体外评价体系介绍
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抗衰老是国内外美容皮肤病学研究的热门主题，对于抗衰老作用的 评价，本实验室采用国际通用综合评价模式（体外评价+人体评价）。 在体外对被检物质的抗衰老效果进行评价，取得的评估结果可为人体评 价提供参考依据。
评价平台： 正常人体表皮角质形成细胞 正常人体皮肤成纤维细胞 化学反应检测
① 促进胶原蛋白合成作用评价
3、细胞毒性评价
向细胞添加被检物质，确认其对细胞的 损伤情况，判断其毒性作用。
兔角膜细胞SIRC
4、光毒性评价（UV照射） 对经过被检物质处理过的BALB/c 3T3小鼠成纤维细胞进行
UVA照射后，以细胞摄取中性红为指标测算出细胞存活率，确 定50%细胞毒性的被检物质浓度（TC50）。
通过UVA（+）、UVA（-）照射时的TC50应用下列公式计算 出PIF值（Photo Irritant Factor）、MPE值可对被检物质的 光毒性潜能进行评价。可以对单一成分和成品进行评价。
胶原酶是一种能水解胶原蛋白的三维螺旋结构的分解酶。体内胶原酶 会随年龄的增加以及外界环境的作用下，促进其活性的增加，从而加速其 对胶原蛋白的分解，破坏皮肤结构，出现皱纹、皮肤松弛等皮肤衰老迹象。
让胶原酶与添加了被检物质的胶原蛋白反应，测定胶原蛋白的分解程 度，通过实验结果分析被检物质是否具有阻碍胶原酶活性增加的作用，评 估被检物质的衰老作用。
2、抗衰老作用评价
皮肤的衰老通常分为内在性老化和外源性老化。
内在性老化见于暴露和非暴露部位，明显的特征为皱纹和皮肤松弛， 表现为表皮、真皮变薄，表皮真皮连接处变平、弹性纤维和胶原纤维减 少等情况。外源性老化主要发生在皮肤内在性老化的基础上，常由紫外 线等引起，见于面部、颈脖和前臂等光暴露部位，表现为粗深的皱纹、 异常的色素沉着、毛细血管扩张等。
④促进玻尿酸合成作用评价
玻尿酸是一种高分子的多醣体，是由葡萄醛酸-N-乙酸氨基葡萄 糖为双糖分子单位组成的直链高分子多醣，平均分子量介于10万到 1000万Dalton之间，存在于人体皮肤组织中，填充在细胞与胶原纤 维的空间中。具有保持皮肤弹性功能，锁住大量水分子，对组织具 有保湿润滑作用，使肌肤饱满年轻有弹性。
③ 弹性蛋白酶阻碍作用
弹性蛋白酶作用是分解维持肌肤张力的弹性蛋白。随着年龄增 加、过多活性氧的堆积促进弹性蛋白酶分解弹性蛋白，是形成皮肤 衰老的因素之一。因此，阻碍弹性蛋白酶活性，可恢复肌肤张力， 起到抗衰老的作用。
让弹性蛋白酶与添加了被检物质的弹性蛋白反应，测定弹性蛋 白的分解程度，通过实验结果分析被检物质是否具有阻碍弹性蛋白 酶活性增加的作用，评估被检物质的衰老作用。
美白是指抑制由紫外线照射所生成的黑色素，防止色斑的产生， 恢复肌肤Βιβλιοθήκη Baidu原本色泽。黑色素是存在于人体皮肤基底层，在紫外线照 射下会产生变化，生成一种保护皮肤的物质，然后黑色素又经细胞代 谢，逐步到达肌肤表皮层，形成色斑和色素沉淀等问题。
人体皮肤细胞中氧化应激作用的形成原因 ① 紫外线照射（UVA、UVB） ② 过多活性氧的累计（ • OH 、O2-• 、H2O2、1O2 ） ③ 过氧化脂质（氧自由基与多聚不饱和脂肪酸反应的产物 ）
抗氧化应激作用的评价
评价方法： 对细胞进行氧化应激刺激，添加被检物质，通过对细胞生存
率的分析来评估被检物质对氧化应激作用的预防与治疗作用。
化妆品检验中心 体外评价体系简介
体外评价
体外评价是指在活生物体之外的环境中利用细胞、模拟活生物体 模型等平台进行的评价。
在生物评价领域中，体外评价具有以下方面的特点 1、符合“3Rs”原则（Reduction，Refinement、Replacement） 2、检测结果的稳定性好、再现性高 3、可为临床评价提供有效的技术支持
但随着老化及年龄的增长，玻尿酸流失速度比生长速度快时， 肌肤也逐渐变得缺乏水分，失去光泽弹性，出现皱纹等老化现象。
本评价项目，通过向人体皮肤成纤维细胞或人体表皮角质形成 细胞添加被检物质后，测定细胞内玻尿酸合成量（ELISA法），根据 结果评定被检物质是否具有促进玻尿酸合成的作用。
3、美白作用评价
评价项目：
评价消除由下列因素诱发的氧化应激作用的效果
① UVA、UVB照射 ② 抗活性氧（ • OH 、O2-• 、H2O2、1O2 ） ③ 过氧化脂质
评价平台： 正常人体表皮角质形成细胞 正常人体皮肤成纤维细胞
被检物质添加时间点： 氧化应激刺激前 氧化应激刺激中 氧化应激刺激后
角质形成细胞
成纤维细胞
UVA (-)
UVA (+)
样品浓度增加 细胞生存率降低
功效性评价项目
1、抗氧化应激作用评价
氧化应激（Oxidative Stress，OS）是指破坏了强氧化剂和抗氧 化剂的平衡导致的潜在伤害，氧化剂、抗氧化剂平衡的破坏是细胞损 伤的主要原因。
皮肤作为机体最外层的保护层，不可避免的受到紫外线与刺激物 的作用，使皮肤细胞内的活性氧（Reactive Oxygen Species, ROS ） 过多增加，诱发氧化 应激作用，成为引起人体细胞老化的潜在因素。
对被检物质是否能提高人体皮肤成纤维细胞的1型胶原蛋白合成作用 进行评价。伴随年龄的增加及外界环境的影响，皮肤内的1型胶原蛋白含 量会减少，从而形成皱纹和皮肤松弛。本评价项目，通过向人体皮肤成 纤维细胞添加被检物质后，测定细胞内1型胶原蛋白合成量（ELISA法）， 根据结果评定被检物质是否具有促进胶原蛋白合成的作用。
表皮 基底层
真皮
皮肤基底层附近胶原蛋白示意图
4型胶原蛋白 7型胶原蛋白 1型胶原蛋白
1型胶原蛋白：存在于真皮的细胞外基质中，形成三股螺旋结构 4型胶原蛋白：多数存在于真皮与表皮之间的基底层中，起到支撑基底层结构的作用 7型胶原蛋白：以环状结构与基底层相连接，维持真皮基质的结构
② 胶原酶活性阻碍作用
体外评价体系的构成
1
评价项目的确立
2
评价内容的分析
3
评价方案的建立
4
最佳评价平台及方法的筛选
5
6
安全性评价 功效性评价
7
评价结果
安全性评价项目
1、刺激性评价
作为动物刺激性实验的代替法，使用 3T3细胞分析评价被检物质的毒性指标。
2、眼粘膜刺激性评价
向兔角膜细胞SIRC 添加被检物质，确 认刺激性效果，再与标准品对比进行刺激性 强度的评价
评价平台： 正常人体表皮角质形成细胞 正常人体皮肤成纤维细胞 化学反应检测
① 促进胶原蛋白合成作用评价
3、细胞毒性评价
向细胞添加被检物质，确认其对细胞的 损伤情况，判断其毒性作用。
兔角膜细胞SIRC
4、光毒性评价（UV照射） 对经过被检物质处理过的BALB/c 3T3小鼠成纤维细胞进行
UVA照射后，以细胞摄取中性红为指标测算出细胞存活率，确 定50%细胞毒性的被检物质浓度（TC50）。
通过UVA（+）、UVA（-）照射时的TC50应用下列公式计算 出PIF值（Photo Irritant Factor）、MPE值可对被检物质的 光毒性潜能进行评价。可以对单一成分和成品进行评价。
胶原酶是一种能水解胶原蛋白的三维螺旋结构的分解酶。体内胶原酶 会随年龄的增加以及外界环境的作用下，促进其活性的增加，从而加速其 对胶原蛋白的分解，破坏皮肤结构，出现皱纹、皮肤松弛等皮肤衰老迹象。
让胶原酶与添加了被检物质的胶原蛋白反应，测定胶原蛋白的分解程 度，通过实验结果分析被检物质是否具有阻碍胶原酶活性增加的作用，评 估被检物质的衰老作用。
2、抗衰老作用评价
皮肤的衰老通常分为内在性老化和外源性老化。
内在性老化见于暴露和非暴露部位，明显的特征为皱纹和皮肤松弛， 表现为表皮、真皮变薄，表皮真皮连接处变平、弹性纤维和胶原纤维减 少等情况。外源性老化主要发生在皮肤内在性老化的基础上，常由紫外 线等引起，见于面部、颈脖和前臂等光暴露部位，表现为粗深的皱纹、 异常的色素沉着、毛细血管扩张等。
④促进玻尿酸合成作用评价
玻尿酸是一种高分子的多醣体，是由葡萄醛酸-N-乙酸氨基葡萄 糖为双糖分子单位组成的直链高分子多醣，平均分子量介于10万到 1000万Dalton之间，存在于人体皮肤组织中，填充在细胞与胶原纤 维的空间中。具有保持皮肤弹性功能，锁住大量水分子，对组织具 有保湿润滑作用，使肌肤饱满年轻有弹性。
③ 弹性蛋白酶阻碍作用
弹性蛋白酶作用是分解维持肌肤张力的弹性蛋白。随着年龄增 加、过多活性氧的堆积促进弹性蛋白酶分解弹性蛋白，是形成皮肤 衰老的因素之一。因此，阻碍弹性蛋白酶活性，可恢复肌肤张力， 起到抗衰老的作用。
让弹性蛋白酶与添加了被检物质的弹性蛋白反应，测定弹性蛋 白的分解程度，通过实验结果分析被检物质是否具有阻碍弹性蛋白 酶活性增加的作用，评估被检物质的衰老作用。
美白是指抑制由紫外线照射所生成的黑色素，防止色斑的产生， 恢复肌肤Βιβλιοθήκη Baidu原本色泽。黑色素是存在于人体皮肤基底层，在紫外线照 射下会产生变化，生成一种保护皮肤的物质，然后黑色素又经细胞代 谢，逐步到达肌肤表皮层，形成色斑和色素沉淀等问题。
人体皮肤细胞中氧化应激作用的形成原因 ① 紫外线照射（UVA、UVB） ② 过多活性氧的累计（ • OH 、O2-• 、H2O2、1O2 ） ③ 过氧化脂质（氧自由基与多聚不饱和脂肪酸反应的产物 ）
抗氧化应激作用的评价
评价方法： 对细胞进行氧化应激刺激，添加被检物质，通过对细胞生存
率的分析来评估被检物质对氧化应激作用的预防与治疗作用。
化妆品检验中心 体外评价体系简介
体外评价
体外评价是指在活生物体之外的环境中利用细胞、模拟活生物体 模型等平台进行的评价。
在生物评价领域中，体外评价具有以下方面的特点 1、符合“3Rs”原则（Reduction，Refinement、Replacement） 2、检测结果的稳定性好、再现性高 3、可为临床评价提供有效的技术支持
但随着老化及年龄的增长，玻尿酸流失速度比生长速度快时， 肌肤也逐渐变得缺乏水分，失去光泽弹性，出现皱纹等老化现象。
本评价项目，通过向人体皮肤成纤维细胞或人体表皮角质形成 细胞添加被检物质后，测定细胞内玻尿酸合成量（ELISA法），根据 结果评定被检物质是否具有促进玻尿酸合成的作用。
3、美白作用评价
评价项目：
评价消除由下列因素诱发的氧化应激作用的效果
① UVA、UVB照射 ② 抗活性氧（ • OH 、O2-• 、H2O2、1O2 ） ③ 过氧化脂质
评价平台： 正常人体表皮角质形成细胞 正常人体皮肤成纤维细胞
被检物质添加时间点： 氧化应激刺激前 氧化应激刺激中 氧化应激刺激后
角质形成细胞
成纤维细胞
UVA (-)
UVA (+)
样品浓度增加 细胞生存率降低
功效性评价项目
1、抗氧化应激作用评价
氧化应激（Oxidative Stress，OS）是指破坏了强氧化剂和抗氧 化剂的平衡导致的潜在伤害，氧化剂、抗氧化剂平衡的破坏是细胞损 伤的主要原因。
皮肤作为机体最外层的保护层，不可避免的受到紫外线与刺激物 的作用，使皮肤细胞内的活性氧（Reactive Oxygen Species, ROS ） 过多增加，诱发氧化 应激作用，成为引起人体细胞老化的潜在因素。
对被检物质是否能提高人体皮肤成纤维细胞的1型胶原蛋白合成作用 进行评价。伴随年龄的增加及外界环境的影响，皮肤内的1型胶原蛋白含 量会减少，从而形成皱纹和皮肤松弛。本评价项目，通过向人体皮肤成 纤维细胞添加被检物质后，测定细胞内1型胶原蛋白合成量（ELISA法）， 根据结果评定被检物质是否具有促进胶原蛋白合成的作用。
表皮 基底层
真皮
皮肤基底层附近胶原蛋白示意图
4型胶原蛋白 7型胶原蛋白 1型胶原蛋白
1型胶原蛋白：存在于真皮的细胞外基质中，形成三股螺旋结构 4型胶原蛋白：多数存在于真皮与表皮之间的基底层中，起到支撑基底层结构的作用 7型胶原蛋白：以环状结构与基底层相连接，维持真皮基质的结构
② 胶原酶活性阻碍作用
体外评价体系的构成
1
评价项目的确立
2
评价内容的分析
3
评价方案的建立
4
最佳评价平台及方法的筛选
5
6
安全性评价 功效性评价
7
评价结果
安全性评价项目
1、刺激性评价
作为动物刺激性实验的代替法，使用 3T3细胞分析评价被检物质的毒性指标。
2、眼粘膜刺激性评价
向兔角膜细胞SIRC 添加被检物质，确 认刺激性效果，再与标准品对比进行刺激性 强度的评价