第七章器官发生与体细胞胚胎发生
月季研究进展
月季组织培养研究进展摘要:本文概括了月季在国内外育种的研究进展,从月季腋芽萌发、器官发生、体细胞胚胎发生三个方面综述了品种、外植体、基本培养基成分、激素浓度及配比、培养条件及不同的外植体处理方法等影响因素对月季组培体系的影响,并对今后月季组织培养的研究进展做出了展望。
关键词:月季;组织培养;腋芽萌发;器官发生;体细胞胚发生Advance in Research of Rose Tissue CultureLiu Mei student id()College of Agronomy and Biotechnology, Southwest University, Chongqing 400715,ChinaAbstract:This paper summarized the rose research and development trends in China and abroad , and the influence of thevarieties,explants,medium compositions,hormone concentration,cultivating conditions and different treating with explants on germination , organogenesis and somatic embryogenesis of rose tissue culture are reviewed , and the trend of the research was also put forward in this paper.Key words:rose; tissue culture; germination ; organogenesis; somatic embryogenesis前言:月季,被称为“花中皇后”,又称“月月红”,蔷薇科,是中国十大名花之一。
体细胞胚发生
植物物种和品种基因型影响 愈伤组织的分化
• 程林梅等（2001）的研究表明，利用不同 基因型大豆品种的下胚轴作外植体进行组培时， 培养基对愈伤组织的影响不明显；细胞分裂素 （KT）和NAA的配比浓度对其愈伤组织的分 化影响显著；不同基因型大豆植株再生作用差 异明显；外植体取材时间和取材部位对再生植 株的形成也具有较大的影响，再生能力最强的 取材部位时从子叶节到下胚轴6mm区段,当下 胚轴长到2~3cm时取材最佳。
2 氮源 除生长素外，培养基中氮源的形态也会影响离 体条件下的胚胎发生。只有当培养基中含有一定量 的还原态氮时，才能出现胚胎发生过程。 在以KNO3为唯一氮源的培养基上建立起来的 愈伤组织，去掉生长素后不能形成胚。然而，若在 55mmol/LKNO3的培养基中加入少量的 (5mmol/L)NH4Cl形态的氮，胚胎发生过程就会出 现。
不同浓度的激素对烟草愈伤组织的影响
愈伤分化
器官分化的植物激素控制理论
• 大量的实验结果表明：
大多数植物组织或器官的再生作用符合器 官分化的植物激素控制理论。
即：生长素与细胞分裂素的比例小时则产 生苗，比例大时则生根，而两种激素的比例适中 时，则产生无结构的愈伤组织。
器官发生途径
外植体 脱分化 愈伤组织 再分化
• 1.4.1.2位置效应
1.4.2 器官分化信息传递
1.4.2.1 胞外信号分子
• 胞外通讯信号分子又称第一信使(first messenger)。在植物细胞外的通讯信号分子，， • 如植物激素主要通过维管束系统在细胞与器官间 进行调节。它在植株的某些发育阶段，于特， • 部位发生作用。植物激素信号由位于膜或其它部 位的受体所接收，进一步直接或间接地影响： • 因表达。当植物激素以直接的形式影响基因表达 时，就会产生在转录、翻译等水平上的不同， • 应，从而控制酶的合成，影响代谢变化，最终产 生某些生理反应。
植物细胞工程原理与技术智慧树知到期末考试章节课后题库2024年浙江农林大学
植物细胞工程原理与技术智慧树知到期末考试答案章节题库2024年浙江农林大学1.分离原生质体的酶液中加入氯化钙是为了稳定原生质膜。
（）答案:对2.培养室通常采用紫外线灭菌。
（）答案:对3.不同种植物对农杆菌敏感性差异大，同一种植物敏感性相同。
（）答案:错4.孔雀绿能够抑制病毒的合成，但不能使病毒失活。
（）答案:错5.酶解处理一般在光照条件下进行。
（）答案:错6.指示植物法是病毒检测中最古老最准确的方法。
（）答案:错7.胚乳培养的再生植株都是三倍体。
（）答案:错8.胚状体和合子胚一样具有两极性。
（）答案:对9.植物原生质体是观察大分子吸收和转移的良好材料。
（）答案:对10.接种器械一般采用照射灭菌。
（）答案:错11.胚培养可用于克服杂种不活性。
（）答案:对12.对花药进行预处理的主要目的是为了提高诱导率。
（）答案:对13.植物脱毒处理的温度和时间因植物的种类而异，和处理器官的生理状况无关。
（）答案:错14.茎尖越小，脱毒效果越好。
（）答案:对15.细胞培养周期是指一定起始密度的单细胞，从开始培养到细胞数目和总重量停止增长的过程。
（）答案:对16.过滤灭菌微孔滤膜的直径以0.22 μm为宜。
（）答案:对17.固体培养是组织培养中最常用的方法。
（）答案:对18.能被酚臧红花染成红色的细胞为活细胞。
（）答案:错19.采用氯化汞对外植体进行消毒，时间越长越好。
（）答案:错20.细胞工程是应用细胞生物学和分子生物学的方法，通过类似于工程学的步骤在细胞整体水平或细胞器水平上，遵循细胞的遗传和生理活动规律，有目的地制造细胞产品的一门生物技术。
（）答案:对21.原生质体融合首先是细胞质融合，最后是细胞核融合。
（）答案:错22.处于四核胚囊期的子房离体培养成功率高。
（）答案:错23.悬浮培养只能用于细胞培养。
（）答案:错24.Vir基因的活化是农杆菌Ti质粒转移的先决条件。
（）答案:对25.早熟萌发的胚一般能形成许多植株。
器官与胚状体发生途径
-在植物组织培养过程中，所采用的外植体经过诱导能够重新进行器官分化，长出芽、根、花等器官，最后形成完整植株，这种经离体培养的外植体重新形成的完整植株叫做再生植株。
植株的再生途径大致分为两种：一种是经过体细胞，通过形成胚状体获得再生植株；另一种是先形成芽的过程。
1944年，Skoog证实了这个现象。
尔后Skoog等人又以烟草为试验材料，较为系统地研究了在离体条件下芽、根的诱导。
1948年，Skoog等人首先报道，在组织培养过程中器官形成为化学药剂所控制的研究成果，即在离体条件下芽、根的诱导并不是由某些物质的绝对浓度所决定，而是为那些参与分化物质间的比例关系所决定。
很多事实表明，当外植体形成愈伤组织后，可以通过调整某些植物生长物质的比例来促使芽或根的分化。
一般来说，生长素有利于愈伤组织形成根，细胞分裂素可促使愈伤组织形成芽。
例如在菊花的愈伤组织培养中，根或芽的产生取决于生长素与细胞分裂素二者间的比例。
当生长素/细胞分裂素的比例高时则容易形成根，生长素/细胞分裂素的比例低时则容易形成芽。
根据此规律，就能通过调整培养基中的植物生长物质比例来调控外植体的根器官或芽器官形成。
在植株再生过程中，器官的分化在很大程度上是受到培养基中的植物生长物质的种类、水平、配比等因素的影响，由于它们的作用，植物的基因能够启动，进行表达，最终表现出生理、形态上的变化。
但是，这种变化很大程度上也取决于外植体细胞的生理状态。
（一）胚状体途径在组织培养过程中，单个花粉、体细胞也可以通过与合子形成相类似的过程，即通过原胚期、球形胚期、心形胚期、鱼雷形胚期和子叶期而形成类似胚的结构，这种类似胚胎的结构与合子胚的来源不同，被称为胚状体。
胚状体途径是指外植体按胚胎发生方式形成再生植株的过程。
在植物的有性生殖过程中，精子与卵子结合形成合子，尔后发育成胚，胚再进一步发育成完整的植株。
大量研究表明，植物的体细胞具有形成胚的潜力。
通常将高等植物的卵细胞在受精后所发育成的胚叫做合子胚；而将高等植物的体细胞在一定条件下所诱导形成的胚叫做体细胞胚，即所谓的胚状体。
器官发生与体细胞胚胎发生
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影响体细胞胚胎发生的因素
——长期培养物形态发生潜力的丧失 诱导胚状体的形成 在自然界只有少数植物可以通过体细胞胚胎发生而产生胚状体，但在培养条件下，现在已知有30多个科、150多种植物可以产生胚状体。诱导胚状体时一般使用胚分生组织或生殖器官的组织作为外植体。在一个含有丰富还原态氮的基本培养基，在存在生长素，特别是2，4-D时诱导胚状体的发生，然后转移到降低浓度呀没有生长素的培养基上使胚状体成熟和生长。
胚状体方式(somatic embryo)
指由培养细胞诱导分化出具胚芽、胚根、胚轴的胚状结构，进而长成完整植株。 由外植体经胚状体形成完整植株可分三个不同发育阶段： 外植体细胞脱分化。外植体发生细胞分裂，或进而形成愈伤组织。这一阶段同不定芽方式一样。 胚状体形成 在植物有性生殖中，精于和卵子结合形成合子，合子进一步发育成胚。但在组织培养条件下胚状体的发育过程是：细胞经脱分化后，发生持续细胞分裂增殖，并依次经过原胚期、球形胚期、心形胚期、鱼雷形胚期和子叶期，进而成为成熟的有机体。我们把由愈伤组织的类似薄壁组织细胞不经有性过程而直接产生类似胚的这一结构，称为胚状体。 胚状体再发育成完整植株 在外观上，这种方式和不定芽均有光滑、圆形突起的形状。
第七章 器官发生与体细胞胚胎发生
植物细胞全能性实现的过程:
发育成完整的植株
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器官发生
概念：离体培养的组织、细胞在诱导条件下经分裂和增殖再分化形成不定根和不定芽等器官的过程。 发生方式： 直接发生：（具有初生分生能力的）外植体直接分化成器官的过程。如落地生根. 间接发生：外植体（已分化的成熟组织）经脱分化形成愈伤组织再分化形成器官的过程。
体细胞胚胎发生
❖ 通过重复体细胞胚胎发生形成体细胞胚无性系。
第二十七页，课件共有43页
8.2 人工（合成）种子的制备
❖ 虽然对于胚胎发生来说，其他形式的还原态氮 都不如NH4＋有效，但水解酪蛋白、谷氨酰胺 和丙氨酸等也可用做可靠的代替品。
第十六页，课件共有43页
3.3 其他因子
❖ 钾的浓度：在野生胡萝卜中，高浓度的钾 （20 mmol／L）是胚胎发生所必需的。
❖ 溶解氧的含量：培养基中溶解氧的含量应低于 一个临界值（1.5 mg／L）。
❖ 植物人工种子（plant artificial seed）概念最 早由Murashige（1978）提出，它是指将植 物离体培养中产生的体细胞胚或能发育成完整 植株的分生组织（芽、愈伤组织、胚状体等） 包埋在含有营养物质和具有保护功能的外壳内 形成的在适宜条件下能够发芽出苗的颗粒体 （图4－4，图4－5）。
细胞分裂，但抑制它的成胚潜力；ZT促进； 咖啡叶片愈伤组织要求激动素与生长素比例高。 ❖ 赤霉素：能抑制体细胞胚胎发生
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3.2 氮源
❖ 除生长素外，培养基中氮源的形态也会显著影 响离体条件下的胚胎发生。体细胞胚诱导和成 熟需要大量氮素，通常为还原态氮如铵盐。
❖ 例子 1：野生胡萝卜体细胞胚诱导 ❖ 例子 2：栽培胡萝卜体细胞胚诱导 ❖ 培养基中还原态氮和硝酸盐(NH4Cl＋NO3－)组
第二十三页，课件共有43页
7.2 生理假说
❖ 在某些情况下，形态发生潜力的下降可能是由 于细胞或组织内激素平衡关系的改变造成的， 或是由于细胞对外源生长调节物质敏感性的改 变造成的。在这种情况下，细胞虽然停止了器 官和胚胎的分化，但不一定就丧失了这种分化 能力。因而，在这种情况下，如果改变外部处 理条件，有可能够恢复细胞形态发生的潜能 （器官和胚胎分化）。
细胞工程题库精简版
细胞工程题一、名词解释1.植物组织培养：是指将植物组织在适当培养条件下诱导长成完整植株的技术。
2.植物的器官发生：指离体培养的组织或细胞团分化形成不定根、不定芽等器官的过程。
3.脱分化：已有特定结构和功能的植物组织的细胞，在一定的条件下被诱导改变原有的发育途径，逐步失去原有的分化状态，转变为具有分生能力的胚性细胞的过程。
4.愈伤组织：脱分化后的细胞经过细胞分裂产生无组织结构、无明显极性的松散的细胞团5.外植体：植物体上切下来进行培养的部分组织或器官。
可以是器官、组织、细胞和原生质体。
6.继代培养：指愈伤组织在培养基上生长一段时间后，营养物枯竭，水分散失，并已经积累了一些代谢产物，此时需要将这些组织转移到新的培养基上，这种转移称为继代培养或传代培养7.体细胞胚：又叫胚状体，是指离体培养条件下没有经过受精过程而形成的胚胎类似物。
8.植物胚胎培养：指对植物的胚及胚器官进行人工离体无菌培养，使其发育成幼苗的技术。
9.人工种子：又称合成种子或体细胞种子，是指将植物离体培养的胚状体或芽包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中的类似种子的颗粒。
10.植物脱毒：利用物理、化学或生物学方法脱除植物所感染的病毒，在无菌条件下培养不带病毒的植株，进行快速繁育无病毒种苗的技术。
11.看护培养：指用一块活跃生长的愈伤组织来看护单个细胞，使其持续分裂和增殖的一种培养方法。
这块愈伤组织被称为看护组织。
12.细胞系：是以一种细胞为主、能在体外长期生存的不均一的细胞群体13.细胞株：是指从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群。
14.细胞融合：指使用人工方法使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的技术。
15.体细胞杂交：指将不同来源的体细胞融合并使之分化再生、形成新品种的技术。
16.单倍体：细胞中含有正常体细胞一半染色体数的个体，即具有配子染色体组的个体。
17.花药和花粉培养：指离体培养花药和花粉，形成花粉植株，从中鉴定出单倍体植株并使之二倍体化的细胞工程技术。
《植物生理学》第七章植物的生长生理复习题及答案
《植物生理学》第七章植物的生长生理复习题及答案一、名词解释1.生长(growth)：在生命周期中，植物的细胞、组织和器官的数目、体积或干重的不可逆增加过程称为生长。
例如根、茎、叶、花、果实和种子的体积扩大或干重增加都是典型的生长现象。
2.分化：从一种同质的细胞类型转变成形态结构和功能与原来不相同的异质细胞类型的过程称为分化。
它可在细胞、组织、器官的不同水平上表现出来。
3.种子寿命：种子从完全成熟到丧失生活力所经过的时间。
4．种子活力：种子在田间条件下萌发的速度，整齐度以及幼苗健壮生长的潜在能力，它包括种子萌发成苗和对不良环境的忍受力两个方面。
5. 组织培养（plant tissure culture）：植物组织培养是指植物的离体器官、组织或细胞在人工控制的环境下培养发育再生成完整植株的技术。
根据外植体的种类，又可将组织培养分为：器官培养、组织培养、胚胎培养、细胞培养以及原生质体培养等。
6.植细胞全能性：植物体每一个细胞都具有分化成一个完整植株的潜在能力，即具有形成完整生物个体的全套基因。
7.愈伤组织：愈伤组织是指具有分生能力的细胞团。
8.光敏色素(phytochrome，Phy) ：一种对红光和远红光的吸收有逆转效应、参与光形态建成、调节植物发育的色素蛋白。
9.脱分化(dedifferentiation) ：植物已经分化的细胞在切割损伤或在适宜的培养基上诱导形成失去分化状态的、结构均一的愈伤组织或细胞团的过程。
10.再分化（redifferentiation）：由处于脱分化状态的愈伤组织或细胞再度分化形成不同类型细胞、组织、器官乃至最终再生成植株的过程。
11.生长最适温度：使植物生长最快的温度，叫植物生长最适温度。
生产上为培育健壮的植株，常常要求在比最适温度（生理最适温）略低的温度，即所谓协调的最适温度。
12. 胚状体（embryoid）：在特定条件下，由植物体细胞分化形成的类似于合子胚的结构。
植物组织培养试题库
植物组织培养试题库一、名词外植体：在植物组织培养过程中，由植物体上切取的根、茎、叶、花、果、种子等器官以及各种组织、细胞或原生质体等统称为外植体。
热处理脱毒：利用病毒和植物细胞对高温忍耐性不同，选择适当的高温处理染病植株，使植株体内的病毒部分或全部失活，而植株本身仍然存活。
平板培养法：是把单细胞悬浮液与融化的琼脂培养基均匀混合，平铺一薄层在培养基底上的培养方法。
消毒：指杀死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再发生危害作用。
玻璃化现象：在长期的离体培养繁殖时，有些试管苗的嫩茎、叶片呈现半透明水渍状，这种现象称为玻璃化。
脱毒苗：是指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要病毒在植物内的存在表现阴性反应的苗木。
灭菌：是指用物理或化学的方法，杀死物体表面和孔隙内的一切微生物或生物体，即把所有生命的物质全部杀死。
褐变：是指外植体在培养中体内的多酚氧化酶被激活，使细胞里的酚类物质氧化成棕褐色的醌类物质，有时使整个培养基变褐，从而抑制其他酶的活性，影响材料的培养。
微尖嫁接：指在人工培养基上培养实生砧木，嫁接无病毒茎尖以培养脱毒苗的技术。
主要程序：无菌砧木培养—茎尖准备—嫁接—嫁接苗培养—移栽。
植物细胞全能性：一个生活的植物细胞，只要有完整的膜系统和细胞核，它就会有一整套发育成一个完整植株的遗传基础，在适当的条件下可以通过分裂、分化再生成一个完整的植株。
人工种子：将组织培养产生的体细胞胚或不定牙包裹在能提供养分的胶囊里，再在胶囊的外面包上一层具有保护功能和防止机械损伤的外膜，形成一种类似自然种子的结构。
试管苗驯化：植物组织培养中获得的小植株，长期生长在试管或三角瓶内，体表几乎没有保护组织，生长势弱，适应性差，要露地移栽成活，完成由“异养”到“自养”的转变，需要一个逐渐适应的驯化过程。
器官培养：植物的根、茎、叶、花器（包括花药、子房）和幼小果实的无菌培养。
微体嫁接：指将0.1-0.2mm 的茎尖作为接穗，嫁接到由试管中培养出来的无菌实生砧木上，继续进行试管培养，愈合成为完整的的植株。
体细胞胚胎发生
心形胚
心形胚 原胚、球形胚、心形胚 球形胚、心形胚 原胚 原胚 原胚 原胚 球形胚、心形胚、鱼雷胚 球形胚、心形胚 胚性细胞、原胚 球形胚 原胚、球形胚、心形胚、鱼 雷胚 胚性细胞、球形胚、心形胚 胚性细胞、球形胚、心形胚 、鱼雷胚、小植株 球形胚、心形胚
第七章 植物体细胞胚胎发生
本章主要内容
体细胞胚胎的概念、特点和意义 影响体细胞胚发生的因素 体细胞胚胎发生的生物学 人工种子
一、体细胞胚胎的概念、特点和意义
概念
离体培养下没有经过受精过程，但经过胚 胎发生和胚胎发育过程所形成的类胚结构，称 为胚状体（embryoid）或体细胞胚（somatic embryo）。
饥饿；有丝分裂阻止
2、人工种子包埋
包埋材料： 海藻酸钠、明胶、果胶酸钠、琼脂、树胶
包埋方法： 液胶包埋法；干燥包埋法；水凝胶法
人工胚乳研制
木薯淀粉与海藻酸钠混合胚乳是目前比较理想 的材料，还可以在胚乳中加入激素（GA3等）、 缓释物（活性炭等）、固化剂（CaCl2等）、抗生 素、其他混合物等制作全能性人工胚乳。
人工种皮研制
壳聚糖、El-vax-4260（10％环己烷）等
三、人工种子转换实验
转换指人工种子在一定条件下，萌发、生长、 形成完整植株的过程。可以分为无菌条件下的转 换和土壤条件下的转换。
2、培养基的影响
碳源
碳水化合物的种类和浓度可以影响体细胞胚的生长 发育，蔗糖是体胚发生最有效的还原碳源。但在一些 试验中，某些糖的培养效果优于蔗糖。还可添加半乳 糖、可溶性淀粉等促进体胚的生长发育。
糖类还可作渗透调节剂对体胚发育或成熟起作用。
茶树育种学Chapter-07第七章 生物技术在茶树育种中的应用
第一节 组织与器官培养
1．取材（外植体）
考虑供体的生理状况及所取的部位，成功的难 易程度有所不同。
较大的外植体有较强的再生能力，易污染；快 速繁殖，可以相对大一些；太小多形成愈伤组织， 甚至难以成活。
第一节 组织与器官培养
（1）胚及相关材料 离体胚珠和子房与在母株上相同，形成种子，进
而发育成植株；另一种是胚珠和子房组织脱分化 产生愈伤组织和胚状体，进而发育成植株。
第一节 组织与器官培养
一、组织与器官培养的概念和应用 （一）组织与器官培养的概念 （二）组织与器官培养在育种中的应用 二．培养的步骤与方法 （一）无菌培养的建立 （二）营养繁殖体的增殖 （三）生根 （四）试管苗移栽大田
第一节 组织与器官培养
一、组织与器官培养的概念和应用
（一）组织与器官培养的概念 植物组织与器官培养(plant tissue and organ culture)是
（3）叶片
采摘面中央春季生长健壮的芽下第一、二叶，切 除主脉。
第一节 组织与器官培养
2．灭菌
既要达到灭菌的目的，又不能让外植体细胞 大量死亡。
灭菌药剂的种类和浓度、灭菌时间的长短。
第一节 组织与器官培养
3．培养基
考虑外植体能够存活和能够较快生长。 根据培养基作用，分为诱导产生愈伤组织的诱导 培养基(induction medium)和促使愈伤组织分化成 苗的分化培养基(differentiation medium)，它们都 是由基本培养基(basis medium)加上植物激素等成 分组成。
再生植株可起源于体细胞，为二倍体。起源于性 细胞，是单倍体。
胚培养有两种方式：以幼胚诱导愈伤组织，通过 器官发生或胚胎发生再生植株；二是使发育完全 的胚直接萌发，获得植株。
07 第七章 胚胎诱导及组织、器官形成
B 蛙囊胚背面
C 同一囊胚的腹面
E 在胚胎腹面注入
β-catenin后产
生的双体轴胚胎
2.中胚层形成的诱导
在囊胚赤道板有一条宽的环状的细胞带， 被植物极部位的信号因子所决定而发育为中 胚层组织。
将美西螈的中期囊胚分 为动物半球顶部帽状的 Ⅰ区、下部的环形的Ⅱ 区，植物半球的Ⅲ区。 如果将Ⅰ、Ⅱ区分离培 养，则只形成未分化的 非典型表皮，以后逐渐 退化。说明在中期囊胚 Ⅱ区尚未获得中胚层的 分化能力。
第一节 初级胚胎诱导
（primary embryonic induction）
初级胚胎诱导是指脊索中胚层诱导其表 面覆盖的外胚层发育为神经板的现象。
（一）组织者的发现及在初级胚胎诱导中的作用
❖将一种浅色蝾螈原肠胚的胚孔背唇 移植到深色蝾螈同龄胚胎腹侧。在宿 主原有的神经板相对的腹侧面形成了 另一个次级神经板。
❖其中最重要的一个背部 化决定子是转录因子βCATENIN。
❖在非洲爪蟾中，βcatenin在细胞质转动的过 程中开始在背部区域聚集， 在囊胚期只存在于背侧的 细胞中。
❖β-catenin是背轴形成的 关键。用β-catenin的反义 寡聚核苷酸处理会使胚胎 缺失背部结构。而在胚胎 的腹侧注入β-catenin会产 生第二个体轴。
❖晚期原肠胚胚孔背唇诱导躯干和尾部结构的形成，称为躯 干组织者和躯尾组织者
将原肠晚期原肠顶不同部位的移植块放到早 期原肠胚的囊胚腔中，会诱导不同的结构形成.
（二）初级诱导的过程及体轴决定的机制
初级胚胎诱导导致的胚胎模式形成过程包括四个 阶段:
1、Nieuwkoop中心的形成与背腹决定 2、中胚层形成的诱导 3、背部化与头尾化诱导 4、神经形成的诱导
植物组织培养 复习资料
第一章绪论植物组织培养类型根据培养材料不同分为：（1）完整植株培养：对幼苗和较大植株等的培养。
（2）胚胎培养：包括成熟胚、幼胚、子房、胚珠等的培养。
（3）器官培养：包括离体根、茎、叶、果实、种子、花器官的培养。
（4）组织培养：如分生组织、薄壁组织、输导组织培养。
（5）细胞培养：指对单细胞或较小的细胞团进行培养。
（6）原生质体培养：指对去掉细胞壁后所获得的原生质体进行培养。
根据再生途径分为：（1）器官发生途径（2）体细胞胚胎发生人工种子：是指植物离体培养产生的胚状体或不定芽被包裹在含有营养和保护功能的人工胚乳和人工种皮中，从而形成能发芽出苗的颗粒体。
作为繁殖材料。
植物组织培养技术的应用：1、优质种苗的快速无性繁殖1）无性繁殖作物及不易繁殖作物的快速繁殖2）通过茎尖培养生产脱毒健康种苗2、用于植物遗传育种包括种质资源离体保存；花粉花药培养产生单倍体；胚乳培养产生三倍体；胚培养拯救杂种胚克服远缘杂交障碍；原生质体培养进行体细胞杂交；植物体细胞无性系变异诱导和筛选；用于植物基因转移操作等。
3、大规模植物细胞、组织和器官培养生产次生代谢物质4、用于植物生长发育理论研究，包括生理学、病理学、胚胎学和细胞与分子生物学等第二章植物组织培养的基本技术组培实验室：包括化学实验室或准备室、接种室以及培养室三部分，并且按顺序排列。
在化学实验室与接种室之间应留有缓冲空间。
（1）准备室：用于培养器皿的清洗、培养基的配制、分装和灭菌、试管苗的出瓶及整理等工作。
冰箱、天平、高压灭菌锅、pH计、干燥箱、实验台、水槽、凉干架、药品柜、离心机、水浴锅、微波炉、电炉、磁力搅拌器、蠕动泵、移液器、各种玻璃器皿（烧杯、量筒、容量瓶、试剂瓶、三角瓶等）及培养基分装用品等。
（2）接种室：植物材料的灭菌、接种以及培养物的继代转接等。
超净工作台、紫外灯、小推车、搁架、磁盘、接种工具（各种镊子、解剖刀、手术剪、普通剪刀接种针、酒精灯、手持喷雾器、细菌过滤器等）等。
植物组织培养知识点归纳
植物组织培养知识点归纳1第1章植物组织培养:指植物器官、组织、细胞、原生质体等的培养。
体内使用人工培养基使它们生长成完整的植物2，外植体:在植物组织培养中，为无菌细胞、组织、器官等。
从活植物中提取并接种在培养基上的称为外植体。
3，愈伤组织:指在人工培养基上无序地从外植体中生长出来的大量薄壁细胞。
4.1的应用。
1农业应用。
幼苗的快速繁殖。
无病毒培养3。
(1)倍性育种，缩短育种年限，具有明显的杂种优势；(2)克服远缘杂交(胚胎培养)的不亲和性和不育性；(3)种质保存(4)变异2的创造，在遗传学、分子生物学、细胞生物学、组织学、胚胎学、基因工程、生物工程等方面的应用。
用于基因工程创造植物新种质用于植物生长发育的理论研究，包括生理学、病理学、胚胎学、细胞和分子生物学等。
3。
使用组织培养材料作为植物生物反应器第2章1，全能性:任何具有完整细胞核的植物细胞都具有形成完整植物所必需的所有遗传信息以及发育成完整植物的能力。
2，细胞分化:指导致细胞形成不同结构和功能变化或潜在发育模式的过程3，去分化:指在体外生长的细胞、组织或器官逐渐失去原来的结构，恢复分生组织状态，形成无组织结构的细胞团或愈伤组织的过程4，再分化:指去分化细胞恢复其分化能力并形成具有特定结构和功能的细胞、组织、器官甚至植物的过程5，植物组织培养中经常遇到的问题及解决方法1，污染与预防:1，真菌污染后，如果孢子已经形成，必须在高压灭菌后丢弃然而，在细菌污染的情况下，只要及时发现，材料仍然可以使用，并且材料上部不易受细菌影响的部分被切割和转移。
2.用抗生素等抗菌剂处理会影响植物材料的正常生长第二，的褐变和防止(1)选择合适的外植体(2)适宜的培养条件(3)用抗氧化剂连续转移(4)，玻璃化和防止(1)提高培养基中的溶质水平和降低培养基中的水势；(2)减少培养基中氮化合物的量；(3)增加光照；(4)增加容器通气量和施用CO2肥料对降低试管苗玻璃化有明显效果。
《植物组织培养》试题及答案
试卷编号NO：高等函授教育《植物组织培养》试题学号：姓名：一名词解释：（10*2分=20分）1、植物细胞组织培养2、细胞全能性3、脱分化4、外植体5、试管苗驯化6、间接不定芽发生7、双极性8、微体嫁接9、人工种子10、体细胞无性系变异二填空：（30*1分=30分）1、目前植物组织培养应用最广泛的方面是和。
2、由脱分化的细胞再分化出完整植株有两种途径，一种叫做，另一种叫做。
3、培养用具的常用灭菌方法有、、。
4、某些生长调节物质及抗生素、酶类物质遇热不稳定，对其灭菌时不能进行，而要进行。
5、一般来说，黑暗条件下有利于的增殖，而往往需要一定的光照。
6、植物离体授粉技术通常包括、、三个方面。
7、一般液体培养的继代时间较短，继代一次；而固体培养继代时间可以长些，继代一次。
8、外植体器官发生的三种途径包括、、。
9、从再生植株倍性来看，小孢子培养通常产生植株，胚培养通常产生植株，通常产生三倍体植株。
10、脱毒苗鉴定与检测的主要方法有、、、。
11、在生长素中，对于许多作物花粉的启动、分裂、形成愈伤组织和胚状体起着决定性作用，但是对却有抑制作用。
12、用平板培养法培养单细胞或原生质体时，常用来衡量细胞培养效果。
13、用药剂处理是诱导染色体加倍的传统方法。
三计算题（1*10分=10分）某培养基的配方是MS＋BA 2.0mg/L＋NAA 0.5mg/L＋2.5%蔗糖＋0.7％琼脂粉。
MS母液的浓度分别是：大量元素２０倍，微量元素500倍，铁盐100倍，有机物５０倍；BA母液浓度1.0 mg/ml ，NAA母液浓度0.1mg/ml。
要配制400ml 该培养基，需要吸取各种母液各多少ml？分别称取蔗糖、琼脂粉各多少克？（要求写出计算步骤）四简答题（5*5分=25分）1、造成组织培养过程中发生污染的原因有哪些？如何有效控制污染？2、简述外植体消毒的一般步骤。
3、胚培养在科学研究及生产实践中有哪些应用？4、结合花粉培养，简述看护培养法。
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组织的分化与器官建成
但在另一些例子中激素比例控制器官分化的问题 则出现完全相反的情况。苜蓿在有2，4-D和细胞 分裂素的培养基中，可以形成愈伤组织，转入不 加以上两种激素的培养基中能分化，但分化的情 况与原来的激素比例有关。如果愈伤组织是在高 细胞分裂素/生长素比例的培养基中形成的，易于 生根，而在高生长素/细胞分裂素比例的培养基中 形成的，易于生根，而在高生长素/细胞分裂素比 例的培养基中形成的愈伤组织，则易生芽。
组织的分化与器官建成
形成芽的培养基条件常有不同，有时芽与根可以同 时在组织培养中形成，一般说，培养物中形成的芽 如胡萝卜悬浮培养，油菜愈伤组织等。在组织培养 中通过根、芽诱导再生植株方式有三种：一种在芽 产生之后，于芽形成的基部长根而形成小植株，一 种是在根上生长出芽来，另一种即在愈伤组织的不 同部位分别形成芽和根，然后两者结合起来形成一 株植物。
湖北生态工程职业技术学院生物工程系 2021年2月12日
组织的分化与器官建成
由此看来，分化与激素的关系同植物的遗 传性有着密切的关系，用五个品种的烟草 做实验，用相同的生长素/细胞分裂素比例， 结果有的品种形成很多芽，有的形成很少 芽，有的完全不生芽。
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器官发生
概念：离体培养的组织、细胞在诱导条 件下经分裂和增殖再分化形成不定根和 不定芽等器官的过程。
发生方式：
直接发生：（具有初生分生能力的）外植体 直接分化成器官的过程。如落地生根.
间接发生：外植体（已分化的成熟组织）经 脱分化形成愈伤组织再分化形成器官的过程。
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组织的分化与器官建成
除营养芽之外，在组织培养中有时也 有花芽的形成，如烟草、花生等。也 有变态器官的形成，如百合鳞片切块 分化出的芽，形成小鳞茎，唐菖蒲茎 端可诱导形成小球茎，马铃薯的茎切 段可以形成块茎。
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组织的分化与器官建成
维管组织的分化
早期研究发现（Wetmore，1955），丁香的芽可 以诱导邻近的组织分化出维管束，后证明这是芽中 IAA的作用。将一块含有14C-IAA和蔗糖的琼胶楔 形物插入到愈伤组织切口中，14C-IAA表明蔗糖和 IAA通过琼胶扩散到愈伤组织，从而在愈伤组织中 造成这两种物质的梯度，在楔形物一颇有同感形成 维管束的瘤状物，瘤状物含有一形成层带，一面形 成韧皮部，一面形成木质部，与正常的维管束有类 似的排列。增加IAA的浓度，导致木质部形成，增 加蔗糖浓度则导致韧皮部形成。生长素水平恒定时， 2%蔗糖则全部分化出木质部，4%蔗糖几乎全部分 化出韧皮部，3%蔗糖则可以分化出二者。所以，生 长素和蔗糖浓度决定愈伤组织中维管束的类型与数 量。 湖北生态工程职业技术学院生物工程系 2021年2月12日
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组织的分化与器官建成
根是组织培养中易形成的器官，早在30年 代，就看以胡萝卜培养物中根的形成，以 后又在多种植物中看到，同一植物不同器 官可以诱导出根来：如棉花幼苗子叶、下 胚轴切段、油菜叶片、叶柄、下胚轴等， 多种植物愈伤组织也易生根。
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组织的分化与器官建成
培养基的物理因素和外界条件对器官建成有一 定影响。固体培养基有利于诱导愈伤组织，而 液体培养基有利于细胞和胚状体增殖。蓝光有 利于芽的分化，而红光、远红光对芽分化有抑 制作用，但促进根分化，紫光对生芽有刺激作 用。石刁柏、虎耳草属、凤梨科植物分化前期 需要低光强（1000勒克斯），后期要求高光 强（3000-10000勒克斯），降低氧浓度促进 胡萝卜愈伤组织芽的形成，增加氧浓度促进不 定根形成。
组织的分化与器官建成
Rier和Beslow进一步报道，蔗糖不仅影响细胞的 数目，而且影响其结构。低浓度蔗糖（0.5%）诱导 出环纹和梯纹管胞，1.5-3.-5%蔗糖诱导出梯纹和 网纹细胞。
细胞分裂素类对促进木质部形成也有作用。它们使 碳水化合物代谢趋向于五碳糖途径，促进木素前体 苯丙烷的合成，不同的细胞分裂素作用不同。玉米 素>激动素>6-BA（6-苄基腺嘌呤），NAA/激动 素的比值为0.5/20时有木质部发生和根形成，而比 值降为0.025/0.4时，只发生木质部而不发生根，赤 霉素（GA）、乙烯、脱落酸对木质部发生有抑制作 用。
组织的分化与器官建成
植物激素的成分影响着器官建成， Skoog和Miller等 所提出的生长素和激动素比例决定根和芽分化的观点， 曾被大量的试验结果所证明。
在很多禾谷类作物的组织培养中发现，用较高浓度的 生长素（2，4-D）诱导形成的愈伤组织，当培养在 除去生长素，或适当浓度的活性较低的生长素中时， 就可以诱导芽的形成。Nitsch等用Linsmaier(LM)培 养基附加10-5摩尔2，4-D培养水稻愈伤组织可以生 根，一旦转入无生长素的培养基时就能产生芽。 Rangan将小米愈伤组织从含生长素的培养基转移到 无生长素的培养基，一个星期内就形成了芽。
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组织的分化与器官建成
根和芽的分化 外植体诱导出愈伤组织后，经过继代培养，可以在愈
伤组织内部形成一类分生组织（meristemoid）即具 有分生能较往年小细胞团，然后，再分化成不同的器 官原基。有些情况下，外植体不经愈伤组织而直接诱 导出芽、根。所以器官发生有两种方式，即直接和间 接的。 外植体→器官发生（根、芽或胚状体）→再生植株。 外植体→愈伤组织→类分生组织→根、芽→再生植株。