重组酶聚合酶扩增技术快速检测转基因玉米Bt11

上海农业学报2018,34(1) :20-24

Acta Agriculturae Shanghai D01：10. 15955/j. issnl000-3924.2018.0L04文章编号：1000-3924 (2018) 01 -020-05

重组酶聚合酶扩增技术快速检测转基因玉米Btll

刘静1>2,武国干2’3,吴潇2’3,刘华2’3,王金斌2’3,吕贝贝2’3,蒋玮2’3,唐雪明C上海海洋大学食品学院，上海200090;2上海市农业科学院生物技术研究所，上海201106;3农业部转基因

植物环境安全监督检验测试中心（上海），上海201106;4上海市农业遗传育种重点实验室，上海201106)

摘要：根据外源基因草丁膦乙酰转移酶基因（/M7〇与载体骨架连接区序列设计引物，建立了基于重组酶 聚合酶扩增技术（R P A)的转基因玉米B t l l特异性快速检测方法。结果表明:该方法可在37丈条件下20 m m内完成转基因玉米B t l l的检测，绝对检测限为100拷贝/p L，相对检测限为0. 1%。

关键词：重组酶聚合酶扩增技术;B tl 1;特异性检测;绝对检测限;相对检测限

中图分类号：Q78 文献标识码:A

Rapid detection of genetically modified maize Btll

by recombinase polymerase amplification assay

LIU Jing1’2，WU Guo-gan2’3，WU Xiao2’3，LIU Hua2’3，WANG Jin-bin2’3，LYU Bei-bei2’3，

JIANG Wei2’3，TANG Xue-ming1’2’3’4**

(r College of Food Science and Technology 7 Shanghai Ocean University 7 Shanghai 200090 y China;

2Biotech Research Institute 7 Shanghai Academy of Agricultural Sciences , Shanghai 201106 y China ；

3Inspection and Test Center for Environmental Safety of GM Crops of M O S h a n g h a i)7 Shanghai201106, China；4 Key Laboratory of Agricultural Genetics and Breeding 7 Shanghai 201106 y China)

Abstract：The primers was designed according to the junction sequence of exogenous gene phosphinothricin acetyltransferase gene(PA71)and vector backbone,and a specific rapid detection method based on recombinase polymerase amplification(RPA)for genetically modified maize B tll (GM B tll)was established.The results showed that the method could be used to detect genetically modified maize(B tl1)in 20 min under 37 °C.The absolute detection lim it was 100 copies/(x L,and the relative detection lim it was0. 1%.

Key words：Recombinase polymerase amplification(RPA)；B tl1; Specific detection；Absolute detection lim it;Relative detection limit

随着转基因技术研究与应用的快速发展，转基因产品检测技术的研究已成为全球转基因生物安全管 理的重要组成部分。PCR技术在转基因检测中有着广泛的应用，但是常规的PCR检测需要精密的热循环 仪以及复杂的实验程序，难以满足非实验室环境下转基因核酸成分快速筛查和检测的需求。近年来，核 酸等温扩增技术得到了较快的发展。与常规PCR相比，核酸等温扩增技术不需要热循环仪器，可在恒温 条件下快速扩增出目的片段，具有简便、灵敏的特点。目前，主要的等温扩增技术有环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)、滚环扩増技术（Rolling circle amplification，RCA)以及重组 酶聚合酶扩増技术（Recombinase ploymerase amplification，RPA)等[1_2]。

R P A技术原理是模拟生物体内D N A复制，由重组酶介导、在37 t下对目标片段进行等温扩増，实现 单分子核酸检测。R P A最大的特点是不需要通过高低温度循环来实现核酸解链和退火，只需要1对引物收稿日期:2016冶9-19

基金项目：上海市农委科技兴农重点项目（20154-3);上海市科委转基因食品与生物安全检测公共服务平台项目[沪农科攻字（2015) 第4-3号]

作者简介:刘静（19S9 —），女，硕士，研究方向为转基因检测新方法的探究。E-mail:lj〇6〇3@f〇X mail.C〇m，Tel:〇2l-6296266l

*通信作者:唐雪明（197〇—)，男，博士，研究员，主要从事转基因生物安全评价研究。E-mail:X ueming7〇@f〇X mail.C〇m，Tel:〇2l-622〇875〇