实验七 水体铵态氮、亚硝态氮和硝态氮的测定

制作标准曲线及样品测定 取6支50 mL具塞比色管，分别按下表的量加入亚硝酸态氮标准使用 液（Vs ），加无氨纯水至标线，混匀
管号 1 0 0 2 0.010 0.50 3 0.020 1.00 4 0.040 2.00 5 0.080 4.00 6 水样 V水样
NO -N /（mg/L）
2
实验七 水体氨态氮、亚硝态氮 和硝态氮的测定
Nessler's reagent Spectrophotometric

一、氨态氮的测定—纳氏试剂法

实验目的 实验原理 实验仪器和试剂
主要操作步骤
结果与计算

结果分析
（一）实验目的

复习分光光度计的使用 学习其中一种比色法测定水中氨氮含量的 原理和操作方法
氨氮标准曲线（纳氏法） 2005.04.20
0.250 责任人：××× 测定条件： 22℃ 7230分光 420nm 10mm比色皿
0.200
淡水 海水
0.150
海水 A = 0.1937 ρ + 0.0028
0.100
R 2 = 0.9991 试剂空白A 0 = 0.008
淡水 A = 0.1866 ρ + 0.0029

制作标准曲线制作（由老师负责完成） 在 6个清洁、干燥的蒸发皿内分别移入硝酸盐氮标准使用液0、0.50、 1.00、2.00、3.00 、5.00 mL，以氢氧化钠溶液调节pH至微碱性 （pH≈8），置水浴上蒸发至干。
管号 ρ/(mg/L) VS /mL 1 0 0 2 0.20 1.00 3 0.40 2.00 4 0.60 3.00 5 0.80 4.00 6 1.00 5.00
VS /mL
分别加入1.0 mL磺胺溶液
混匀
分别加入1.0 mL 盐酸萘乙二胺溶液 混匀 显色15 min
543 nm处比色
溶液呈红色
（五）结果分析与计算
Determination of nitrate nitrogen -Spectrophotometric method with phenol disulfonic acid
A
0.050
R 2 = 0.999 试剂空白A 0 = 0.007
0.000 0.200 0.400 0.600 0.800 1.000 1.200 1.400
0.000
氨氮ρ /(mg/L)
二、亚硝酸态氮的测定
Spectrophotometric method with sulphanilamide and coupling with N-(1naphthyl)-ethylenediamine
♪ 酚二磺酸


瓷蒸发皿 水浴锅 玻璃漏斗 50 mL具塞比色管 分光光度计 比色皿等
♪ 氢氧化钠溶液
♪ 硝酸盐氮贮备标准溶液
♪ 硫酸银溶液
♪ EDTA二钠溶液 ♪ 氢氧化铝混悬液等
（四）主要操作步骤

样品预处理（凝聚法）
2 mL氢氧化铝悬浮液
200 mL水样
于250 mL锥形瓶
中性滤纸过滤
弃去最初滤出 的25 mL滤液
（一）实验目的

掌握水样预处理方法、亚硝酸氮的测定方 法以及同一养殖水体中亚硝酸氮与氨氮和 硝酸氮之间含量大小的关系。
（二）实验原理

在酸性介质中亚硝酸盐与磺胺进行重氮化反 应，其产物再与盐酸萘乙二胺偶合生成红色 偶氮染料，该染料在波长543 nm附近有最大 吸收。
（三）仪器与试材

仪器

混匀
加入1.0 mL纳氏试剂 混匀 显色10 min
420 nm处比色
溶液呈黄色
实验注意事项


本方法只能用于较清洁的水样，污水需采 用蒸馏发将氨分离收集后再加纳氏试剂比 色 鱼池水常有色且浑浊，多数是由于水中生 物或泥沙所造成，经Zn(OH)2 吸附处理后， 一般可用此法测定
（五）结果计算与分析
三、硝酸氮的测定-酚二磺酸比色法
（一）实验目的

了解养殖水体硝酸盐的垂直分布特点 掌握硝酸盐测定的方法——酚二磺酸法

（二）实验原理

硝酸盐在无水情况下与酚二磺酸反应，生 成黄色的硝基二磺酸酚，溶解后溶液在 410nm处吸光度与硝酸氮的含量呈线性关 系。
（三）仪器与试材

仪器


试剂

标准曲线及样品的制作与测定 取6支50 mL具塞比色管，分别按下表的量加入氨氮标准使用 液（Vs ），加无氨纯水至标线，混匀
管号
1பைடு நூலகம்0 0
2 0.40 2.00
3 0.80 4.00
4 1.20 6.00
5 2.00 10.00
6 水样 V水样
TNH -N /（mg/L）
3
VS /mL
加入1.0mL酒石酸钾钠溶液

试剂
♪ 磺胺溶液
分光光度计及配套比色皿 50mL具塞比色管 容量瓶 移液管
♪ 盐酸萘乙二胺溶液
♪ 亚硝酸盐氮贮备溶液
♪ 亚硝酸盐氮使用溶液
♪ 氢氧化铝悬浮液
（四）主要操作步骤

样品预处理（凝聚法）
2 mL氢氧化铝悬浮液
200 mL水样
于250 mL锥形瓶
中性滤纸过滤
弃去最初滤出 的25 mL滤液
（二）实验原理

纳氏试剂是碘化汞钾（K2HgI4）的强碱性溶液，它能与氨 氮反应生成棕色的难溶络合物，浓度很小时，在水中以胶 态形式存在，呈现为橙黄色。反应如下式所示：
（三）主要操作步骤

样品预处理（凝聚法）
弃去最初 滤出的25 mL滤液
2.0 mL硫酸锌溶液 200 mL水样 于250 mL锥形瓶 中性滤纸过滤 2~3滴NaOH溶液
冷却后加入 酚二磺酸试剂1.0 mL
再研磨一次 放置10 min
加10ml纯水
转移至比色管
410 nm处比色 溶液呈黄色
加3~4mL
氢氧化钠
定容至标线
所有实验组水样集中比色
（五）结果分析与计算
冷却后加入 酚二磺酸试剂1.0 mL
玻棒研磨
放置片刻
再研磨一次 放置10 min
加10ml纯水
410 nm处比色
转移至比色管
溶液呈黄色
定容至标线
加3~4mL
氢氧化钠

样品测定 将过滤后的水样50.0 mL置于干燥的蒸发皿内，以氢氧化 钠溶液调节pH至微碱性（pH≈8），置水浴上蒸发至干。
玻棒研磨 放置片刻