HPLC法测定柏栀祛湿洗液中绿原酸和黄芩苷的含量

HPLC法测定柏栀祛湿洗液中绿原酸和黄芩苷的含量

发表时间：2014-04-14T14:38:56.310Z 来源：《医药前沿》2014年第2期供稿作者：温昌泓1 左宏笛2

[导读] 柏栀祛湿洗液由黄柏、黄芩、大黄、栀子、金银花等20味药物组成，具有清热解毒、祛湿止带之功效。

温昌泓1 左宏笛2（通讯作者）

（1贵州省食品药品检验所贵州贵阳 550004）

（2贵阳市食品药品检验检测中心贵州贵阳 550004）

【摘要】目的建立测定柏栀祛湿洗液中绿原酸和黄芩苷含量的方法。方法采用高效液相色谱法。色谱柱为Hypersil ODS2C18柱，流动相为乙腈-0.4%磷酸水溶液(梯度洗脱)，流速为1.0ml/min，柱温为35℃，检测波长为318nm。结果绿原酸的进样量在0.06512～

0.5861μg范围内与其峰面积积分值呈良好的线性关系（r=1.000 0）；黄芩苷的进样量在0.1246～1.121μg范围内与其峰面积积分值呈良好的线性关系（r=1.000 0）；精密度、稳定性、重复性试验的RSD均≤1.6%。平均加样回收率：绿原酸为98.71%，RSD=1.2%（n=6），黄芩苷为102.84%，RSD=1.5%（n=6）。结论本方法便捷、准确、重复性好，适用于柏栀祛湿洗液的质量控制。

【关键词】柏栀祛湿洗液绿原酸黄芩苷高效液相色谱法含量测定

【中图分类号】R927.2 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2014）02-0343-02

柏栀祛湿洗液由黄柏、黄芩、大黄、栀子、金银花等20味药物组成，具有清热解毒、祛湿止带之功效，用于霉菌性阴道炎，滴虫性阴道炎证见带下量多，色黄，阴痒等的治疗，方中金银花具有清热解毒，疏散风热的功能，其中绿原酸为其主要有效成分，被证明具有抗菌、抗病毒等多种作用[1];黄芩具有清热燥湿，泻火解毒的功效，其中黄芩苷被发现具有抗菌、抗病毒等多种作用[2]。柏栀祛湿洗液现行标准[3]中无含量测定控制。为了更好有效地控制本品质量，保证临床用药安全、有效，本实验参考有关文献[4-7]，选用HPLC法对制剂中绿原酸和黄芩苷的含量测定研究，建立了分离效果好，便捷可行的含量测定方法，可用于该制剂的质量控制。

1 材料

1.1 仪器、

Agilent 1100型高效液相色谱仪(二极管阵列检测器)及其色谱工作站数据处理系统;XS205型双量程电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。

1.2 药品与试剂

绿原酸、黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110753-200012、715-200010，供含量测定用）；柏栀祛湿洗液（贵州浩诚药业有限公司，批号：20070601、20070602、20070603）：乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯，水为重蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性

色谱柱：Hypersil ODS2C18柱(4.6mm×200mm,5μm);流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0.4%磷酸水溶液,梯度洗脱程序见表1；流速：1.0ml/min;柱温：35℃；检测波长：318nm；进样量：10μl。在上述色谱条件下，样品中绿原酸色谱峰、黄芩苷色谱峰与其他成分的色谱峰能达到较好的基线分离，分离度大于1.5，理论板数以绿原酸峰和黄芩苷峰计算应不低于5000。

表1 梯度洗脱程序

Tab1 Gradient elution process

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品16.28mg、黄芩苷对照品15.57mg，分别置于100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得储备溶液（绿原酸浓度0.1628mg/ml,黄芩苷浓度0.1557mg/ml),并于10℃以下保存。分别精密量取上述对照品储备溶液10ml 与20ml，置于一50ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液（绿原酸浓度0.03256mg/ml,黄芩苷浓度0.06228mg/ml)。

2.2.2 供试品溶液的制备精密量取样品10ml,置50ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45?m）滤过，作为供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液的制备贵州浩诚药业有限公司提供，照“2.2.2”项下方法制备阴性对照溶液。

2.3 专属性试验

精密吸取上述对照品溶液、供试品溶液与阴性对照溶液各10μl，分别注入HPLC仪进样，记录色谱图。结果表明，供试品色谱中呈现与对照品色谱保留时间一致的色谱峰，阴性对照对测定无干扰。色谱见图1。

图1 高效液相色谱图

A．对照品；B.供试品；C.阴性对照(缺金银花);D.阴性对照(缺黄芩);1.绿原酸 2.黄芩苷

2.4 线性关系考察

分别精密吸取“2.2.1”项下的对照品溶液2、6、10、14、18μl，按“2.1”项下色谱条件进行测定。以进样量（x,μg）为横坐标，相应峰面积(y)为纵坐标，进行线性回归。得绿原酸回归方程Y=2719.28X-2.28（r=1.000 0），黄芩苷回归方程Y=2020.40X-2.47（r=1.000 0）。结果表明，绿原酸的进样量在0.06512～0.5861μg范围内与其峰面积积分值呈良好的线性关系，黄芩苷的进样量在0.1246～1.121μg范围内与其峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验

精密吸取“2.2.1”项下的对照品溶液适量，按“2.1”项下色谱条件进样重复测定6次。结果，绿原酸RSD=1.1%，黄芩苷RSD=1.4%，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

精密吸取“2.2.2”项下同一供试品溶液（批号：20070601）适量，按“2.1”项下色谱条件分别于配制后0,4,8,14,24,36h依次进样测定。结果，绿原酸峰面积与黄芩苷峰面积基本不变，RSD分别为1.6%和1.2%，表明供试品溶液在36h内基本稳定。

2.7 重复性试验

精密吸取同一批号样品（批号：20070601）适量，共6份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定和计算。结果，绿原酸平均含量为0.163mg/ml(RSD=1.5%),黄芩苷平均含0.290mg/ml(RSD=1.1%)，表明本方法重复性良好。

2.8 加样回收率试验

精密吸取已知含量的本品内容物5.00ml，共6份，分别置于50ml量瓶中，分别加入绿原酸对照品储备溶液5ml与黄芩苷对照品储备溶液10ml，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，并按“2.1”项下色谱条件进样测定，计算加样回收率，结果见表2、表3。

表2 绿原酸的加样回收率试验结果（n=6）

Tab2 Results of recovery tests of chlorogenic acid（n=6）

2.9 样品含量测定结果

分别取3批样品适量，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，并按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积，计算含量。结果见表4。表4 样品含量测定结果（n=3）

Tab4 Results of content determination of samples（n=3）