液相色谱仪PPT课件

低压梯度是溶剂在常压下混合，然后用一个高压输液泵把它输送至柱系 统中。多元溶剂在混合室或溶剂罐中混合，并以一定速度改变溶剂的组 成。这种方式简单、经济，只能用往复泵。高压梯度使用两台高压输液 泵，每台输送一种溶剂，两台泵输出的溶剂在一个混合室内混合。每台 泵的溶剂流量由独立的电路或计算机控制，它们按一定比例改变。
3、柱子的柱效（以理论板数计）很高，每米可达3万块以上。 一般只使用20～25cm长的柱子。由于填料的不断发展和 改 进 ， 目 前 最 短 的 柱 子 只 有 3 cm 长 ， 板 数 可 达 3 0 0 0 ～ 4000。已能够满足一般分析的需要，并具有很高的分析速 度。
4、高效液相色谱仪通常在室温下操作，样品一般不须预处理， 操作简便，很容易掌握。
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二、高效液相色谱系统
下图是高效液相色谱系统的示意图。
它由输液泵为核心的输液系统、进样器、柱子和检测器四个基本 部分组成。实际仪器比图要复杂得多，它们可能有几个泵，几种 检测器，自动进样系统，柱和检测器的温度控制系统等。
1、 输液系统
输液系统的作用是向柱子提供压力高，流速稳定的流动相。它以高压输液 泵为核心，由溶剂储槽、过滤器、输液泵、梯度溶剂混合器等组成。为了 测量系统流量和压力，在输液系统的输出通路上还安装了不同类型的传感 元件。
•5、高效液相色谱操作的难点在于流动相的选择。可以采用 纯溶剂，二元或多元混合溶剂作流动相。但流动相的选择必 须遵循一定的规律，并以科学的方法优选。
•6、高效液相色谱技术也存在一些问题。柱子价格昂贵，要 消耗大量的溶剂，而且许多溶剂对人体是有害的。高效液相 色谱仪的价格和损耗也比气相色谱仪高。此外，尚缺少象气 相色谱中氢火焰离子化检测器那样的通用型、高灵敏度的检 测手段。因此，高效液相色谱无论在技术上，在理论上，还 是在应用上都处于发展阶段。
对于梯度系统系统来说，关键是要保证流速的稳定，梯度洗脱洗脱重现 性好。因此混合室的体积应尽可能地小，且不存在死角。
进样装置
在液相色谱中，进样方式有微量注射器进样，进样阀 进样，自动进样装置等。高效液相色谱最主要的特点 要求进样器设计要耐高压，死体积小，与溶剂接触的 部分具有很好的耐蚀性。
进样口处的隔垫把系统和外界分开。为了使隔垫能承 受上百公斤的压力，顶盖的通孔很细，而且长。在系 统处于高压时，用一根金属棒压住隔垫的通孔部分， 避免内部压力太大把隔垫冲破。液相色谱的进样口目 前大部分都是采用六通阀，六通阀进样的原理如图所 示。
液 相 色谱
高效液相色谱法
液相色谱是色谱中的一类分离与分析技术，其 特点是以液体作为流动相。对于大量有机化合物、 离子型化合物以及易受热分解或失去活性的物质， 不能直接或不适合用气相色谱方法进行分析，因此 高效液相色谱的应用领域不断扩大和深入。特别是 近几十年来，液相色谱固定相的高度发展，仪器不 断更新，高效液相色谱目前已成为许多学科科学研 究和日常分析的重要手段。
高效液相色谱仪中所用的泵可分为两类：恒压泵和 恒流泵。恒压泵主要指气动放大泵，泵出口压力在 系统中是恒定的，流速由柱的阻力决定。恒流泵有 往复泵和注射泵，这类泵输出的溶剂流量恒定，柱 前的压力由柱后的阻力确定。目前使用最多的是往 复泵。
•④梯度洗脱装置
•当样品是一个含有不同种类组分的复杂混合物时，通常用一 种纯的或固定组成的混合溶剂难以实现满意的分离，往往是先 溜出来的峰分不开，而后溜出来的峰保留时间太长。因此，在 液相色谱中常在一个样品的分析过程中，不断调整混合溶剂的 组成，改变溶剂强度或溶剂的选择性。如果溶剂组成随洗馏时 间按一定规律变化，称这种洗馏过程为梯度洗脱。梯度洗脱过 程溶剂组成的变化可以是线性的，也可以是非线性的；可以是 二元的，也可以是三元，甚至多元溶剂的混合。梯度洗脱装置 根据溶剂混合时的压力分为两种类型：低压梯度和高压梯度。
紫外、可见－紫外分光检测器
这种检测器在液相色谱中应用最广。几乎是一切色谱 仪必备的检测器，它的特点是：噪音低、具有相对高 的灵敏度、结构简单、易于维修。紫外检测器的工作 原理是：当一束紫外光通过样品池时，入射光的一部 分被溶液中的某种物质吸收，吸收的多少取决于溶质 的性质。溶质的浓度和响应值之间存在线性关系。紫 外检测器有固定波长检测器，可变波长检测器两种。 可变波长检测器采用氘灯或氘灯与钨丝组合的光源， 波长在190～800nm范围可调。
过滤器的芯子通常是一个由多孔聚四氟乙烯制成的具有一定空隙度的圆柱 体，镶嵌在一个不锈钢的壳体中，形成一个完整的、安装方便的部件。
③高压输液泵
高压输液泵是现代液相色谱装置中最关键的设备， 输出高压溶剂是实现快速分析的前提。除了最高使 用压力外，还有线性流量范围，输出流量的精确度， 泵的操作方式，流量输出或压力恒定的稳定性，以 及易于操作和维修等。
进样时样品中不应混入杂质。溶解样品的溶剂最好和使用 的流动相一致，以防止溶剂变化出现不溶物而堵塞柱子。
检测器
检测器在色谱系统中非常重要。因为液相色谱 系统的所有特性都通过检测器的输出信号表现 出来。目前液相色谱仪常备的检测器主要是紫 外分光光度计和光二极管阵列检测器，示差折 光仪，荧光检测器。紫外和示差折光检测器是 液相色谱最基本的检测器，下面介绍这两种检 测器的工作原理。
①储液槽
储液槽是盛装溶剂的容器。它可以是一个普通的溶剂瓶，或是一个专门设 计的储液槽，用于除去溶剂中的气体。
②过滤器
各种泵的柱塞、进样阀的阀芯加工的精密度都非常高，微小的机械杂质将 导致这些部件的损坏，而不能很好的工作。同时杂质在柱头的积累还影响 柱子的使用，增大柱压，因此过滤溶剂，设置过滤器是必须的。
一、高效液相色谱法的特点
1、高效液相色谱可以分离分析高极性，高分子量和离子型 的各种物质，只要被分析对象能够溶解于可作为流动相的 溶剂中并能够被检测，就可以直接进行分析。某些目前尚 不能被直接检测，或检测灵敏度不够的，也可以采用各种 衍生技术，实现这些物质的检测。
2、高效液相色谱仪主要由高压输液泵、进样阀、柱子和检 测器等组成。