许熔化 以封底，以免加样后液体从孔底渗漏 (4)加样：在中央孔加MD阳性血清，向周边1孔加标准MD琼 扩抗原，2、3、4 、5、6孔加待检羽髓浸液（待检羽髓10 余根加数滴生理盐水在EP管内挤压，浸泡），每孔约加 20μl，以加满为度。 2、3、4 、5、6孔也可不打孔直接 插待检羽髓 (5)加完后，盖上平皿盖，置湿盘中，在37℃下自由扩散24 小时。。
鸡瘫痪，站不起来，鸡关节炎症的诊断与防治
鸡瘫痪，站不起来，鸡关节炎症的诊断与防治在家禽养殖过程中或在家禽屠宰过程中，常发现一些鸡只趾、跗关节存在肿胀现象，这些鸡只虽然死亡率不高，但存在的关节炎症往往会使其生产性能下降，淘汰率增高，严重时也会造成一定死亡，给养鸡生产造成损失。
在家禽养殖过程中能够引起鸡只关节发生炎症问题的因素有多种，因此需要及时做好鉴别诊断和防治。
一、疾病诊断特点1.病毒性关节炎鸡病毒性关节炎是由禽呼肠孤病毒引起的以跗、趾关节肿大、腱鞘发炎、腓肠肌断裂为特征的一种病毒性传染病。
主要发生于4-7周龄的鸡只。
剖检可看到跗关节肿胀、充血或有点状出血，关节腔内有淡黄色或血样渗出物，如存在继发感染可见大量脓性分泌物或干酪物。
感染早期可见附关节附近的腓肠肌肌腱明显水肿，后期可见其断裂和出血。
鸡瘫痪，站不起来，鸡关节炎症的诊断与防治鸡瘫痪，站不起来，鸡关节炎症的诊断与防治2.滑液囊支原体型关节炎滑液囊支原体性关节炎是由滑液囊支原体感染引起的一种以关节发炎为主要症状的慢性传染性疾病，该种疾病主要多发于4～16周龄的雏鸡和青年鸡。
病鸡冠苍白，生长迟缓，羽毛松乱，继而跛行，跗关节及趾关节部肿胀，且有热感和波动感，且常伴有胸部囊肿。
剖检可见跗关节腔中有黏性或干酪样渗出物，龙骨下有化脓性积液，爪垫内有粘液性物质，气囊上有气泡样存在，常伴有脾、肝、肾的肿大。
鸡瘫痪，站不起来，鸡关节炎症的诊断与防治鸡瘫痪，站不起来，鸡关节炎症的诊断与防治3.鸡白痢型关节炎鸡白痢性关节炎是由鸡白痢沙门氏菌引起各种年龄鸡常发的一种关节型传染病。
该疾病主要多发于小日龄阶段的鸡只，发病鸡沉郁、缩头、翼下垂、消瘦、喜卧地，跗关节肿大，部分鸡只排黄绿色稀粪。
剖检可见跗关节充血、滑液囊高度扩张, 囊腔充满黄色粘稠液体。
另外还可见到心脏有白色结节，肝脏肿大、有黄白色坏死灶等症状。
4.鸡葡萄球菌型关节炎鸡葡萄球菌性关节炎多是由金黄色葡萄球菌引起的一种关节出现炎症的传染病,病鸡呈一侧性或两侧性跛行，趾、跗关节肿胀、局部发热，按压肿胀部有积液、波动感，病鸡喜卧、饮食困难，拉黄白稀粪。
第四篇 动物病毒学第五版
四、病毒鉴定
（一）病毒提纯
病毒提纯
化学法
离心法
层析法
硫酸铵沉淀法
超速离心法
离子交换层析法
聚乙二醇沉淀法
密度梯度离心法
亲和层析法
氯仿去脂法
（二）形态特征观察：电镜
1、透射电镜观察：提纯浓缩
2、扫描电镜观察
（三）病毒理化特性鉴定
理化特性 鉴定
核酸类型
有无囊膜
抗酸性
浮密度
G+C克分 子%
DNA或 RNA
第二章 病毒分离鉴定技术
一、取材
取病毒存在较多的部位，如：粪、血、肝、脾
等。
无菌污染的直接检测，有菌污染的加双抗
1000~2000单位/ml处理或过滤除菌。
二、检查包涵体
存在的细胞种类
存在位置：胞浆或胞核。
染色性：
三、病毒分离
1、接种实验动物或本动物 2、禽胚接种 3、单层细胞接种:原代细胞、传代细胞
（五）血清学鉴定
1、已知抗体鉴定病毒抗原 补体结合反应 中和实验 对流电泳 琼脂扩散 ELISA 荧光抗体技术 血凝和血凝抑制 2、已知病毒抗原测定血清抗体及效价
（六）病毒分子生物学鉴定
分子生物学鉴定
聚合酶链反应
核酸杂交
DNA芯片
DNA病毒
RNA病毒
DNA杂交
PCR
RT-PCR
RNA杂交
套式PCR
（五）番鸭细小病毒
危害1－3周龄番鸭，又名“三周病”。 症状和病变与小鹅瘟相似。
（六）牛细小病毒
引起犊牛腹泻。
该病毒具有细小病毒属的特性，但血凝特性较
强，可凝集多种动物的红细胞。该病毒不与本属
的其他病毒发生交叉血清学反应。
鸡病的基本诊断技术
１流 行 病 学 调 查
眼睛 、 鼻腔 有 分 泌物 、 肿胀 ， 口腔 有 过 多 的黏 液 ， 能 听到 咳嗽 、 喷嚏 、 呼噜 、 叫等呼 吸异 常音 。 怪
群 体 检查 分静 态 观察 和动 态观察 ， 先后 分 别 要
观察 。
２２个 体 检 查 ．
表 面有 白色 的尿酸 盐
同病变 ， 出共 同的 主要 的示病性 的病 理变 化 。 找
３ １病 鸡 的 处 死 ．
体表 、 外部 检查 后 ， 将病 鸡杀 死 ， 进行 剖检 。主
要 采用 颈静 脉放 血 法 。 一只 手将 鸡 的双翅 和 头部 固 定好 ， 另一 只 手用剪 刀 在颈部 左 下侧 或 右下侧 剪 断
化 道 黏 膜 的 出血 、 肿胀 、 疡 、 维 素 渗 出 ， 道 溃 纤 肠
内容 物及 寄生 虫等 状况 。
查 看 口腔 有 无 黏 液 、 沫 、 膜 颜 色 是 否 正 泡 黏
有 无 黏液 或干 酪样 物 。注 意 育肠 扁桃 体是 否 出血 、 肿
胀 、 死 。注 意胸 腺 是 否肿 胀 或 萎缩 ， 面有无 出 ¨ 坏 表 １ Ｌ
鸡 的 品种 、 日龄 ， 病 时 问 ， 情缓 急 ， 发 还 发 病 群
是散 发 ， 发病 率 和死亡 率 的高 低 ， 免疫程 序 ， 药 情 施 况 ， 疗效 果等 治
了解 养鸡 场 的疫情 史 、 场 的地 理位 置 和周 围 鸡
胸 、 肌 肉 是否 丰满 ， 察关 节 、 骼 有 无 肿胀 ， 腿 观 骨 同
可露 。 时 应先 看气 囊 ， 此 注意 有无 浑浊 、 厚或 增
渗 物 覆 盖 ， 次 注 意 胸 腹 腔 内有 无 积 水 、 出 其 渗 物 或 血液 ， 时观 察 各 器 官 位 置 有 无 异 常 ， 官 同 器 表 面是 否 有冻 胶样 或 十酪样 渗ｍ物 等 。 ３３各 系统 器官的检 查 ．
商品肉鸡葡萄球菌性关节炎的诊断与防治
２ 剖检 病 变
病 鸡胸 下龙 骨 处皮肤 增厚 ， 积 有 多 量 淡 红 色 孔 均 未 出 现 沉 淀 线 ， 表 明待检 样 品为 阴性 。 胶 胨样 水 肿液 ， 两侧 胸肌 、 股 肌 的 肌 膜 可 见 片 状 ４ 防治措 施 出 血 。 肝 脾 轻 度 肿 大 ，呈 淡 紫 红 色 。 病 程 长 者 ， ． １ 保持 良好 的 饲养环 境 肝、 脾 脏 表 面 可 见 有 白色 坏 死 灶 ， 心 包积 液增 多 ， ４
少 不 必 要 的 经 济 损 失 。现 将 笔 者 诊 断 和 防 治 肉 围有 溶 血 圈 ， 直径 为 １ ～２ ｍｍ 的菌 落 。 勾 取 两 平
鸡葡 萄球 菌 性关 节 炎 的成功 经验 报 告如 下 。 ｌ 临 床 症 状 病初， 患病鸡 只 不愿走 动 ， 伏 卧姿 势 ， 饮 食 欲 正常 ， 填 料 时 和 健 康 鸡 一 样 奔 向料 槽 采 食 ， 此 时 易被 忽视 。随病 程 发展 ， 病 鸡 运动 障碍 ， 强 行 驱 赶或 奔 向料槽 时 ， 不 能站立 行 走 ， 两 翅 张 开 支 撑
的经 济 损 失 。但 此 病 如 果 能 及 时 发 现 ， 准 确 与 鸡 表 面 光 滑 、 直径 为 ０ ． ５～ １ ｍｍ 的 菌 落 ， 在 血 琼 脂 病 毒性 关节 炎相 鉴 别 ， 及 时采 取 措施 防 治 ， 可 减 平 板 上 生 长 出金 黄 色 、 圆形 、 隆起 、 表 面光 滑 、 周
绒 毛 的 发 育 ，饮 水 的 温 度 和 雏 鸡 成 活 率 有 一 定 药 ， 而维 生素 、 黄 芪多糖 和益 生素要 继续使 用 ， 注 的关 系 。
表 １ 饮 水 温度 和雏 鸡 成 活 率 的 关 系
实验七鸡马立克氏病的琼扩试验
实验七鸡马立克氏病的琼扩试验（一）实验目的熟悉鸡马立克氏病的诊断方法和免疫接种要点。
掌握利用琼脂扩散试验诊断鸡马立克氏病（二）实验原理主要采用双向双扩散试验，即用已知抗原、阳性血清和待检血清在琼脂凝胶中进行免疫双扩散，室温下作用24小时，当已知扩原和阳性血清间出现明显沉淀线，扩原和待检血清间也出现沉淀线且与阳性血清沉淀线相连，表明待检血清中有相应抗体。
此方法也常用于法氏囊血清和小鹅瘟血清抗体的检测。
（三）实验准备用具：打孔器、16#针头、剪刀、镊子、酒精灯、打孔纸样、记号笔、洁净平皿。
（四）实验步骤(1) 1%琼脂糖平板制备1%琼脂粉+8%Nacl加蒸溜水，水浴加温使充分溶化后，加入培养皿，每皿约20ml；平置，在室温下凝固冷却后，将琼脂板放在预先印好的7孔形图案上，用打孔器按图形准确位置打孔，中央孔孔径为4mm，周边孔孔径为3mm，孔距均为3mm。
(2) 检测血清抗体(被检鸡血清) 向中央孔滴加标准琼扩抗原，向周边孔滴加待检血清和至少有一孔加阳性血清，均以加满而不溢出为度；将加样后的琼脂平皿加盖后平放于加盖的湿盒内，置37℃温箱中孵育，8～24h内观察并记录结果。
(3) 检测羽髓中MD V抗原向中央孔加MD阻性血清，向周边1、4孔加标准：MD琼扩抗原，向周边2、、5、6孔加待检羽髓浸液(加1～2滴蒸馏水在试管内挤压)，或直接插羽髓。
加样后将琼脂平皿置湿盒内，于37℃温箱孵育，8～24h内观察结果（五）结果分析1、被检样品孔与中心孔之间形成清晰的沉淀线，并与周边已知抗原或阳性血清孔的沉淀线互相融合者，判为阳性，不出现沉淀性的判为阴性；2、已知抗原与阳性血清之间所产生的沉淀线末端弯向被检样品孔内侧时，则该被检样品判为弱阳性。
3、有的被检材料可能会出现两条以上沉淀线，其中一条与已知抗原——阳性血清的沉淀线融合者，仍判为阳性。
动物传染病 第六章禽传染病
第六章、禽传染病家禽细菌性传染病一、鸡败血支原体病(Mycoplasma Gallisepticum)（MG）本节三个呼吸道病，特点：主要原因：彩图：范国雄、鸡的疾病概念本病英文简称MG，又叫慢性呼吸道病（CRD），简称慢呼（见教材P242），是由败血支原体引起的鸡和火鸡的一种慢性接触性呼吸道传染病，其临床特征为咳嗽、流鼻涕、呼吸困难、有罗音及面部肿胀。
剖检变化主要是气囊炎和感染组织器官的干酪样渗出。
本病广泛存在于世界各地。
我国于1943年从江苏首次分离到该病病原，1960年代本病在我国有所发展，目前已遍及全国各地各种鸡群。
本病引起的直接死亡较少见，其主要危害在于：1．感染率高，影响生产性能：椐全国20个省市区抽样调查，阳性率为80%左右，造成死亡约25%，产蛋减少约40%，孵化率降低约20%，弱雏率10%。
2．垂直传播，终生带菌，很难清除。
3．严重污染胚源疫苗，造成疫苗传播疾病。
4．细胞内寄生，很难根治。
并易诱发多种疾病。
病原1898年Nocard首次从牛体分离到，1967年正式命名。
支原体是介于细菌和病毒之间的一大类微生物，光镜下很难看清。
引起鸡慢性呼吸道病的主要是鸡败血支原体即鸡毒支原体，另外还有引起鸡关节炎的滑液支原体。
1．形态特征：球杆状，0.25－0.5um,多形性，无细胞壁，可通过滤器。
需电镜观察，G－。
2．培养特性：可在特殊人工培养基上生长，兼性厌氧，在牛心培养基上培养，5－6天后可形成光滑、透明、荷包蛋样圆形小菌落，需用放大镜观察。
在液体培养基中可产生轻微混浊，在马血琼脂上可引起溶血。
在7日龄鸡胚卵黄囊中生长良好，能致死鸡胚，并出现病变（5-7天死亡），经鸡胚传代后毒力增强。
也可在鸡肾细胞及气管环上生长。
实际上本菌分离很困难，一是培养条件特殊，二是常呈潜伏感染，三是病料中常混有非致病性的常在性支原体，比致病支原体生长快。
3．生物学特性：能凝集鸡、绵羊和人RBC，能诱导产生HI抗体和凝集抗体，能在细胞内也可在细胞外寄生。
禽用琼扩抗原主要检测特点及其使用注意事项
２１ 应使 用质 量优 良的琼脂糖 ．
制备琼脂平板 时要 使琼脂粉充分融化 ，不要有颗粒物 ， 琼脂板凝 固后应无色透 明。采用 高盐溶液 （ 一般为含 ８ ％的
ＮＣ 溶液或含 ８ ａ１ ％的 Ｎ Ｃ 的 Ｐ Ｓ ０ １ ａ１ Ｂ ，． Ｍ，ｐ ７２ 配 制 琼 脂 ， ０ Ｈ ．）
确诊 时 还 需 结 合 疾 病 的 流 行 病 学 知 识 与 临 床 症 状 进 行 综 合
鸡 的母源抗体水平 ， 推算 确定接种 日龄。此方法现在 已经在
现地 被推广使用 ， 按雏 鸡总数 的 ０５ ． ％比例 采血 ， 分离 血清 ， 用琼扩试验检测 １日龄雏鸡 ＩＤ母源抗体 的阳性率 ， Ｂ 当雏鸡 Ａ Ｐ阳性率为 ４ ％时 ，０日龄和 ２ Ｇ ０ １ ８日龄各免疫一 次 ；若 阳
３ 小 结
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
基本上可以确定 强毒 的感染 。 鸡在接种法氏囊病疫苗或者感染法 氏囊病毒之后 ， 血清
沉 淀 抗 体 阳性 。 氏囊 病 琼 扩 抗 原 的 还 可 用 于测 定 １日龄 雏 法
琼 扩诊断方法 作为基层 使用的方法 ， 简单方便 ， 但也存 在敏感性不足 的缺 陷 ，因此 也仅 作为现地诊断的辅 助手段。
泛 的欢迎 。 本文对一些禽用病毒性疾病琼 扩方法检测 的主要 特点及操作注意事项 进行 了总结 。 １ 不 同琼扩诊断抗原检测 的主要特点 禽腺病毒 Ｉ 型琼扩抗 原液可以检测禽腺病毒 Ｉ 中不 同 群 血清型禽腺病毒的感染 。成鸡感染后 ， 沉淀抗体可 以持续很
长 的时 间 。雏 鸡 发 病 时 血 清 不 一 定 为 阳性 ， 般 在 一 月 龄 时 一
关于雏鸡传染性脑脊髓炎鉴别诊断与治疗分析
DOI:10.3969/j.issn.1003-1650.2024.06.039传染性脑脊髓炎属于接触性的病毒传染病，会严重危害鸡群中的雏鸡，导致其出现神经症状，发病率较高。
当养殖环境不卫生、养殖密度过大、通风不良时会加快脑脊髓炎的传播速度，尤其危害大量雏鸡，带来严重的经济损失。
目前部分养殖人员并未充分认识到脑脊髓炎的危害性，没有掌握病理特征，以致出现患病鸡后，会当做其他传染病防治，错过最佳的治疗时间。
对此，养殖人员应增强防范意识，形成科学的养殖思想，并总结防治经验，一旦发现疑似病例，应及时上报病情，由专业兽医诊断防治，科学控制病情，提升鸡群的成活率。
一、病例分析某养殖场雏鸡鸡舍出现急性传染病，成年蛋鸡产蛋量也快速下降，鸡群采食与精神正常，鸡蛋颜色并无变化，但重量逐渐减轻。
雏鸡发病与传播速度较快，短时间内导致大量雏鸡死亡，发现患病鸡只出现全身性肌肉震颤。
养殖人员单独隔离患病鸡只，立刻向当地兽医站上报病情，由官方兽医人员诊断病情，观察蛋鸡产蛋率下降，随后雏鸡出现典型症状。
虽然可以分群养殖，但没有及时清理粪便，也没有定期消毒，卫生环境不良。
同时，养殖场并未及时为雏鸡接种疫苗，雏鸡抵抗力较差。
观察外在症状初步判定为脑脊髓炎，之后进行病理解剖，进行实验室诊断，判定为脑脊髓炎，并及时采取防控措施。
二、流行病学脑脊髓炎病毒处于引发传染性脑脊髓炎的病原体，属于细小的RNA病毒，表面无囊膜，呈圆形，对氯仿、乙醚、胃蛋白酶等具备一定的抵抗力，对病鸡肠道细胞具备较强的侵嗜性，会随着病鸡的粪便进入环境。
传染性脑脊髓炎属于急性高度接触性的传染性，脑脊髓炎病毒会侵害雏鸡神经，又被称为流行性震颤，会导致病鸡身体瘫痪，若翅部、颈部、头部出现症状，则为非化脓性的脑脊髓炎。
当前脑脊髓炎在家禽养殖业呈现出高发流行特点，严重危害鸡群，尤其雏鸡更易感染，发病率扩大40-50%。
当受到病毒感染后，蛋鸡产蛋率也会下降，且很难恢复。
自然条件下，传染性脑脊髓炎病毒可以感染鸡群、鹤、鹌鹑等多种禽类动物，尤其雏鸡感染后会很快出现症状。
鸡病毒性关节炎的流行病学临床症状实验室诊断和防控措施
鸡病毒性关节炎的流行病学临床症状实验室诊断和防控措施【摘要】鸡病毒性关节炎是一种重要的禽类传染病，对养殖业造成了严重影响。
本文介绍了该病的病原体特征、临床症状表现、实验室诊断方法、防控措施建议及流行病学调查结果。
研究表明，鸡病毒性关节炎主要是由一种病毒引起的，患病鸡表现出关节肿胀、步态异常等症状。
实验室通过病毒检测等手段可对该病进行准确诊断。
针对该病的防控，应加强卫生管理、疫苗接种等措施。
流行病学调查结果显示该病在某些地区呈现流行趋势。
鸡病毒性关节炎的防控对于保障家禽养殖业的可持续发展至关重要，未来的研究应进一步完善防控策略，促进该病的有效控制和预防。
【关键词】鸡病毒性关节炎、流行病学、临床症状、实验室诊断、防控措施、病原体、重要性、研究方向、结论。
1. 引言1.1 研究背景鸡病毒性关节炎（avian viral arthritis）是一种由禽病毒引起的常见疾病，主要影响饲养的家禽，如鸡和火鸡等。
这种疾病具有高度的传染性和致病性，对禽类养殖业造成了严重的经济损失。
随着禽类养殖规模的不断扩大和国际贸易的加快，鸡病毒性关节炎的防控变得更加紧迫和重要。
研究背景中还包括疾病的病原体特征以及传播途径，这对于制定有效的防控策略至关重要。
通过深入了解鸡病毒性关节炎的流行病学特点和临床表现，可以更好地帮助养殖者及养殖相关人员提高对该疾病的认识和防范意识，降低疾病的发生率和传播风险。
对鸡病毒性关节炎进行流行病学研究、临床诊断和防控措施的探讨具有重要的意义和价值。
1.2 研究目的研究目的是为了深入了解鸡病毒性关节炎这一疾病的病原体特征、临床表现以及实验室诊断方法，从而能够提供更精准的诊断和治疗方案。
通过对疾病的流行病学调查结果进行分析，可以更好地了解疾病的传播规律和影响因素，为制定科学有效的防控措施提供依据。
本研究旨在提高人们对鸡病毒性关节炎的认识，增强预防意识，减少疫病的传播，保障家禽养殖业的发展和人类健康。
通过本研究，希望为进一步的防控工作提供参考，促进相关疾病的研究和治疗进步，为保障家禽健康和生产安全做出贡献。
实验室十三 琼扩实验 禽类实验室诊断技术课件
反应原理
在生产中的应用
• 1、用于诊断疾病 即用已知的抗体测定未 知的抗原，如马立克病的诊断。
• 2、测定血清中的抗体效价 即用已知的抗 原测定未知的抗体，如雏鸡体内法氏囊母 源抗体的检测。
鸡马立克氏病实验室诊断
一、实验器材
• 打孔器、16#针头、打孔纸样、记号笔、酒精 灯、微量移液器、湿盒、培养箱、优质琼脂粉、 氯化钠、蒸馏水、已知鸡马立克氏病阳性血清、 已知鸡马立克氏病标准抗原、被检鸡的羽囊等。
二、实验步骤
• 3、封底 将平皿底部在酒精灯火焰上 微微加热，使孔底琼脂糖稍微融化。
二、实验步骤
• 4、加样 向中央孔加马立克阳性血清，向周 边1、4孔加标准马立克琼扩抗原作对照，向周边2、 3、5、6孔加待检羽髓浸液。
• 注：羽髓浸液制备：选拔受检鸡含羽囊丰满的羽 毛10根以上，将带有羽髓的毛根剪集于小试管内， 每管加入0.5毫升生理盐水，用玻璃棒将羽毛根压 集于管底，以适当压力转动玻璃棒10多次，待浸 提液混浊后，用吸管将其移入外周孔内。
二、实37℃温箱，扩散48～72h后观察结果。
三、结果判定
• 1．阳性：如果中央阳性血清孔与周边羽髓孔之 间出现一条清晰致密沉淀线，即为阳性。一般每 只受检鸡采6根血羽，其中若有一根血羽出现沉 淀反应，则制定该鸡为阳性鸡。
• 2．阴性：当中央阳性血清孔与周边羽髓孔之间 不形成沉淀线者，则判为阴性。
鸡传染性腔上囊病 血清抗体效价检测
二、实验步骤
• 1、 琼脂糖平板制备 • 2.打孔 • 3.封底 • 4.加样 中央孔滴加法氏囊标准琼扩抗原，周
边第1孔加阳性血清作对照，第2、3、4、5、6 孔滴加不同稀释倍数的血清（不稀释、2倍、4 倍、8倍、16倍稀释）。
矿产
矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。
如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。
㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。
(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。
如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。
对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。
二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。
2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。
㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。
2、矿产品价格稳定性及变化趋势。
三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。
2、矿区矿产资源概况。
3、该设计与矿区总体开发的关系。
㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。
2、矿床开采技术条件及水文地质条件。
矿产
矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。
如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。
㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。
(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。
如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。
对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。
二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。
2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。
㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。
2、矿产品价格稳定性及变化趋势。
三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。
2、矿区矿产资源概况。
3、该设计与矿区总体开发的关系。
㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。
2、矿床开采技术条件及水文地质条件。
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圳 ．分清 主次 ，确定 占主 导地位 的疾病 兼顾 其 他 疾
．
制定 一套切 实可 行 的治疗原 则 和综 合性 防 治措
验 项 目的建 议 和要求 ， 以供 参学 ， 使 验 伶验 的
匀浆 机 、 灭菌滴 管 、 皿 、 平 石蜡 、 干燥 箱 、 燥 器 、 干 分 析天平 、 管 、 试 试管 架 、 子 、 子 、 精灯 等 。 镊 剪 酒
病 学调 查 、 群观 察 、 理剖 检所取 鸡 病
息ｆ ¨术能
一
病 原感 染在鸡 病临 床上 比较 少 见 ，很 多病
足 以判 断 出是 什 么病 的情 况 下 ． 条件 的 ， 迅述 仃 采 集病料 送 往实验 室 检验 ，获得 更 为仃 的 渗惭 Ｊ
囊， 接种 ０１毫升 ， ． 蜡封 闭 ， 直立 培养 。 ３３６材 料 收获 。接 种 后 ６小 时 检 查一 次 ，４ ．． ２
３ ． 孔再 加入 ２ ． ５各 ５ ５微升 Ｐ Ｓ液 。 Ｂ ３５ ．． ６以上各 孔 内分 别 加 入 红 细 胞混 悬 液 ２ ５微 升， 振荡 １分钟 后 ， 于 ２ ℃的环境 下 ３ 置 ５ ０分钟 ， 观察 结果 。
２临 床 症 状 及 病 理 变 化
跛 行 、 节 肿胀 ， 关 内渗 ｌ物 黄 色或 脓性 ， 肖 叶 Ｊ 腱革 水
肿、 滑膜 点 状 出血 、 消化 道 Ｈ ｍ 或 坏 ． 欲下 降 、 ｛ 食
稀 便混 有未 消化饲 料 ， 生素 治疗 尤效 抗
３实 验 室 诊 断
超净 丁作 台 、 温培养 箱 、 温 离 心机 、 恒 低 琼脂 、
例怂 『种 以上病 原对机 体产 生致 病作 用 ，形 成 并发 ｌ Ｉ 』 感 染 、 发感染 ， 继 这要求 兽 医工作 者对 鸡 病诊 断 时进 行 的 、 合 的分 析 ， 与类 似 疾 病 反 复 比较 、 综 并 鉴
依 据 。在采 集病 料时 ， 必须 沣意病 料 蛰新鲜 ， 人 九
１病 例 介 绍
病 料 的容 器要 防破 碎 ， 防扩 散 ， 对样 品来 源 、 集 采
过程要记 录清楚 。
３１ 要 求有兽 医资 质的技 术人 员采集 样 品 。 ．． ２ ３１ ．． ３对设 备 、材料 在使 用前 要进 行 维护 检查 和高 压灭菌 消毒处理 ， 确保 器具符 合 国家标 准 。 ３１ ． ４病 理 剖检 要 在解 剖 室 内解 剖 台 进 行 ， ． 解 剖 后要彻底 消毒 ， 弃物要 烧毁 。 废 ３１ ． ５病料 的分离 培养 在无 菌 室 内超净 工 作 台 ． 进 行操 作严 防污染 ３１ ． ６废弃物 品 ， 水要集 中无 害化 处理 。 ． 废
３１ ．． 次 检 验 操 作 后 对 实 验 室 进 行 彻 底 消 ７每 毒
３ ． 备 材 料 准 备 ２设
２１ ０ １年 ６月 平 泉县 杨 树 岭 肉鸡 场 ９ ０ ０ ０只 鸡 场 ３ ４周龄 雏鸡 ４ ０ ０ ０只突然 发病跛 行跗 关节 发 炎 肿 胀 ， 长 停 滞 、 包 炎 、 包 积 水 蛋 鸡 也 发 生 生 心 心 １％的产 蛋量 下 降 。后期 患病雒 鸡 ３ ０余 只发 衰 ０ ０ 竭 死亡 ， 死亡 率约 ７ ％。
３３１ 菌 采集病 鸡 关节 液 。 －． 无
３３２在超 净工 作 台 内称 重 加 １ ．． ： ５生理 盐水 。 ３３３营养 琼脂 培 养无 菌 。 ．－ ３３４４ －－ ℃离 心取 上清 液 。
９。 ０Ｖ型 板第 一排 第一 孑 内 ， 比稀释 至 １ 孑 。 Ｌ 倍 １ Ｌ
琼 扩 实 诠 病 毒 胜 关 节 炎 验 断鸡
左 林威 ， 刘志新 ， 陈文彬 ， 国亮 陈 （ 北省平泉县 农产 品质量检 测 中心 ， 河 河北平 泉 ０ ７ ０ ） ６ ５ ０
鸡病 毒性 关节 炎 ， 由呼肠弧 病毒 引起 的 禽类 是 传 染病 。国家定 为三类 动物 传染病 。该病毒 不能凝
小 时 内死亡 的弃 去 。 ＿ 二天后 死亡 的解 剖 ， 检查胚 体 出血 呈 紫色 ，吸取卵 黄液 采集 卵 黄囊 ，匀 浆 机绞 碎， 营养 琼 脂 培养 无 菌 ， 于冰 箱 反 复冻 融 ４次 ， 置 ４Ｉ 心 ３ ０ ｃ离 Ｃ ０ ０转／ 钟 ，０分钟 ， ０２ 分 ３ 加 ．％甲醛 ， 去沉 淀， 浓缩 ， 即为抗 原 。 ３３７检 验 ， Ｓ Ｆ鸡 以病 毒 性关 节 炎 弱毒 疫 － ． 用 Ｐ
３５ ．． 新 城疫 标 准抗 原 ２ ４取 ５微 升 于 加 入 到 已放
人 Ｐ Ｓ液 的 ９ 。 型 板第 二排 第 － Ｔ ，倍 比稀 释至 Ｂ ０Ｖ Ｌ
１ １孔 。
３３５鸡胚 接 种 ， 健 康鸡 且 对 鸡病 毒 性关 节 －． 选
炎 无免 疫 的新 鲜 蛋 ， 毒 、７５ 、０ 消 ３ ．℃ ６ ％湿 度 ， 规 常 孵 化第 ４天 。气 室顶 部 消毒 ， Ｌ 针 头插 人 卵 黄 钻孑 ，
集 红细胞 。 发病 时引起 跗关节 肿胀措 施 ．
３１ 采 集样 品和 抗原 制作 过程 有严 格 的生物 ．． １
安 全保 护制 度 ， 带 消毒 液 ， 防 护 衣 帽 手套 ， 要 穿 装
不 良 、 长停 滞 ， 血症 。临 床上 难 与滑 膜 支 原体 生 败 病、 大肠 杆 菌 、 萄球 菌 病 、 立 克病 相 别 。 时 葡 马 有 且 混发 ， 养禽业 带来 巨大损 失。 给 该 病 的诊 断 、 们着 重在病 原学 上进 行琼扩 文 我 验 ， 指病 因 以鉴 别其 他病原 的混淆 ： 直
目 的更 为 明 确 。
５全 面 分 析 诊 断 ５一 １ 今 日畜牧兽医 ２ ｌ．９ ０２０
施． 使之 实施 后 ， 鸡病 能 得 到迅 速 的控 制 和扑 灭 。 把 济拟 火降到最 低。
３３病 毒 分 离 鉴 定 ．
计 ２ ４孔 内 ． 别加 入 ２ 分 ５微 升 Ｐ Ｓ Ｂ ３５３被检 抗 原 ２ ．． ５微 升加 入 到 已放人 Ｐ Ｓ液 的 Ｂ