第十六章 唾液及唾液斑检验
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概念： 唾液（ saliva ）：唾液腺的分泌物 唾液斑（ saliva stain）：唾液干燥后形成的斑痕
唾液来源：
颌下腺约70%，腮腺约25%,舌下腺约5%，其余小唾液腺
7
8
成分：（水分占99.4%）
有机物---粘/球蛋白质、氨基酸、尿素、尿酸、唾液淀粉酶、麦 芽糖酶、血型物质
无机物---钠、钾、氯、钙、铵、磷酸盐、碳酸盐、硫氰酸盐， 其余为固形物（口腔脱落上皮细胞、大量细菌、食物残渣）
唾液脂酶3种
唾液过氧化物酶3种唾液
富含脯氨酸蛋白3种（图1） 唾液糖蛋白11种
图1聚丙烯酰胺凝胶电泳Pr表型模式图
32
口腔粘膜脱落上皮细胞：
据报道，每15ml唾液及漱口水、每5cm2的唾液拭子
与唾液斑DNA平均含量分别为12μg、22μg、1.3μg及
0.8μg。测定10个烟头，每个烟头DNA的平均含量是
14
常用的唾液（斑）提取方法
1、新鲜唾液的提取：应要求被鉴定人先漱口，再将
纱布或棉拭子放人口中，浸湿后取出，立即置通
风干燥处晾干，分别包装，作好有关的记录。也
可将自然流出的唾液1～2mL ，置干净容器内置冰
冻保存 ，或者立即放水浴中煮沸10min，灭活唾 液中的血型分解酶活性，然后置4℃冰箱保存。
呈现浅红色者为阳性反应，证明是唾液斑。 硫氰酸根离子浓度较高时，呈现棕红色或 深红色，不变色或棕绿色则为阴性反应。
27
注意事项：
本法的特异性优于淀粉酶检出法，灵敏度虽 然低于淀粉酶检出法，但对于腐败唾液斑 而言，该法不受影响。
当淀粉酶检出试验阳性，在排除被硫氰酸 盐、溴化钾、重铬酸钾等化学药品污染情 况下，强阳性结果可以确证唾液斑。
41
性犯罪案件中，遗留在现场及受害者体内 的精斑是最重要的生物学证据之一。在勘 查现场时， 除了提取受害人阴道拭子、内 裤及可能留下案犯精斑的各类载体、烟蒂 等生物学检材，还要综合案件的具体情况， 特别是有反映案犯对受害人身体有亲吻情 况，不要忽视受害者的口唇、 乳房等相关 部位唾液斑的提取。
42
30
唾液（斑）多态性蛋白：
唾液碱性蛋白、唾液酸性蛋白、唾液富含脯氨酸蛋
白、唾液双带蛋白、腮腺唾液中带快蛋白等
唾液（斑）多态性ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ：
唾液淀粉酶、唾液脂酶、唾液6-磷酸盐脱氢酶、唾液 酸性磷酸酶等 检测方法： 酸性尿素淀粉凝胶电泳、碱性PAGE和等电聚焦电泳
31
等电聚焦电泳：
唾液淀粉酶6种表型
PAGE：
16
4.对可疑的用于堵嘴的手帕或衣物等均应整 件提取，如有湿润部位，应晾干后包装送 检。
5.犯罪分子用过的可疑口杯、茶具等均可用 两步擦拭法擦拭其边缘部位，或直接送检。 6.信封口或邮票背面可疑遗留唾液斑时，对 该信封和邮票整件提取，装物证袋，送检。
17
第三节 唾液（斑）的检测
1、肉眼检验 2、预实验 3、确证实验
4、个人识别
18
1、肉眼检验
唾液斑在白色背景下呈现淡黄色
唾液斑在紫外线下发出淡青色荧光
19
2、预实验
（1）淀粉-碘试验 （2）不溶性淀粉-染料复合物试验
（3）斑点法
20
淀粉-碘试验
试验原理：
淀粉遇碘呈蓝色。唾液中含有大量淀粉酶，能将 淀粉分解为糖，糖与碘不呈蓝色反应。因此，将 已知淀粉溶液与唾液斑作用后，再加碘，若不显 蓝色，说明反应体系中淀粉已被唾液淀粉酶分解。 然后再利用糖的还原作用验证淀粉分解产物糖的 存在，便可判断检材中含有淀粉酶。
34
形态学分析
X、Y染色质
DNA分析
1.染色体特异性片段：DXS454
2.X-Y同源序列：牙釉基因(Amelogenin)、
ZFY／ZFX基因
3.Y-STR或X-STR
35
36
案例分析一
某日，在某地一大桥洞中发现一具无名男 尸。经法医检验，确定为他杀。死因是棍 棒致颅脑损伤死亡。现场勘验提取到的主 要法医物证为2根带血迹的木棒、5处血迹、 4堆瓜子壳、8枚烟蒂案。
第十六章 唾液及唾液斑检验
Nsmc xdd
罗卡定律
1910 年，法国警官艾德蒙罗卡
内容： 所有接接触必留下痕迹 凡两个物体接触，必定会有所交换（转移） 意义： 刑事鉴识人员攻克无数难关的核心武器 法医学的黄金法则。
2
打喷嚏不光 会传播疾病 还会……
3
4
5
6
第一节 概述
一、唾液（斑）的特点
39
案例分析二
• 2 0 0 6 年某日，在一出租房内，发现龙某(女，2 0岁，) 下身裸露倒在床上，已死亡。现场位于一 砖混结构的出租房内，有清理痕迹，地面倒有大 量水痕，此现场为破坏现场，现场勘验没有提取 到有价值的痕迹物证。死者龙某颈部勒有一条撕 破的短裤，死因系机械性窒息。提取死者阴道拭 子、地上水迹等相关物证。考虑到死者有被性侵 犯的迹象，对尸体的左右乳房、口唇部斑迹进行 提取。
43
37
物证检验结果：
现场 5处血迹、2根木棒上血迹均为死者所 留；现场 8枚烟蒂和 3堆瓜子壳上唾液斑分别 为不同于死者的另外4名男性所留，另1堆瓜 子壳上唾液斑未检出STR分型数据。
通过D N A数据库比对，直接认定案犯。
38
瓜子壳上唾液斑D N A提取的特点：
• 按照一般人嗑瓜子的习惯，一堆瓜子壳为同一个人留下的可能性较大， 所以在现场提取瓜子壳时应注意按照不同方位分堆提取，不能全部集 中在一块提取。在 D N A检验时可以在同一堆内选择 2至 3枚瓜子壳 放入同一离心管中进行检验。由于每个人嗑瓜子的方式不同，在瓜子 壳上留下的唾液量也有较大差异，因此对送检的瓜子壳要认真挑选比 较新鲜的瓜子壳，要注意挑选相对潮湿的含唾液成分较多的进行检验， 这样检验成功的概率比较高。 • 瓜子在加工时一般加入糖、盐、味精等佐料，这些成分对 DNA扩增 有一定的抑制作用，所以用 Chelex-100法提取后要进一步纯化处理。
21
主要试验材料： 0.01%淀粉溶液、碘液、1%氯化三苯基四氮 唑溶液、碱性铜试剂等 试验方法： 首先证明淀粉酶的存在，然后阳性者进一步 证明糖的存在。
22
试验结果分析：
有无蓝色变化；有无红色沉淀
试验注意事项： 本试验灵敏度较高，要注意所出现假阳性 如
烟草浸出液；假阴性结果，如陈旧检材。
12～120ng。
基因组和线粒体DNA分析
DNA提取方法：Chelex-100法、有机溶剂法及其它
准确、有效地从唾液（斑）中提取DNA，是进 行DNA分析的关键。
33
分析血痕、精斑DNA 多态性的方法，均能 应用于唾液。好的唾液斑检材，只要能提 取出大分子 DNA，可进行 DNA指纹图分析； 陈旧唾液斑， DNA 部分降解，可用 PCR 法 分析。所以分析 DNA 多态性是目前进行唾 液 ( 斑 ) 个 人 识 别 的 有 效 手 段 。
氰酸盐及蛋白质抗体可杀灭细菌。某些动物唾液中 伤口愈合。 中和胃酸保护胃壁。
10
含神经生长因子和表皮生长因子可有助于创面收缩，
三、唾液（斑）检验
应用价值：主要是个人识别和亲子鉴定方面。
目的要求：是否唾液（斑）；个人识别
能否正确收集与保存唾液（斑）是检 材能否正确鉴定的关键所在。
11
第二节 唾液（斑）的提取
可能出现的地方：
现场的烟蒂、手帕、口罩、纸巾、瓜子皮、果核、
嚼过的口香糖、喝过水的茶杯；尸体皮肤（口唇部、
乳房）及其他物品上的咬痕等均可遗留有唾液斑。
唾液斑在白色背景下呈现淡黄色，紫外线下发淡青色荧光
12
13
一、《中华人民共和国安全行业标准》 中制定了血液及体液检材的提取标准， 其中也包括了唾液（斑）的相关内容。
23
3、确证实验
（1）口腔黏膜脱落上皮细胞检查
（2）三氯化铁试验
（3）其它（抗腮腺素血清、发射光谱法、叠 氮钠法等）
24
口腔粘膜脱落上皮细胞的检查
唾液中含有口腔粘膜脱落上皮细胞，将检
材用生理盐水充分浸泡，弃去载体，离心，
取沉淀物涂片，干燥后HE染色，显微镜下
检查。如发现口腔粘膜脱落上皮细胞，结
合淀粉酶试验阳性结果，可判断为唾液斑，
28
4、个人识别
（1）唾液（斑）红细胞血型检测
（2）唾液（斑）多态性蛋白和酶的检测
（3）唾液（斑）的DNA分析 （4）唾液(斑)的性别鉴定
29
中和试验（测定原理及方法与精斑类似） 免疫学方法：灵敏度高，适用于非分泌型和中 和试验阴性者，斑点ELISA、 ELISA-ABC等 其它方法：解离试验、混合凝集试验
性状：
无色、无味、接近中性（ph6.6-7.1）
分泌量：
正常成年人每日分泌唾液约1.0～1.5升，分泌量及性质受精神因 素、刺激的强度和性质及食物种类有关系。
9
二、唾液的功能
便于吞咽 淀粉酶可水解淀粉及糖原，起到消化作用；
湿润口腔，调和润湿食物，使食物溶解并引起味觉，
防止口腔干燥，清除食物残渣，洁净口腔；其中硫
如同时查见食物残渣，则更支持此结论。
25
三氯化铁试验
试验原理： 唾液中硫氰酸根离子在酸性条件下可与高 价铁离子反应生成红色络合物。 试验材料： 40%三氯化铁溶液，2.9M盐酸
26
试验方法：
将一滴可疑唾液或唾液斑浸液滴于白瓷板凹 内，先加一滴2.9M 盐酸溶液，再加一滴 40%三氯化铁溶液，摇匀，观察结果 实验结果：
40
物证检验结果：
(1) 龙某阴道拭子和外阴拭子均检出精斑，均为龙某男友曾 某所留； (2) 龙某口唇部擦拭物检出唾液斑成分，为龙某和曾某两人 混合； (3) 龙某右乳擦拭物检出唾液斑成分，为排除龙某男友曾某 外的另一名男性A所留； (4) 龙某左乳擦拭物检出唾液斑成分，为龙某、曾某和男性 A混合。 通过排查把目标锁定在案发后失踪的郭某身上。对郭某 暂住房进行勘查，提取地3枚烟蒂， 经DNA检验， 该3 枚烟蒂均为男性A所留。侦查人员成功抓获郭某，经检 验郭某与男性A基因型相同。
15
2、现场发现可以痰迹或尸体皮肤及其他物体 上咬痕部位的可疑唾液斑，应用生理盐水 浸润的棉拭子或纱布，擦拭斑迹，再用干 棉拭子或纱布擦拭相同部位，晾干，该两 份提取物应装入同一物证袋晾干后包好， 备检（两步法擦拭）。 3、烟蒂、瓜子壳、果核均应用镊子提取，按 不同提取部位分别装入物证袋，做好标记。
唾液来源：
颌下腺约70%，腮腺约25%,舌下腺约5%，其余小唾液腺
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成分：（水分占99.4%）
有机物---粘/球蛋白质、氨基酸、尿素、尿酸、唾液淀粉酶、麦 芽糖酶、血型物质
无机物---钠、钾、氯、钙、铵、磷酸盐、碳酸盐、硫氰酸盐， 其余为固形物（口腔脱落上皮细胞、大量细菌、食物残渣）
唾液脂酶3种
唾液过氧化物酶3种唾液
富含脯氨酸蛋白3种（图1） 唾液糖蛋白11种
图1聚丙烯酰胺凝胶电泳Pr表型模式图
32
口腔粘膜脱落上皮细胞：
据报道，每15ml唾液及漱口水、每5cm2的唾液拭子
与唾液斑DNA平均含量分别为12μg、22μg、1.3μg及
0.8μg。测定10个烟头，每个烟头DNA的平均含量是
14
常用的唾液（斑）提取方法
1、新鲜唾液的提取：应要求被鉴定人先漱口，再将
纱布或棉拭子放人口中，浸湿后取出，立即置通
风干燥处晾干，分别包装，作好有关的记录。也
可将自然流出的唾液1～2mL ，置干净容器内置冰
冻保存 ，或者立即放水浴中煮沸10min，灭活唾 液中的血型分解酶活性，然后置4℃冰箱保存。
呈现浅红色者为阳性反应，证明是唾液斑。 硫氰酸根离子浓度较高时，呈现棕红色或 深红色，不变色或棕绿色则为阴性反应。
27
注意事项：
本法的特异性优于淀粉酶检出法，灵敏度虽 然低于淀粉酶检出法，但对于腐败唾液斑 而言，该法不受影响。
当淀粉酶检出试验阳性，在排除被硫氰酸 盐、溴化钾、重铬酸钾等化学药品污染情 况下，强阳性结果可以确证唾液斑。
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性犯罪案件中，遗留在现场及受害者体内 的精斑是最重要的生物学证据之一。在勘 查现场时， 除了提取受害人阴道拭子、内 裤及可能留下案犯精斑的各类载体、烟蒂 等生物学检材，还要综合案件的具体情况， 特别是有反映案犯对受害人身体有亲吻情 况，不要忽视受害者的口唇、 乳房等相关 部位唾液斑的提取。
42
30
唾液（斑）多态性蛋白：
唾液碱性蛋白、唾液酸性蛋白、唾液富含脯氨酸蛋
白、唾液双带蛋白、腮腺唾液中带快蛋白等
唾液（斑）多态性ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ：
唾液淀粉酶、唾液脂酶、唾液6-磷酸盐脱氢酶、唾液 酸性磷酸酶等 检测方法： 酸性尿素淀粉凝胶电泳、碱性PAGE和等电聚焦电泳
31
等电聚焦电泳：
唾液淀粉酶6种表型
PAGE：
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4.对可疑的用于堵嘴的手帕或衣物等均应整 件提取，如有湿润部位，应晾干后包装送 检。
5.犯罪分子用过的可疑口杯、茶具等均可用 两步擦拭法擦拭其边缘部位，或直接送检。 6.信封口或邮票背面可疑遗留唾液斑时，对 该信封和邮票整件提取，装物证袋，送检。
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第三节 唾液（斑）的检测
1、肉眼检验 2、预实验 3、确证实验
4、个人识别
18
1、肉眼检验
唾液斑在白色背景下呈现淡黄色
唾液斑在紫外线下发出淡青色荧光
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2、预实验
（1）淀粉-碘试验 （2）不溶性淀粉-染料复合物试验
（3）斑点法
20
淀粉-碘试验
试验原理：
淀粉遇碘呈蓝色。唾液中含有大量淀粉酶，能将 淀粉分解为糖，糖与碘不呈蓝色反应。因此，将 已知淀粉溶液与唾液斑作用后，再加碘，若不显 蓝色，说明反应体系中淀粉已被唾液淀粉酶分解。 然后再利用糖的还原作用验证淀粉分解产物糖的 存在，便可判断检材中含有淀粉酶。
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形态学分析
X、Y染色质
DNA分析
1.染色体特异性片段：DXS454
2.X-Y同源序列：牙釉基因(Amelogenin)、
ZFY／ZFX基因
3.Y-STR或X-STR
35
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案例分析一
某日，在某地一大桥洞中发现一具无名男 尸。经法医检验，确定为他杀。死因是棍 棒致颅脑损伤死亡。现场勘验提取到的主 要法医物证为2根带血迹的木棒、5处血迹、 4堆瓜子壳、8枚烟蒂案。
第十六章 唾液及唾液斑检验
Nsmc xdd
罗卡定律
1910 年，法国警官艾德蒙罗卡
内容： 所有接接触必留下痕迹 凡两个物体接触，必定会有所交换（转移） 意义： 刑事鉴识人员攻克无数难关的核心武器 法医学的黄金法则。
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打喷嚏不光 会传播疾病 还会……
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第一节 概述
一、唾液（斑）的特点
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案例分析二
• 2 0 0 6 年某日，在一出租房内，发现龙某(女，2 0岁，) 下身裸露倒在床上，已死亡。现场位于一 砖混结构的出租房内，有清理痕迹，地面倒有大 量水痕，此现场为破坏现场，现场勘验没有提取 到有价值的痕迹物证。死者龙某颈部勒有一条撕 破的短裤，死因系机械性窒息。提取死者阴道拭 子、地上水迹等相关物证。考虑到死者有被性侵 犯的迹象，对尸体的左右乳房、口唇部斑迹进行 提取。
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37
物证检验结果：
现场 5处血迹、2根木棒上血迹均为死者所 留；现场 8枚烟蒂和 3堆瓜子壳上唾液斑分别 为不同于死者的另外4名男性所留，另1堆瓜 子壳上唾液斑未检出STR分型数据。
通过D N A数据库比对，直接认定案犯。
38
瓜子壳上唾液斑D N A提取的特点：
• 按照一般人嗑瓜子的习惯，一堆瓜子壳为同一个人留下的可能性较大， 所以在现场提取瓜子壳时应注意按照不同方位分堆提取，不能全部集 中在一块提取。在 D N A检验时可以在同一堆内选择 2至 3枚瓜子壳 放入同一离心管中进行检验。由于每个人嗑瓜子的方式不同，在瓜子 壳上留下的唾液量也有较大差异，因此对送检的瓜子壳要认真挑选比 较新鲜的瓜子壳，要注意挑选相对潮湿的含唾液成分较多的进行检验， 这样检验成功的概率比较高。 • 瓜子在加工时一般加入糖、盐、味精等佐料，这些成分对 DNA扩增 有一定的抑制作用，所以用 Chelex-100法提取后要进一步纯化处理。
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主要试验材料： 0.01%淀粉溶液、碘液、1%氯化三苯基四氮 唑溶液、碱性铜试剂等 试验方法： 首先证明淀粉酶的存在，然后阳性者进一步 证明糖的存在。
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试验结果分析：
有无蓝色变化；有无红色沉淀
试验注意事项： 本试验灵敏度较高，要注意所出现假阳性 如
烟草浸出液；假阴性结果，如陈旧检材。
12～120ng。
基因组和线粒体DNA分析
DNA提取方法：Chelex-100法、有机溶剂法及其它
准确、有效地从唾液（斑）中提取DNA，是进 行DNA分析的关键。
33
分析血痕、精斑DNA 多态性的方法，均能 应用于唾液。好的唾液斑检材，只要能提 取出大分子 DNA，可进行 DNA指纹图分析； 陈旧唾液斑， DNA 部分降解，可用 PCR 法 分析。所以分析 DNA 多态性是目前进行唾 液 ( 斑 ) 个 人 识 别 的 有 效 手 段 。
氰酸盐及蛋白质抗体可杀灭细菌。某些动物唾液中 伤口愈合。 中和胃酸保护胃壁。
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含神经生长因子和表皮生长因子可有助于创面收缩，
三、唾液（斑）检验
应用价值：主要是个人识别和亲子鉴定方面。
目的要求：是否唾液（斑）；个人识别
能否正确收集与保存唾液（斑）是检 材能否正确鉴定的关键所在。
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第二节 唾液（斑）的提取
可能出现的地方：
现场的烟蒂、手帕、口罩、纸巾、瓜子皮、果核、
嚼过的口香糖、喝过水的茶杯；尸体皮肤（口唇部、
乳房）及其他物品上的咬痕等均可遗留有唾液斑。
唾液斑在白色背景下呈现淡黄色，紫外线下发淡青色荧光
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一、《中华人民共和国安全行业标准》 中制定了血液及体液检材的提取标准， 其中也包括了唾液（斑）的相关内容。
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3、确证实验
（1）口腔黏膜脱落上皮细胞检查
（2）三氯化铁试验
（3）其它（抗腮腺素血清、发射光谱法、叠 氮钠法等）
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口腔粘膜脱落上皮细胞的检查
唾液中含有口腔粘膜脱落上皮细胞，将检
材用生理盐水充分浸泡，弃去载体，离心，
取沉淀物涂片，干燥后HE染色，显微镜下
检查。如发现口腔粘膜脱落上皮细胞，结
合淀粉酶试验阳性结果，可判断为唾液斑，
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4、个人识别
（1）唾液（斑）红细胞血型检测
（2）唾液（斑）多态性蛋白和酶的检测
（3）唾液（斑）的DNA分析 （4）唾液(斑)的性别鉴定
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中和试验（测定原理及方法与精斑类似） 免疫学方法：灵敏度高，适用于非分泌型和中 和试验阴性者，斑点ELISA、 ELISA-ABC等 其它方法：解离试验、混合凝集试验
性状：
无色、无味、接近中性（ph6.6-7.1）
分泌量：
正常成年人每日分泌唾液约1.0～1.5升，分泌量及性质受精神因 素、刺激的强度和性质及食物种类有关系。
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二、唾液的功能
便于吞咽 淀粉酶可水解淀粉及糖原，起到消化作用；
湿润口腔，调和润湿食物，使食物溶解并引起味觉，
防止口腔干燥，清除食物残渣，洁净口腔；其中硫
如同时查见食物残渣，则更支持此结论。
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三氯化铁试验
试验原理： 唾液中硫氰酸根离子在酸性条件下可与高 价铁离子反应生成红色络合物。 试验材料： 40%三氯化铁溶液，2.9M盐酸
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试验方法：
将一滴可疑唾液或唾液斑浸液滴于白瓷板凹 内，先加一滴2.9M 盐酸溶液，再加一滴 40%三氯化铁溶液，摇匀，观察结果 实验结果：
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物证检验结果：
(1) 龙某阴道拭子和外阴拭子均检出精斑，均为龙某男友曾 某所留； (2) 龙某口唇部擦拭物检出唾液斑成分，为龙某和曾某两人 混合； (3) 龙某右乳擦拭物检出唾液斑成分，为排除龙某男友曾某 外的另一名男性A所留； (4) 龙某左乳擦拭物检出唾液斑成分，为龙某、曾某和男性 A混合。 通过排查把目标锁定在案发后失踪的郭某身上。对郭某 暂住房进行勘查，提取地3枚烟蒂， 经DNA检验， 该3 枚烟蒂均为男性A所留。侦查人员成功抓获郭某，经检 验郭某与男性A基因型相同。
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2、现场发现可以痰迹或尸体皮肤及其他物体 上咬痕部位的可疑唾液斑，应用生理盐水 浸润的棉拭子或纱布，擦拭斑迹，再用干 棉拭子或纱布擦拭相同部位，晾干，该两 份提取物应装入同一物证袋晾干后包好， 备检（两步法擦拭）。 3、烟蒂、瓜子壳、果核均应用镊子提取，按 不同提取部位分别装入物证袋，做好标记。