PMSF及常用试剂的配制方法

英文全称：Phenylmethanesulfonylfluoride 中文名称：苯甲基磺酰氟

分子式：C7H7FO2S

分子量：174.19

CAS 号：[329-98-6]

PubChem号：4784

结构示意图：

分类：

OrganicChemicals

SulfurCompounds

Sulfones

PhenylmethylsulfonylFluoride

使用介绍：

1）抑制丝氨酸蛋白酶（如胰蛋白酶，胰凝乳蛋白酶，凝血酶）和巯基蛋白酶（如木瓜蛋白酶）；

2）10mg/ml 溶于异丙醇（或无水乙醇）中；

3）在室温可保存一年,一般保存在-20 度或4 度.；

4）工作浓度：17~174ug/ml （0.1~1mM），储存液浓度为100 或200mM ;

5）在水液体溶液中不稳定，30分钟就会降解一半，必须在每一分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSF,样品处理超过1h,补加一次。（见水分解，使用前加入）【注意事项】

1.PMSF剧毒，严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。为了安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。

2.PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。

3.PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25C的失活速率高于4C。pH值为8.0时，20卩mmol/IPMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节为碱性（pH>8.6）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。PMSF的储存：28C可以存放数月之久。欲长期保存，可冻存在-20C

例:100mMPMSF

称量0.174gPMSF（针状结晶固体）溶于10ml异丙醇，震荡混匀，保存在-20度或4度. 工作浓度我一般用1mM,1:100（V/V）加入即可.样品处理超过1h,补加一次.

（PMSF剧毒，为了安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作. PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。）

PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25C的失活速率高于4C。pH 值为8.0时，20卩mmol/lPMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节为碱性（pH>8.6）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。

用异丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml （10mmol/L），分装成小份贮存于-20C。女口有必要可配成浓度高达17.4mg/ml 的贮存液（100mmol/L）。

常用试剂的配制：

1、30%丙烯酰胺

(1)配制方法：将29G丙烯酰胺和1gN , N'-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml 的水中，加热至37C溶解之，补加水至终体积为100ml,用Nalgene滤器(0.45um 孔径)过滤除菌，查证该溶液的pH 值应不大于7.0，置之不理棕色瓶中保存于室温。( 2)说明：小心丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收，其作用具螺积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料。

一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂( MB-1Mallinckrodt )，搅拌过夜，然后用Whatman1 号滤纸以纯化之。在贮存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酸和双丙烯酸。

2、10%过滤酸铵

(1)配制方法：把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中，该溶液可在4°C 保存数周。

3、1mol/L 氯化钙

(1)配制方法：在20ml纯水中(Milli-Ce水或相当级别的水)溶解54gCacl2?6H2O 用0.22um滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于-20 C。

(2)说明：制备感受态细胞时，取出一小份解冻并用纯水稀释至100ml，用Nalgene滤器(0.45um孔径)过滤除菌，然后聚冷至0C。

4、1mol/L 二硫苏糖醇( DTT )

(1)配制方法：用20ml0.01mol/L乙酸钠溶液(pH5.2)溶解3.09gDTT,过滤除菌后分装成1ml 小份贮存于-20C。

(2)说明：DTT 或含有DTT 的溶液不能进行高压处理。

5、0.5mol/LEDTA (pH8.0)

(1)配制方法：在800ml水中加入186.8=水乙二胺四乙酸二钠

(EDTA-Na?2H2O)，在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节溶液的pH值至8.0 (约需20gNaoh颗粒)然后定容至1L,分装后高压灭菌备用。

(2)说明：EDTA 二钠盐需加入NaoH 将溶液的pH 值调至接近8.0时，才能完

全溶解。

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6、10mg/ml 溴化乙锭

(1)配制方法：在100ml水中加入1g溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容光焕发器或转移至棕色瓶中，保存于室温。

(2)说明：小心：溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性，使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套，称量染料时要戴面罩。这些溶液使用后应按附录E 提供的方法之一进行净化处理。

7、100mmol/LIPTG

配制方法：IPTG为异丙基硫式-B -D-半乳糖苷(分子量为238.3D)，在8ml蒸馏水中溶解2glPTG后，用蒸馏水定容至10ml，用0.22um滤器过滤除菌，分装成1ml 小份贮存于-20C。

8、1mol/L 硫酸酶

(1)配制方法：在800ml水中溶解214.46g四水乙酸镁，用水定容至1L,过滤杀菌。

9、B巯基乙醇(BME)