细胞生物学实验报告染色体的观察山东大学汇总
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0.9%的NaCl）洗去血污。
、放入装有1ml 0.3%KCl液的小烧杯中剪碎，至溶液呈乳白色，使细胞分散。
0.3%KCl液至4ml。
、37℃静置30分钟，进行低渗处理。（整个过程控制在50分钟内）1000 r/min
8分钟。弃上清液，加入2ml甲醇?冰醋酸固定液（3：1），并用吸管至管底
8分钟。
、镜检：低倍镜下寻找分散良好、染色适中的位于分裂中期的分裂相，高
山东大学实验报告 2016年 3月 17 日
郭雪飞 系年级 2014级生物基地班 同组者
细胞生物学 题目 染色体的标本制备、观察 学号201400140095
摔打过程中，细胞也有可能发生部分染色体被摔离的现象；
在倒置染色、清洗染液的过程中，部分染色体被洗掉；
染色过程中，有的染色体没有着色，无法观察到。
、自加入0.3%KCl始，至离心，整个过程应注意控制时间，尽量保持在
之内。低渗处理是为了使细胞变大易于观察，但低渗时间过长会使细
分裂前期：染色体凝集，间期细长、弥散分布的线性染色质，经过进一
折叠和包装等过程，逐渐变短变粗，形成光镜下可辨的早期染色体结
: 复制了的中心体分离，向
前中期：核膜崩解；纺锤体完成装配，前期星体的形成和向两极的运动
随着核膜的解体，由纺锤体两极发出的一些星体微管
中期：染色体排列在赤道板上，也是该实验的重点观察时期。
山东大学实验报告 2016年 3月 17 日
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细胞生物学 题目 染色体的标本制备、观察 学号201400140095
郭雪飞 系年级 2014级生物基地班 同组者
细胞生物学 题目 染色体的标本制备、观察 学号201400140095
Giemsa染液，这样，一可以节省染料，
三可以防止染色颗粒沉淀影响观察。在操作时应注意，
、在观察师兄师姐的装片时，发现有的染色体数目多于40条，有的少于
条，分析其原因可能是：
（1）染色体数目多于40
不同的细胞具体太近，染色体混合，导致数目过多；
细胞分布太密集，导致染色体与其他细胞的染色体上下重合，在显微
2）染色体数目少于40
吹打过程中，细胞轻微破裂，部分染色体流失；
。固定2～24h后分别在95％ 和85％乙醇中各30min ，再转入70%酒
4℃冰箱内保存，保存时间最好不超过二个月。
取固定好的各种植物根尖，倒去固定液，用蒸馏水漂洗
～3次，放入1N HCl溶液中60℃水解8～12min，再用蒸馏水洗净。适度的水
用吸管小心吸去解离液，用蒸馏水慢慢冲洗3～5次，最后
6）猫叫综合征（5P-综合征）
5号染色体短臂部分或全部缺失。表型特征有：婴儿时期哭
4P-综合征类似5P-综合
7）费城染色体（Ph''）
Philadelphia）而命名。系其22号染色体部分长臂接到
号染色体长臂的一种易位。为慢性粒细胞白血病可见到的特殊的染色体异常，
这也是恶性细胞染色体变异中唯一已被公
、秋水仙素抑制细胞分裂的原理是什么？
然后细胞中间自动形成细胞
山东大学实验报告 2016年 3月 17 日
郭雪飞 系年级 2014级生物基地班 同组者
细胞生物学 题目 染色体的标本制备、观察 学号201400140095
3）克氏综合征（Klinefelter Syndrome）
47+XXY。表型特征有睾丸
在新生活婴中的发生率是1.4～2.9%，是男性不育症中常见的一种。
4）爱德华综合征Edwards
18三体。表型特征有智力低下、小头、前额窄、枕部突、
5）帕陶综合征
13三体。表型特征中有中枢神经系统发育缺陷，呈前脑无
个
个
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郭雪飞 系年级 2014级生物基地班 同组者
细胞生物学 题目 染色体的标本制备、观察 学号201400140095
针对多种染色体疾病的医疗手段还不完善，但是染色体疾病作为一种
可以通过优生手段进行预防。比如：对娩出过染色体病患儿
注意环境保护，加强
山东大学实验报告 2016年 3月 17 日
郭雪飞 系年级 2014级生物基地班 同组者
、破碎睾丸时，可先加入少量KCl，方便剪碎。破碎差不多后再加入剩下的
，先加入的KCL量一定要少，否则不易剪碎。
、操作过程中应注意动作不可过大，因为低渗处理的细胞体积变大，更易
、滴片前应尽量轻轻混匀悬液，使细胞分开。
、滴片时，应保证玻片在低温状态下。
、采用倒置染色法，可以防止染液蒸发，同时使染色更加均匀。
、在自己制片中，没有明显的呈现出“V”或“U”形的染色体集合，有的是蓝
1）离心过程中，离心速度过快，导致细胞紧密的黏在一起，很难吹散。
2）在吹散细胞的过程中，力度太大，导致细胞破裂，染色体流出。
3）在摔碎细胞时，滴加高度太小，细胞没有摔碎。
4）在桌面上敲打细胞时，力度太小，仍有细胞没有破裂。
20~30min左右。
染色 将根尖放在载玻片中央，用刀片将根冠和伸长区切除，只留玻片上面铺上吸水纸，固定好盖玻片，用拇指垂直压片，
先在低倍镜下观察染色和细胞分散的情况，后用油镜（滴
不经过秋水仙素进行预处理这一步，其他的步骤相同。观察
个
40个
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细胞生物学 题目 染色体的标本制备、观察 学号201400140095
一般常用秋水仙素，这此方法对于动物的核型分析
、睾丸
初级精母细胞、次级精母细胞、精子细
取睾丸将曲细精管内的细胞冲出后固定，然后制片染
可以观察到动物生殖细胞减数分裂染色体的不同时相。如果提前给动物腹腔
可以抑制生殖细胞的正常分裂，增加中期分裂相细胞的数目，
、倒置染色法
山东大学实验报告 2016年 3月 17 日
、熟悉动物生殖细胞减数分裂过程及各个时期特点。
、掌握小鼠睾丸减数分裂标本的制作方法。
、学习染色体的染色和观察过程。
、染色体
染色体是细胞内具有遗传性质的遗传物质深度压缩形成的聚合体，易被
。染色体的分析往往是选择细胞处
、细胞分裂及其观察
细胞的有丝分裂可以大体分为五个阶段：前期、前中期、中期、后期、
纺锤丝的合成被抑制，尤其是动粒微管被破坏。在后期染
、染色体相关疾病
（1）21三体综合征（又称先天愚型或唐氏综合征）
47。主要临床特征是智力低下，发育迟缓，宽眼距，外
，拇趾球区胫侧弓状纹，某些患者伴有先天性心脏病。
2）特纳氏综合症（Turner）
45+X，少数是嵌合体，出
1/2500～1/5000。身材矮小，原发性闭经，性幼稚，蹼颈，后发际低，宽乳
、再以800～1000 r/min离心8分钟。弃上清液，加1ml固定液，再制成
5分钟。
、取洁净的低温预冷载玻片，距载片10～15cm高度滴下2～3滴细胞悬液
，从载玻片一边向另一边轻轻吹气，并同时轻轻敲打载片，以使
、将玻片放置在标本盒中空气干燥。
、染色：倒置染色法用 Giemsa液染色20 ～ 30分钟，细水冲洗玻片背面，
、固定的目的是什么？
1）迅速防止细胞死亡后的变化，如自溶、腐败等，尽量保持生长状态结
2）使细胞中的蛋白质、脂肪等成分转变为不溶性物质，以保持生前的形
3）使组织内各种物质成分产生不同的折光率，便于观察和鉴定；
4）使不同组织成分对燃料有不同的亲和力。便于染色；
5）防止细胞过度收缩或膨胀，失去原有的形态结构。
细胞生物学 题目 染色体的标本制备、观察 学号201400140095
开展遗传咨询、积极推行优生法，做好婚姻和生育的医药遗传
、植物细胞染色体观察方法
（1）实验植物和试剂
0.02%秋水仙素；改良苯酚品红染液；卡诺氏固定液，1N
70%酒精；95％乙醇；85％乙醇；蒸馏水
后期：姐妹染色单体分离并向细胞两极移动。后期A，动粒微管变短，
B，极微管长度增加，两极之间的距离逐渐拉长。
末期：：两子细胞核形成，染色体去浓缩，核膜重建，核仁重现。
在正常动物体内，骨髓和睾丸是处于不断分裂的组织。给动物注射一定
然后采用常规空气干燥
即可得到大量可分析的染色体标本。在动物实验时，可在取材前
、材料
周龄，20~30g的雄性小鼠
、试剂
1）0.85%氯化钠溶液
2）0.02%秋水仙素溶液，4℃保存
3）0.4%KCl溶液
4）卡诺氏固定液 无水乙醇：无水乙酸=3:1
5）1/15 mol/L的磷酸缓冲液（pH=6.8）
6）Giemsa 染液
、器材
、取雄性小鼠以每克体重4μｇ注射秋水仙素，经14～16小时后，断头法
2）实验方法和步骤
先将大蒜浸泡若干小时，然后转入一个垫有湿润滤纸的培养皿
置25℃恒温培养箱中萌发，待幼根长至1~2cm时，于上午9~11时剪下根尖。
将剪下的根尖放进装有0.02%秋水仙素溶液的烧杯中，浸泡
3～4小时。
将经过预处理或没有预处理的材料，放到卡诺氏固定液中固定
10倍，要求一个容器中所装的材料不能太多，温度不
、放入装有1ml 0.3%KCl液的小烧杯中剪碎，至溶液呈乳白色，使细胞分散。
0.3%KCl液至4ml。
、37℃静置30分钟，进行低渗处理。（整个过程控制在50分钟内）1000 r/min
8分钟。弃上清液，加入2ml甲醇?冰醋酸固定液（3：1），并用吸管至管底
8分钟。
、镜检：低倍镜下寻找分散良好、染色适中的位于分裂中期的分裂相，高
山东大学实验报告 2016年 3月 17 日
郭雪飞 系年级 2014级生物基地班 同组者
细胞生物学 题目 染色体的标本制备、观察 学号201400140095
摔打过程中，细胞也有可能发生部分染色体被摔离的现象；
在倒置染色、清洗染液的过程中，部分染色体被洗掉；
染色过程中，有的染色体没有着色，无法观察到。
、自加入0.3%KCl始，至离心，整个过程应注意控制时间，尽量保持在
之内。低渗处理是为了使细胞变大易于观察，但低渗时间过长会使细
分裂前期：染色体凝集，间期细长、弥散分布的线性染色质，经过进一
折叠和包装等过程，逐渐变短变粗，形成光镜下可辨的早期染色体结
: 复制了的中心体分离，向
前中期：核膜崩解；纺锤体完成装配，前期星体的形成和向两极的运动
随着核膜的解体，由纺锤体两极发出的一些星体微管
中期：染色体排列在赤道板上，也是该实验的重点观察时期。
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郭雪飞 系年级 2014级生物基地班 同组者
细胞生物学 题目 染色体的标本制备、观察 学号201400140095
郭雪飞 系年级 2014级生物基地班 同组者
细胞生物学 题目 染色体的标本制备、观察 学号201400140095
Giemsa染液，这样，一可以节省染料，
三可以防止染色颗粒沉淀影响观察。在操作时应注意，
、在观察师兄师姐的装片时，发现有的染色体数目多于40条，有的少于
条，分析其原因可能是：
（1）染色体数目多于40
不同的细胞具体太近，染色体混合，导致数目过多；
细胞分布太密集，导致染色体与其他细胞的染色体上下重合，在显微
2）染色体数目少于40
吹打过程中，细胞轻微破裂，部分染色体流失；
。固定2～24h后分别在95％ 和85％乙醇中各30min ，再转入70%酒
4℃冰箱内保存，保存时间最好不超过二个月。
取固定好的各种植物根尖，倒去固定液，用蒸馏水漂洗
～3次，放入1N HCl溶液中60℃水解8～12min，再用蒸馏水洗净。适度的水
用吸管小心吸去解离液，用蒸馏水慢慢冲洗3～5次，最后
6）猫叫综合征（5P-综合征）
5号染色体短臂部分或全部缺失。表型特征有：婴儿时期哭
4P-综合征类似5P-综合
7）费城染色体（Ph''）
Philadelphia）而命名。系其22号染色体部分长臂接到
号染色体长臂的一种易位。为慢性粒细胞白血病可见到的特殊的染色体异常，
这也是恶性细胞染色体变异中唯一已被公
、秋水仙素抑制细胞分裂的原理是什么？
然后细胞中间自动形成细胞
山东大学实验报告 2016年 3月 17 日
郭雪飞 系年级 2014级生物基地班 同组者
细胞生物学 题目 染色体的标本制备、观察 学号201400140095
3）克氏综合征（Klinefelter Syndrome）
47+XXY。表型特征有睾丸
在新生活婴中的发生率是1.4～2.9%，是男性不育症中常见的一种。
4）爱德华综合征Edwards
18三体。表型特征有智力低下、小头、前额窄、枕部突、
5）帕陶综合征
13三体。表型特征中有中枢神经系统发育缺陷，呈前脑无
个
个
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郭雪飞 系年级 2014级生物基地班 同组者
细胞生物学 题目 染色体的标本制备、观察 学号201400140095
针对多种染色体疾病的医疗手段还不完善，但是染色体疾病作为一种
可以通过优生手段进行预防。比如：对娩出过染色体病患儿
注意环境保护，加强
山东大学实验报告 2016年 3月 17 日
郭雪飞 系年级 2014级生物基地班 同组者
、破碎睾丸时，可先加入少量KCl，方便剪碎。破碎差不多后再加入剩下的
，先加入的KCL量一定要少，否则不易剪碎。
、操作过程中应注意动作不可过大，因为低渗处理的细胞体积变大，更易
、滴片前应尽量轻轻混匀悬液，使细胞分开。
、滴片时，应保证玻片在低温状态下。
、采用倒置染色法，可以防止染液蒸发，同时使染色更加均匀。
、在自己制片中，没有明显的呈现出“V”或“U”形的染色体集合，有的是蓝
1）离心过程中，离心速度过快，导致细胞紧密的黏在一起，很难吹散。
2）在吹散细胞的过程中，力度太大，导致细胞破裂，染色体流出。
3）在摔碎细胞时，滴加高度太小，细胞没有摔碎。
4）在桌面上敲打细胞时，力度太小，仍有细胞没有破裂。
20~30min左右。
染色 将根尖放在载玻片中央，用刀片将根冠和伸长区切除，只留玻片上面铺上吸水纸，固定好盖玻片，用拇指垂直压片，
先在低倍镜下观察染色和细胞分散的情况，后用油镜（滴
不经过秋水仙素进行预处理这一步，其他的步骤相同。观察
个
40个
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郭雪飞 系年级 2014级生物基地班 同组者
细胞生物学 题目 染色体的标本制备、观察 学号201400140095
一般常用秋水仙素，这此方法对于动物的核型分析
、睾丸
初级精母细胞、次级精母细胞、精子细
取睾丸将曲细精管内的细胞冲出后固定，然后制片染
可以观察到动物生殖细胞减数分裂染色体的不同时相。如果提前给动物腹腔
可以抑制生殖细胞的正常分裂，增加中期分裂相细胞的数目，
、倒置染色法
山东大学实验报告 2016年 3月 17 日
、熟悉动物生殖细胞减数分裂过程及各个时期特点。
、掌握小鼠睾丸减数分裂标本的制作方法。
、学习染色体的染色和观察过程。
、染色体
染色体是细胞内具有遗传性质的遗传物质深度压缩形成的聚合体，易被
。染色体的分析往往是选择细胞处
、细胞分裂及其观察
细胞的有丝分裂可以大体分为五个阶段：前期、前中期、中期、后期、
纺锤丝的合成被抑制，尤其是动粒微管被破坏。在后期染
、染色体相关疾病
（1）21三体综合征（又称先天愚型或唐氏综合征）
47。主要临床特征是智力低下，发育迟缓，宽眼距，外
，拇趾球区胫侧弓状纹，某些患者伴有先天性心脏病。
2）特纳氏综合症（Turner）
45+X，少数是嵌合体，出
1/2500～1/5000。身材矮小，原发性闭经，性幼稚，蹼颈，后发际低，宽乳
、再以800～1000 r/min离心8分钟。弃上清液，加1ml固定液，再制成
5分钟。
、取洁净的低温预冷载玻片，距载片10～15cm高度滴下2～3滴细胞悬液
，从载玻片一边向另一边轻轻吹气，并同时轻轻敲打载片，以使
、将玻片放置在标本盒中空气干燥。
、染色：倒置染色法用 Giemsa液染色20 ～ 30分钟，细水冲洗玻片背面，
、固定的目的是什么？
1）迅速防止细胞死亡后的变化，如自溶、腐败等，尽量保持生长状态结
2）使细胞中的蛋白质、脂肪等成分转变为不溶性物质，以保持生前的形
3）使组织内各种物质成分产生不同的折光率，便于观察和鉴定；
4）使不同组织成分对燃料有不同的亲和力。便于染色；
5）防止细胞过度收缩或膨胀，失去原有的形态结构。
细胞生物学 题目 染色体的标本制备、观察 学号201400140095
开展遗传咨询、积极推行优生法，做好婚姻和生育的医药遗传
、植物细胞染色体观察方法
（1）实验植物和试剂
0.02%秋水仙素；改良苯酚品红染液；卡诺氏固定液，1N
70%酒精；95％乙醇；85％乙醇；蒸馏水
后期：姐妹染色单体分离并向细胞两极移动。后期A，动粒微管变短，
B，极微管长度增加，两极之间的距离逐渐拉长。
末期：：两子细胞核形成，染色体去浓缩，核膜重建，核仁重现。
在正常动物体内，骨髓和睾丸是处于不断分裂的组织。给动物注射一定
然后采用常规空气干燥
即可得到大量可分析的染色体标本。在动物实验时，可在取材前
、材料
周龄，20~30g的雄性小鼠
、试剂
1）0.85%氯化钠溶液
2）0.02%秋水仙素溶液，4℃保存
3）0.4%KCl溶液
4）卡诺氏固定液 无水乙醇：无水乙酸=3:1
5）1/15 mol/L的磷酸缓冲液（pH=6.8）
6）Giemsa 染液
、器材
、取雄性小鼠以每克体重4μｇ注射秋水仙素，经14～16小时后，断头法
2）实验方法和步骤
先将大蒜浸泡若干小时，然后转入一个垫有湿润滤纸的培养皿
置25℃恒温培养箱中萌发，待幼根长至1~2cm时，于上午9~11时剪下根尖。
将剪下的根尖放进装有0.02%秋水仙素溶液的烧杯中，浸泡
3～4小时。
将经过预处理或没有预处理的材料，放到卡诺氏固定液中固定
10倍，要求一个容器中所装的材料不能太多，温度不