液相色谱仪课件

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液相色谱仪进样操作介绍课件

液相色谱仪进样操作介绍课件
进行处理和分析
数据可视化:将处理后 的数据以图表或图形的
形式展示
数据分析:对数据进行 分析,得出结论和结果
数据存储:将处理后的数 据存储到数据库中,方便
后续查询和调用
液相色谱仪进样操作注意 事项
样品处理
01
样品的预处理: 包括样品的溶解、
过滤、稀释等
02
样品的保存:需 要低温保存的样 品,应提前取出
并恢复至室温
03
样品的称量:根 据仪器要求,精
确称量样品
04
样品的溶解:根 据仪器要求,选 择合适的溶剂溶
解样品
05
样品的过滤:根 据仪器要求,选 择合适的滤膜过
滤样品
06
样品的稀释:根 据仪器要求,选 择合适的稀释液
稀释样品
07
样品的注射:根 据仪器要求,选 择合适的注射器
注射样品
进样器维护
定期清洁进样 器,保持进样 器内部清洁
特点:高效、快速、准确、灵敏, 可同时分析多种组分
进样原理
液相色谱仪进样操作原理是基于色谱分离技术,利用不同物质在流动相和固 定相之间的分配系数差异进行分离。
进样操作过程中,样品被注入到色谱柱中,在流动相的推动下,样品中的各 组分在色谱柱中分离,然后依次流出色谱柱进入检测器进行检测。
进样操作过程中,需要控制进样量、进样速度、进样时间等参数,以保证样 品的准确分离和检测。
进样操作完成后,需要对色谱数据进行处理和分析,以获得样品中各组分的 含量和性质等信息。
进样方式
01
手动进样:通过手动操作进样阀,将样品注入色谱柱
02
自动进样:通过自动进样器,实现样品的自动注入
03
气动进样:利用气体压力将样品注入色谱柱

高效液相色谱-HPLCppt课件.ppt

高效液相色谱-HPLCppt课件.ppt

色谱法的分类
按固定相的形态分:
平面色谱 o 纸色谱
o 薄层色谱
柱色谱
▪篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的,因 此,篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
色谱法的分类示意图
▪篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的,因 此,篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
▪ 高压梯度洗脱(高压混合,高压进柱,2个 泵。)
▪篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的,因 此,篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
▪安捷伦泵:小视频 ▪色谱学堂:泵
▪篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的,因 此,篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
色谱法原理及分类
什么是色谱法 色谱法溯源 Tswett(茨维特)的实验 色谱法原理 色谱法的分类
▪篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的,因 此,篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
什么是色谱法
色谱法是一种现代的分离分析方法 1906年正式命名(见诸文献) 20世纪30年代开始广泛研究和应用 高效液相色谱法的广泛应用始于20世纪70年代
1. 紫外—可见光度检测器:
①固定波长:254nm , 低压汞 灯。
② 可 调 波 长 : 190 ~ 800mm , 钨灯,氘灯。
UV
③光电二极管矩阵检测器: 190~700nm。
接色谱柱 石英窗 光电倍增管
废液
▪篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的,因 此,篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统

超高效液相色谱法PPT课件

超高效液相色谱法PPT课件

• 3、 高温分析

柱温最高达150℃;高温促使新技术的应用,比如绿色色谱法
(Green LC)。
4、 高速LCMS分析

与超快速LCMS、LCMS-2020相结合。
第35页/共49页
头发中烟碱和可替宁的超高效液相色谱测 定
• 烟碱( nicotine)是烟草中的主要生物碱, 是导致
吸烟成瘾的物质动因, 也是评价人体摄入烟草烟
第24页/共49页
• 此技术可保证可靠、重现的进样;在自动进样器内,可安置96 位或384位样品盘。每个位置可放置2或4mL样品瓶。新型的样 品组织器可接受21个样品盘的编程。
第25页/共49页
• 与传统的HPLC相比,UPLC的速度、灵敏度及 分离度分别是HPLC的9倍、3倍及1.7倍。
• 因此其在蛋白质、肽、代谢组学分析及其它一 些生化领域里将会得到广泛应用。另外,在天 然产物的分析方面,使用UPLC与质谱检测器连 接,会对天然产物分析,特别是中药研究领域 的发展是一个极的促进。
第47页/共49页
第26页/共49页
• 在提到“蛋白组学”或“代谢组学”时,与 没有“组”的差别从分析的角度说就是样品量 极大,需要在短时间分析成千上万的样品。 UPLC不损失分离度的高速度优点在里就能充分 体现。多生化样品及天然产物都十分复杂,
第27页/共49页
第28页/共49页
Waters UPLC 超高效液相色谱
• 3 μm是15 cm长普通色谱柱颗粒大小的极限。这是在色谱柱达 到最佳流速而又不超出市售仪器(使用任何配比的甲醇-水混 合溶剂)的压力限制范围的条件下,运行系统所能使用的最小 颗粒大小。(注意:迄今为止,用于HPLC的最小颗粒是0.67 μm

waters-e高效液相色谱ppt课件

waters-e高效液相色谱ppt课件
4.使用缓冲溶液时,做完样品后应立即用甲醇水溶液冲洗。 5.长时间不用仪器,应该将柱子取下用堵头封好保存,注意不能用纯水冲洗及
保存柱子,而应该用有机相(如甲醇等),因为纯水极性太强且易长霉。 。 6.开机时,流速和柱压要逐渐增加。 7.要注意柱子的PH值范围,不得注射强酸强碱的样品,特别是碱性样品。
流动相流出检测器可被送至废液瓶,或按需被收集。 当流动相含有一个分开的化合物谱带,高效液相色谱可以收集含有纯
化的化合物的该洗脱组分,用于进一步分析。
注意高压管路和附件用来连接泵、进样器、色谱柱和检测器单元,形 成流动相、样品和化合物分离谱带的通路。
高 检将效测电器信液连号相接转计换色算为谱机色数谱如据图站 ,何在,工显高示效作屏液上相展色现谱出系来统。单元先记录电信号,再
液相色谱的基本流程图
流动相
进样阀 泵
色谱柱
泵输液 进样
分离
检测器
检测
AB C
DE
G
F
记录
液 液相相流色色动谱谱相实:的验种所类各需及的部配基比分本,参示等数度-意-或亦梯图称度色谱条件
固定相:色谱柱类型及内径、长短 流动相输送系统参数:流速 检测器参数:紫外检测波长,灵敏度等 温度控制 进样量
四元梯度洗脱的溶剂输送动进样系统 柱温箱 液晶显示器 内置的柱塞杆密封垫清洗系统 溶剂瓶托盘 键盘用户界面及软盘驱动器
打开电源至on位置,开机依次接通 2695 分离单元、检测
2器开、机计算机和打印机的电源。接通后,约 20s 仪器开始自
检,约 1min 后,显示主屏幕,此时继续各部件的初始化。
溶 流【剂动M管相en理脱u/气系St确a统tu认s的所】有,准溶进备剂入管“路St都at充us满(溶1 剂),”按屏幕

《液相色谱技术》课件

《液相色谱技术》课件
通过液相色谱技术,可以检测环境中的有毒有害物质,如农药、酚类等,为环境治理和保护提供科学依据。
生态毒理学研究
液相色谱技术可以用于研究环境污染物对生物体的毒理学效应,有助于了解环境污染对生态系统的危害。
液相色谱技术的未来发展与挑战
高效液相色谱法(HPLC)
HPLC是液相色谱技术中的一种,具有高分离效能、高灵敏度、高选择性等优点,被广泛应用于生物医药、环境监测、食品安全等领域。随着技术的不断发展,HPLC的分离柱、检测器等关键部件也在不断改进,提高了分离效果和检测灵敏度。
智能化与自动化:随着机器人技术和自动化控制技术的发展,液相色谱技术的操作将更加智能化和自动化。未来的液相色谱仪将更加便捷、高效,能够实现自动化进样、自动优化分离条件等功能,大大提高分析效率。
感谢观看
THANKS
流动相的准备与更换
根据实验要求,准备好适量的流动相,并定期更换以保证实验结果的准确性。
定期清洗进样器、色谱柱和检测器,保持仪器表面清洁。
日常保养
定期校准
常见故障排除
对仪器进行定期校准,确保检测结果的准确性。
遇到问题时,应先检查电源、管线连接等基本情况,再根据仪器手册排查故障。
03
02
01
液相色谱技术的实验设计
色谱柱
检测色谱柱流出的组分,并将其转化为电信号,便于记录和检测。
检测器
用于采集、处理、分析和存储色谱数据。
数据处理系统
数据处理与分析
采集色谱数据,进行峰识别、定量和合适的流速、检测波长等参数,开始色谱分离。
进样
将样品注入进样器,设定进样量,启动进样程序。
准备工作
检查仪器是否正常,准备好流动相、色谱柱和样品。
样品前处理的挑战:液相色谱技术对于样品的要求较高,需要进行适当的前处理以去除杂质、提高分离效果。目前常用的样品前处理方法包括沉淀、萃取、吸附等,但这些方法操作繁琐、耗时长且效果不稳定。为解决这一问题,新型的样品前处理技术如固相萃取、免疫吸附等正在不断发展,以提高样品处理的效率和效果。

[课件]HPLC(仪器图)PPT

[课件]HPLC(仪器图)PPT
2018/12/4 据采集和控制系统
2018/12/4
(二).主要部件
1.高压输液系统 高压输液泵:主要部件之一,压力:15~35 MPa。
为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相( <10 μ m), 液体的流动相高速通过时,将产生很高的压力,因此高压、 高速是高效液相色谱的特点之一。 应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性
3.操作条件差别 GC: 加温操作 HPLC :室温;高压(液体粘度大,峰展宽小) 2018/12/4
第三节 高效液相色谱仪
高效液相色谱仪的结构示意图:一般可分为五个主 要部分:高压输液系统,进样系统,分离系统,
检测系统和数据处理及控制系统。此外还配有
辅助装置:如梯度淋洗,自动进样及数据处理等。
2018/12/4
柱内径1-3cm,固定相粒径>100μ m 且不均匀 常压输送流动相 柱效低(H↑,n↓) 分析周期长 无法在线检测
2.HPLC:分离和分析
柱内径 2-6mm ,固定相粒径 <10μ m (球形,匀浆装柱) 高压输送流动相 柱效高(H↓,n↑) 分析时间大大缩短 可以在线检测 2018/12/4
2018/12/4
(动• 在使用前必须进行脱气处理,以防止在洗脱过程 中当流动相由色谱柱流至检测器时,因压力降低 而产生气泡
• • • • 抽真空脱气 吹氦脱气 加热回流脱气 超声波脱气
2018/12/4
流动相的洗脱方式
• 等强度洗脱(isocratic):样品的组成较简单,各 组分的分配系数值相差不大。在同一分析周期 内流动相的组成保持恒定。 • 梯度洗脱(gradient):样品的组成较复杂,各 组分的分配系数值相差大,即宽分配比的组分

液相色谱仪ppt课件

液相色谱仪ppt课件
5
保养与维护
首先
仪器应保持清洁,每日用棉布擦拭仪器表面。
其次
当仪器脱气时,若气泡排不净,可将过滤头先用异丙醇超声处 理5-10分钟,再用色谱甲醇超声处理5-10分钟,若气泡仍存在, 则更换过滤头。
最后
使用前先检查仪器是否正常,如有异常,立即与有关部门联系, 进行维修做好记录。 检验结束后及时填写使用记录,具体执行《检验仪器设备管理规 程》。
样品分析
双击界面,进入主项目 界面,双击【文件】图标, 选中需要处理的文件, 单击文件名,打开该文 件,单击程序,出现手 动积分栏,对色谱图进 行积分处理,色谱图积 分处理结束后,保存处 理结果。单击数据报告, 预览数据报告,确认无 误,输出报告。
4
ADD A TITLE SLIDE
注意事项
仪器安装环境:放置点应远离强磁场,避免震动、静电干扰及腐蚀性气体的腐蚀。 冲洗管路约60分钟后,待基线走平且无杂质峰出现即停泵关机。若实验中使用了缓冲盐或者其他电解 质,在做实验前后,一定要先用10%甲醇冲洗约30分钟,之后甲醇浓度依次以10%的浓度递增,并进行 冲洗。
图标,进入工作站登陆界面。
III
单击【仪器】图标,双击,进入仪器操作界面在线系统,出现在线控制主界面。
IV 打开排放阀(逆时针旋转﹤180°),单击【自动排气】,进入排气操作界面,根据需要选择 流路及排气时间,完成设置后单击【下载】。
2
用户权限
操作员
操作员
操作员
管理员
CLICK TO ADD TEXT 管理操作员的结果是符合 操作员检验方法是否符合员
产品检验
3
数据采集方法编辑
常数设置
单击[常规],进入常规操 作界面,运行时间、泵 流速、检测器波长和柱 温箱温度(5℃~85℃) 等,完成设置后单击[下 载],将该方法下载至液 相色谱仪。

高效液相色谱仪优秀PPT

高效液相色谱仪优秀PPT
DNA电泳与色谱分析,生 物技术药物纯化及鉴定,生 物标志物色谱分析,蛋白质 组学研究等
紫外检测器
技术参数LC3000B
高压恒流泵
紫外检测器
自动进样器AS3100
普析LC-3000型液相色谱仪
流量范围:0.001-9.999ml/min 最高工作压力:42Mpa 流量精度:±0.5% 流量重复性:RSD≤0.1%(1ml/min)
上海普析LC3000紫外
UV3000紫外检测器性能指标: 波长范围:190-700nm 灯源:氘灯(标准配置),钨灯(可替换) 波带宽度:8nm 波长精度:±1.0 nm 波长重复性:0.2nm 基线噪音:1×10-5AU 基线漂移:2×10-4AU 检测池体积:10ul 外形尺寸:398*149*267 (深*高*宽)
耗样品少。
应用范围广——百分之七十以上的有机化合物可用高效 液相色谱分析,特别是高沸点、大分子、强极性、热稳 定性差化合物的分离分析,显示出优势。
药物分析
中药质量控制,化学药物 质量控制,抗生素质控分析, 生化药质量控制,新型高效 手性药物中手性对映体含量 的测定等
环境污染物分析
大气、水、土壤和食品中的多 环芳烃、多环联苯,阴离子表 面活性剂,有机氯农药、有机 磷农药,除草剂,酚类胺类、 黄曲霉毒素等污染物的分离与 测定
食品质量分析
食品质量分析
高效液相色谱仪适用于高沸点不易挥发的、分子量大、极性不同的有机物的定性和定量分析。
自动进样器AS3100
农药残留,兽药残留;防腐剂、 高标准的关键部件
关键部件世界知名品牌原装进口,泵头采用钛合金材质,更加耐腐蚀高温 ; 应用范围广——百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析,特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分 析,显示出优势。

《液相色谱仪》课件

《液相色谱仪》课件

液相色谱仪的组成部分
色谱柱

液相色谱仪包含不同种类的色谱 柱,如气相分离柱、反相柱等, 每种柱子都有其特点和应用范围。
液相色谱仪中的泵用于提供恒定 的流动相压力,保证样品的流动 速度和分离效果。
进样器
液相色谱仪的进样器用于将样品 引入色谱柱,保证准确的进样量 和分离效果。
液相色谱仪的操作步骤
正确的操作步骤对于获得准确的分析结果非常重要。
1
样品的进样
2
样品的进样过程需要注意选择适当的进样
量和进样方式,以保证分析的准确性和重
现性。
3
流动相的选用
4
合适的流动相对于分离效果和分析速度至 关重要,需要根据分析目的选择最佳的流
动相组合。
样品的制备
样品的制备是液相色谱仪分析的第一步, 需要根据分析需求选择合适的样品制备方 法。
色谱柱的选择和配置
液相色谱仪的发展趋势
液相色谱仪的技术不断进步,发展出新的分析方法和设备。 液相色谱仪的未来发展方向包括更高的分离效果、更快的分析速度、更广泛 的应用范围等。
液相色谱仪的结论
液相色谱仪具有许多优点和局限性,但在现代化学分析中具有重要的地位。 通过对液相色谱仪的理解和应用,可以更好地提高分析效率和准确性。 希望本课件能为大家了解液相色谱仪提供帮助。
《液相色谱仪》PPT课件
液相色谱仪是一种常用的分析仪器,用于化学分析、制药以及食品安全等行 业。本课件将介绍液相色谱仪的工作原理、组成部分、操作步骤、数据分析、 应用案例、发展趋势以及结论。
液相色谱仪的简介
液相色谱仪是一种常用的化学分析仪器,用于分离和检测混合物中的化合物。 液相色谱仪通过液相进样、色谱柱分离、检测器检测等步骤实现分析。

《液相色谱法》PPT课件

《液相色谱法》PPT课件
第七章 液相色谱(liquid chromatography)
§7-1 概述
(1)液相色谱简介
(2)液相色谱的发展
(3)液相色谱的分类
§7-2 液相色谱仪
(1)液相色谱仪
(2)液相色谱仪的流程图
(3)液相色谱仪的工作过程
(4)液相色谱仪的基本组成系统
(5)高压泵
精选课件ppt
1
第七章 液相色谱(liquid chromatography)
吸附色谱 吸附能,氢键 异构体分离、族分离,制备
分配色谱 疏水分配作用 各种有机化合物的分离、分析与制备
凝胶色谱 溶质分子大小 高分子分离,分子量及其分布的测定
离子交换色谱
库仑力
无机离子、有机离子分析
离子排斥色谱 Donnan膜平衡 有机酸、氨基酸、醇、醛分析
离子对色谱 疏水分配作用 离子性物质分析
疏水作用色谱 疏水分配作用 蛋白质分离与纯化
手性色谱
立体效应 手性异构体分离,药物纯化
亲和色谱 生化特异亲和力 蛋白、酶、抗体分离,生物和医药分析
两种最常用的色谱法
(一)吸附色谱法(adsorption chromatography) 以吸附剂为固定相的色谱方法称为吸附色
谱法。使用最多的吸附色谱固定相是硅胶,流 动相一般使用一种或多种有机溶剂的混合溶剂。 在吸附色谱中,不同的组分因和固定相吸附力 的不同而被分离。
(6)梯度洗脱装置 (7)进样器 (8)色谱柱 (9)色谱填料 (10)检测器 (11)数据处理系统与自动控制单元
§7-3 新型液相色谱仪简介
(1) waters的UPLC (2)岛津高效率HPLC-2010A/2010C型 (3)岛津LC-VP系列应用系统离子色谱仪

高效液相色谱仪HighPerformanceLiquidChromatograph课件-精品文档

高效液相色谱仪HighPerformanceLiquidChromatograph课件-精品文档
检测器,在灵敏度、选择性 、通用性及化合物的分子量和结构信息的提供等方面都有突出的优点。 但它的昂贵操作费用和复杂性限制了它的推广应用。
应用范围和主要特点
有紫外吸收的物质,大多数有机物都可以检测
梯 度
线性 范围
最小检测 量
紫外-可见
优点:噪声低,对流动相的温度变化不敏感,检测后不破坏样品, 可用于制备。 缺点:紫外吸收大的溶剂不能用做流动相 有紫外吸收的物质,大多数有机物都可以检测 优点:噪声低,对流动相的温度变化不敏感,检测后不破坏样品, 可用于制备。 缺点:紫外吸收大的溶剂不能用做流动相,价格较高 自身发荧光的物质或荧光衍生物 优点:适合生物样品痕量分析 缺点:易受背景荧光、ph值和溶剂影响 几乎所有溶质都可检测 优点:通用性广,没有紫外吸收的物质可以使用 缺点:灵敏度低,对温度敏感 挥发性低于溶剂的样品均可检测 优点:对温度变化不敏感,基线稳定,不依赖样品的光学特性 缺点:价格昂贵,需要载气 具有氧化还原特性的物质 优点:高灵敏度高选择性,离子色谱必备 缺点:对流速温度敏感,不适合有机溶剂体系,干扰较多
3.进样器 3.1 手动进样器 Rheodyne 7725i型 世界各大色谱制造商均选用此品牌,进样次数 可达30000次
3.2 手动进样针
针头为平头,容积以10或20ul最常见 品牌:瑞士hamilton,国产上海高鸽等
3.3 自动进样器
全自动进样,提高进样过程的稳定性,降低劳动强度,可满足几十个甚至上百 个样品的进样需求。有些自动进样器带有控温功能,适合热敏性样品。
5.3 荧光检测器(FLD):同样属于选择性检测器,其灵敏度在目前常 用的HPLC检测器中是最高的,应用也较多,仅次于UVD。它适用于能 激发荧光的化合物。很多与生命科学有关的物质,如氨基酸、胺类、 维生素、甾族化合物及某些代谢药物都可以用荧光法检测。荧光检测 器在生物样品痕量分析中很有用,尤其在用荧光衍生后,可以检测很 微量的氨基酸和肽。

《高效液相色谱仪》课件

《高效液相色谱仪》课件
《高效液相色谱仪》ppt课件
目 录
• 高效液相色谱仪简介 • 高效液相色谱仪的组成和工作原理 • 高效液相色谱仪的操作流程 • 高效液相色谱仪的维护与保养 • 高效液相色谱仪的实验技术与应用实例
01
高效液相色谱仪简介
定义与特点
定义
高效液相色谱仪是一种分离和分 析复杂混合物中各组分的仪器, 基于物质在固定相和流动相之间 的分配差异实现分离。

食品工业
用于检测食品中的添加剂、农 药残留和营养成分等。
高效液相色谱仪的发展历程
起源
20世纪50年代初,基于经典液 相柱色谱的原理,开发出了高
效液相色谱法。
发展
20世纪60年代,出现了填充柱 和柱切换技术,提高了分离效 率。
革新
20世纪70年代,出现了高效微 粒固定相和新型检测器,提高 了灵敏度和选择性。
流动相的纯化和过滤
确保流动相的纯度和清洁度,以避免对色谱柱和检测器造成污染。
流动相的脱气
使用真空脱气法或超声波脱气法去除流动相中的气泡,以避免对色 谱分离造成干扰。
色谱柱的安装与选择
安装色谱柱
按照仪器说明书正确安装色谱柱 ,确保密封性和稳定性。
色谱柱的选择
根据样品的性质和分离要求,选择 合适的色谱柱类型和规格。
检测器对流出的组分进行 检测,并将信号记录下来 ,形成色谱图。
高效液相色谱仪的分离原理
分配原理
组分在固定相和流动相之 间的分配平衡是实现物质 分离的基础。
吸附与解吸平衡
组分在固定相上的吸附与 流动相中的溶解度差异导 致分离。
分子间作用力
分子间的相互作用力(如 范德华力、氢键等)影响 组分的吸附与解吸平衡。
物的分子结构和化学键信息。

超高效液相色谱(UPLC)课件

超高效液相色谱(UPLC)课件

AU AU
对流出时间接近的色谱峰有更好的分离度及更高的灵敏度
2.理论基础

在高效液相色谱速率理论中, Van Deemter方程式的简
化表达式:

如果仅考虑固定相的粒度 对 的影响,其简化方程式可表 达为:
更小的颗粒度……
van Deemter 曲线带来的承诺
如果填料的颗粒继续演变……
填料颗粒尺寸的演变
AU
0.50
1.00
1.50
2.00
2.50 M inutes
3.00
3.50
4.00
4.50
5.00
0.012 0.010 0.008 0.006
0.004 0.002 0.000 -0.002 0.00
UPLC™ 1.7µm
0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 M inutes 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00
3.1 超高效液相色谱的C18色谱柱
固定相粒度 直径可达
dp
1.7µm 色谱柱长可 达3-5cm
3.1.1 色谱柱颗粒化学
改善了高pH稳定性
改善了硅胶的柱效和反压
改善了低pH稳定性
在杂化的碳-硅基质内具有桥式乙烷的1.7µm颗粒 三官能团键合C18配体
3.1.2 色谱柱硬件
筛板、柱管和连
HPLC
45.05 41.22 43.13
%
10.57 9.68
12.91
16.58 17.78 22.96 19.16
1.68 3.26
5.99
0 H040114A_RP_ESI+_002AB 100
28.88 32.91 45.23 25.60

气相色谱仪和液相色谱仪的使用ppt课件

气相色谱仪和液相色谱仪的使用ppt课件
(动画)
2.色谱法分类
气相色谱:流动相为气体(称为载气)。
按分离柱不同可分为:填充柱色谱和毛细管柱色谱;
按固定相的不同又分为:气固色谱和气液色谱
液相色谱
液相色谱:流动相为液体(也称为淋洗液)。 按固定相的不同分为:液固色谱和液液色谱。 离子色谱:液相色谱的一种,以特制的离子交换树脂为固 定相,不同pH值的水溶液为流动相。
(2) 梯度淋洗装置
外梯度:
利用两台高压输液泵, 将两种不同极性的溶剂按一 定的比例送入梯度混合室, 混合后进入色谱柱。
内梯度:
一台高压泵, 通过比例 调节阀,将两种或多种不同 极性的溶剂按一定的比例抽 入高压泵中混合。
(3) 进样装置
流路中为高压力工作状态,
通常使用耐高压的六通阀进样装置,
其结构如图所示:
2. 固定相及分离柱
气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱,其 选用原则与气相色谱一样。
选择合适的固定相,降低填料粒度可显著提高柱效, 但在高效液相色谱中,分离柱的制备是一项技术要求非常 高的工作,一般很少自行制备。
选择短柱、细内径提高分析速度;
研制高效柱填料是一活跃领域。
3. 流动相及流动相的极性
分配系数 K
组分在固定相和流动相间发生的吸附、脱附,或溶解、 挥发的过程叫做分配过程。在一定温度下,组分在两相间 分配达到平衡时的浓度(单位:g / mL)比,称为分配系数, 用K 表示,即:
组分在固定相中的浓度 K 组分在流动相中的浓度
分配系数 K的讨论
组分在固定相中的浓度 K 组分在流动相中的浓度
分在称之为色谱分离柱中的两相间不断进行着的 分配过程。
其中的一相固定不动,称为固定相; 另一相是携带试样混合物流过此固定相的 流体(气体或液体),称为流动相。

液相色谱-仪器PT课件

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3.数据系统采样速率太慢
4.检测器时间常数过大
八、峰展宽
5.流动相粘度过高 6.检测池体积过大 7.保留时间过长 8.柱外体积过大
5.增加柱温,采用低粘度流动相
6.用小体积池,卸下热交换器
7.等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱 8.将连接管径和连接管长度降至最小
9.样品过载
9.进小浓度小体积样品
药典附录规定


各品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组分、 检测器类型不得改变外,其余如色谱 柱内径、长度、载体粒度、流动相流速、混合流动相 各组分的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏 度等,均可适当改变,以适应供试品并达到系统适用 性试验的要求。其中,调整流动相组分比 例时,以组分比例较低者(小于或等于5 0 % )相对改 变量不超过± 3 0 %且绝对改变量不超过 ± 1 0 %为限,如3 0 %相对改变量的数值超过1 0 % 时,则改变量以土 1 0 %为限。 对于必须使用特定牌号的填充剂方能满足分离要求的 品种,可在该品种项下注明。
柱温箱
外挂架
固定相-填充材料
•硅胶纯度
•色谱柱尺寸 •颗粒形状
物理性质 •粒径
•表面积 •孔径 •键合类型 化学性质 •碳覆盖率 •封端
固定相-填充材料
•硅胶纯度 •色谱柱尺寸 •颗粒形状
填料硅胶的纯度 与残留金属离子浓度
物理性质 •粒径
•表面积
•孔径
固定相-填充材料
•键合类型 化学性质 •碳覆盖率 •封端
固定相-填充材料
仪器:检测器
仪器:检测器-紫外
DAD检测器
流路
UV/Vis双灯,全波长检测
紫外检测器工作原理
Agilent 1100 可变波长紫外检测器(G1314A)
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•6、高效液相色谱技术也存在一些问题。柱子价格昂贵,要 消耗大量的溶剂,而且许多溶剂对人体是有害的。高效液相 色谱仪的价格和损耗也比气相色谱仪高。此外,尚缺少象气 相色谱中氢火焰离子化检测器那样的通用型、高灵敏度的检 测手段。因此,高效液相色谱无论在技术上,在理论上,还 是在应用上都处于发展阶段。
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低压梯度是溶剂在常压下混合,然后用一个高压输液泵把它输送至柱系 统中。多元溶剂在混合室或溶剂罐中混合,并以一定速度改变溶剂的组 成。这种方式简单、经济,只能用往复泵。高压梯度使用两台高压输液 泵,每台输送一种溶剂,两台泵输出的溶剂在一个混合室内混合。每台 泵的溶剂流量由独立的电路或计算机控制,它们按一定比例改变。
过滤器的芯子通常是一个由多孔聚四氟乙烯制成的具有一定空隙度的圆柱 体,镶嵌在一个不锈钢的壳体中,形成一个完整的、安装方便的部件。
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③高压输液泵
高压输液泵是现代液相色谱装置中最关键的设备, 输出高压溶剂是实现快速分析的前提。除了最高使 用压力外,还有线性流量范围,输出流量的精确度, 泵的操作方式,流量输出或压力恒定的稳定性,以 及易于操作和维修等。
对于梯度系统系统来说,关键是要保证流速的稳定,梯度洗脱洗脱重现 性好。因此混合室的体积应尽可能地小,且不存在死角。
学习交流PPTΒιβλιοθήκη 9进样装置在液相色谱中,进样方式有微量注射器进样,进样阀 进样,自动进样装置等。高效液相色谱最主要的特点 要求进样器设计要耐高压,死体积小,与溶剂接触的 部分具有很好的耐蚀性。
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一、高效液相色谱法的特点
1、高效液相色谱可以分离分析高极性,高分子量和离子型的各种物质,只要 被分析对象能够溶解于可作为流动相的溶剂中并能够被检测,就可以直接进 行分析。某些目前尚不能被直接检测,或检测灵敏度不够的,也可以采用各 种衍生技术,实现这些物质的检测。
2、高效液相色谱仪主要由高压输液泵、进样阀、柱子和检测器等组成。 3、柱子的柱效(以理论板数计)很高,每米可达3万块以上。一般只使用
进样口处的隔垫把系统和外界分开。为了使隔垫能承 受上百公斤的压力,顶盖的通孔很细,而且长。在系 统处于高压时,用一根金属棒压住隔垫的通孔部分, 避免内部压力太大把隔垫冲破。液相色谱的进样口目 前大部分都是采用六通阀,六通阀进样的原理如图所 示。
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进样时样品中不应混入杂质。溶解样品的溶剂最好和使用
高效液相色谱仪中所用的泵可分为两类:恒压泵和 恒流泵。恒压泵主要指气动放大泵,泵出口压力在 系统中是恒定的,流速由柱的阻力决定。恒流泵有 往复泵和注射泵,这类泵输出的溶剂流量恒定,柱 前的压力由柱后的阻力确定。目前使用最多的是往 复泵。
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•④梯度洗脱装置
•当样品是一个含有不同种类组分的复杂混合物时,通常用一 种纯的或固定组成的混合溶剂难以实现满意的分离,往往是先 溜出来的峰分不开,而后溜出来的峰保留时间太长。因此,在 液相色谱中常在一个样品的分析过程中,不断调整混合溶剂的 组成,改变溶剂强度或溶剂的选择性。如果溶剂组成随洗馏时 间按一定规律变化,称这种洗馏过程为梯度洗脱。梯度洗脱过 程溶剂组成的变化可以是线性的,也可以是非线性的;可以是 二元的,也可以是三元,甚至多元溶剂的混合。梯度洗脱装置 根据溶剂混合时的压力分为两种类型:低压梯度和高压梯度。
的流动相一致,以防止溶剂变化出现不溶物而堵塞柱子。
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检测器
检测器在色谱系统中非常重要。因为液相色谱 系统的所有特性都通过检测器的输出信号表现 出来。目前液相色谱仪常备的检测器主要是紫 外分光光度计和光二极管阵列检测器,示差折 光仪,荧光检测器。紫外和示差折光检测器是 液相色谱最基本的检测器,下面介绍这两种检 测器的工作原理。
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紫外、可见-紫外分光检测器
这种检测器在液相色谱中应用最广。几乎是一切色谱 仪必备的检测器,它的特点是:噪音低、具有相对高 的灵敏度、结构简单、易于维修。紫外检测器的工作 原理是:当一束紫外光通过样品池时,入射光的一部 分被溶液中的某种物质吸收,吸收的多少取决于溶质 的性质。溶质的浓度和响应值之间存在线性关系。紫 外检测器有固定波长检测器,可变波长检测器两种。 可变波长检测器采用氘灯或氘灯与钨丝组合的光源, 波长在190~800nm范围可调。
液 相 色谱
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高效液相色谱法
液相色谱是色谱中的一类分离与分析技术,其特 点是以液体作为流动相。对于大量有机化合物、离 子型化合物以及易受热分解或失去活性的物质,不 能直接或不适合用气相色谱方法进行分析,因此高 效液相色谱的应用领域不断扩大和深入。特别是近 几十年来,液相色谱固定相的高度发展,仪器不断 更新,高效液相色谱目前已成为许多学科科学研究 和日常分析的重要手段。
20~25cm长的柱子。由于填料的不断发展和改进,目前最短的柱子只有 3cm长,板数可达3000~4000。已能够满足一般分析的需要,并具有很高的 分析速度。
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4、高效液相色谱仪通常在室温下操作,样品一般不须预处理, 操作简便,很容易掌握。
•5、高效液相色谱操作的难点在于流动相的选择。可以采用 纯溶剂,二元或多元混合溶剂作流动相。但流动相的选择必 须遵循一定的规律,并以科学的方法优选。
①储液槽
储液槽是盛装溶剂的容器。它可以是一个普通的溶剂瓶,或是一个专门设 计的储液槽,用于除去溶剂中的气体。
②过滤器
各种泵的柱塞、进样阀的阀芯加工的精密度都非常高,微小的机械杂质将 导致这些部件的损坏,而不能很好的工作。同时杂质在柱头的积累还影响 柱子的使用,增大柱压,因此过滤溶剂,设置过滤器是必须的。
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二、高效液相色谱系统
下图是高效液相色谱系统的示意图。
它由输液泵为核心的输液系统、进样器、柱子和检测器四个基本
部分组成。实际仪器比图要学复习杂交流得PPT多,它们可能有几个泵,几种
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1、 输液系统
输液系统的作用是向柱子提供压力高,流速稳定的流动相。它以高压输液 泵为核心,由溶剂储槽、过滤器、输液泵、梯度溶剂混合器等组成。为了 测量系统流量和压力,在输液系统的输出通路上还安装了不同类型的传感 元件。
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