提取方法整理

3.1实验材料

实验材料鳕鱼皮,威海荣成泰祥水产食品有限公司提供。去除鱼鳍、残肉、鱼鳞等杂物,控干于-20℃冷藏。胃蛋白酶(比活力1:3000)

3.2仪器与设备

S.HH.W21-420型三用电热恒温水浴锅；101A型干燥箱；

3.3实验方法

3.3.1原材料的预处理

鳕鱼皮解冻并用2%NaHCO3溶液浸泡20min,进一步去杂质及脂肪,清水漂净沥干,剪碎称重。

3.3.2鱼皮胶原蛋白的提取

将碎鱼皮分别按0.5：10，1：10，2：10的料液比分别匀浆15min,加入不同质量分数的胃蛋白酶,再匀浆10min,调pH至2.0,将匀浆后的料液置于37℃恒温酶解24h,沸水灭酶、灭菌20min,冷却后过滤得上清液,测羟脯氨酸含量,再乘以系数12.6即得胶原蛋白含量。记录数据，分析结果。

3.4实验结果

最佳蛋白酶用量的确定实验数据见表1。结果表明,当胃蛋白酶质量分数为1%(胃蛋白酶占鱼皮的百分数)时的提取效果最好。胃蛋白酶添加量为0.5%时,提取液中胶原蛋白含量以及胶原蛋白得率较低,说明蛋白酶的添加量不足,未将鱼皮中的胶原全部提出。而蛋白酶的添加量为1.5%时,提取液中的胶原蛋白含量以及胶原蛋白得率虽比蛋白酶添加量为1%时稍高,但酶的用量较大,且增加非胶原蛋白的含量。所以从纯度和经济方面考虑,1%的胃蛋

白酶添加量应为最佳选择。

2.2 最佳料、液比例的确定

实验分别选取1∶10,2∶10,3∶10,4∶10,5∶10,6∶10,7∶10,8∶10的料、液比以确定鱼皮胶原蛋白提取的最佳料液比(胃蛋白酶的质量分数为1%),结果见表2。

从表2可以看出,随着料、液比例的增加,提取液中胶原蛋白的含量也增加,但增加的幅度越来越小;随着料、液比例的增加,鱼皮中胶原蛋白的得率(胶原蛋白占所加新鲜干净湿鱼皮的百分数)越来越低。分析得出,料液比为1:10是最佳提取条件。

2.3 氨基酸组成分析

氨基酸组成分析结果见表3。从表3可看出,本法所得产品有着典型胶原蛋白氨基酸的组成。其中Gly含量最高,接近于氨基酸总和的1/3;Ala次之,约占1/9;Pro及Hyp总和低于1/6,这可能与材料有关。与陆生动物相比,水产类胶原蛋白有其自身的特点[1]。鱼明胶中的脯氨酸和羟脯氨酸的含量比动物明胶低得多,而蛋氨酸的含量却比动物明胶高得多。Glu,Asp,Arg,Ser等含量较高,His,Tyr,Met,Lys等含量较低,氨基酸的组成在一定程度上表明本产品为胶原蛋白,纯度较高。