重组酶聚合酶扩增技术的研究进展
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ｕ ｎ ｄ ｅ ｒ ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｎ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ２ ５℃ 一 ４ ３℃ ｉ ｎ ５ ｔ ｏ ２ ０ ｍｉ ｎ ｕ ｔ ｅ ｓ ．Ｄｕ ｅ ｔ ｏ ｉ ｔ ｓ ｃ ｏ ｎ ｖ ｅ ｎ ｉ ｅ ｎ ｔ ｏ ｐ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｌ Ｏ Ｗ
ｃ ｏｓ ｔ ， ＲＰＡ ｈ ａ ｓ ｂ ｅ ｅ ｎ ｃ ｏ ｎｓ ｉ ｄｅ ｒ ｅ ｄ ａ ｓ ａ ｎ ｅ ｗ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎｉ ｑ ｕｅ ｗｈｉ ｃ ｈ ｃ ａ ｎ ｒ ｅ ｐｌ ａ ｃ ｅ ＰＣＲ．Ｉ ｎ ｔ ｈｉ ｓ ｒ ｅ ｖｉ ｅ ｗ． ｔ ｈｅ ｐ ｒ ｉ ｎｃ ｉ ｐｌ ｅ．
ｅ ． ｇ ． ， ｐ ｏ ｌ ｙ ｍｅ ｒ ａ ｓ ｅ ｃ ｈ ａ ｉ ｎ ｒ ｅ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ （ Ｐ Ｃ Ｒ）ａ ｎ ｄ ｉ ｓ ｏ ｔ ｈ ｅ ｒ ｍａ ｌ Ｄ Ｎ Ａ ａ ｍｐ ｌ ｉ ｉ ｆ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ， Ｒ Ｐ Ａ ｃ ａ ｎ ｅ ａ ｓ ｉ ｌ ｙ ｏ ｂ ｓ ｅ ｒ ｖ ｅ ｔ ｈ ｅ ｔ ｅ ｓ ｔ
Ｋｅ ｙ Ｗ ｏｒ ｄ ｓ：Ｒｅ ｃ ｏ ｍｂ ｉ ｎ ａ ｓ ｅ Ｐｏ ｌ ｙ ｍｅ ｒ ａ ｓ ｅ Ａｍ ｐ ｌ ｉ ｉｃ ｆ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｔｅ ｃ ｈ ｅ ｎ ｉ ｑ ｕｅ； Ｄｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｍｅ ｔ ｈｏ ｄ； Ａｐｐ ｌ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ Ａｒ ｅ ａ
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ：Ｒｅ ｃ ｏ ｍｂ ｉ ｎ ａ ｓ ｅ Ｐ ｏ ｌ ｙ ｍｅ ｒ ａ ｓ ｅ Ａｍｐ ｌ ｉ ｉ ｆ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ （ ＲＰ Ａ） ｉ Ｓ ａ ｎ ｅ ｗ ｋ ｉ ｎ ｄ ｏ ｆ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｉ ｑ ｕ ｅ ｗｈ ｉ ｃ ｈ ｃ ａ ｎ ｍａ ｋ ｅ
ｃ ｈ ａ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ｓ ｔ ｉ ｃ 。 ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｏ ｆ ＲＰ Ａ． ａ ｎ ｄ ｉ ｔ ｓ ａ ｐ ｐ ｌ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｉ ｆ ｅ ｌ ｄ ｓ ａ ｔ ｈ ｏ ｍｅ ａ ｎ ｄ ａ ｂ ｒ ｏ ａ ｄ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ｌ ａ ｓ ｔ ｄ ｅ ｃ ａ ｄ ｅ ａ ｒ ｅ ｓ ｕ ｍｍ ａ ｒ ｉ ｚ ｅ ｄ ．Ｔ ｈ ｅ ａ ｐ ｐ ｌ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ＲＰ Ａ ｉ ｎ ｉ ｎ ｓ ｐ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｉ ｆ ｅ ｌ ｄ ｉ Ｓ ａ ｌ ｓ ｏ ｐ ｒ ｏ ｓ ｐ ｅ ｃ ｔ ｅ ｄ ．
ｍｉ ｃ ｒ ｏ — ｎ ｕ ｃ ｌ ｅ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ｔ ｏ ｂ ｅ ｅ ｉｃ ｆ ｉ ｅ ｎ ｔ ｌ ｙ ａ ｎ ｄ ｒ ａ ｐ ｉ ｄ ｌ ｙ ａ ｍｐ ｌ ｉ ｉ ｆ ｅ ｄ ｉ ｎ ｖ ｉ ｔ ｒ ｏ ．Ｃｏ ｍｐ ａ ｒ ｅ ｄ ｗｉ ｔ ｈ ｔ ｈ ｅ ｔ ｒ ａ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｉ ｑ ｕ ｅ ｓ
（ 广州质量监督检测研究 院 广东广州 ５ １ １ ４ ４ ７ ）
摘 要 重组酶 聚合 酶扩 增技 术是 一种 可使 微 量核酸 在体 外 高效 快速扩 增 的新技 术 。 与传 统 Ｐ Ｃ Ｒ及 等 温 扩增 技术 相 比较 ， 其最 显著 的优势 是在 ２ ５℃． ４ ３℃条 件 下 ， ５ — ２ ０ ｍｉ ｎ内观察 到检 测 结果 ， 且 操作 简单 ， 设 备 成 本低廉， 被 认 为是 一种 可 以代 替 Ｐ Ｃ Ｒ 的新技 术 。 本文 综述 了重 组酶 聚合 酶扩增 技术 的原 理和 特 点 、 检测 方 法 及 近 十年 来在 国内外不 同领 域 的应用 情况 ， 并 展望 了该 技术在 检 测领域 中的未来 方 向。 关 键词 重组 酶聚合 酶 扩增技 术 ； 检测 方 法 ； 应用 领域
中图分 类号 Ｑ ７ ８ ９
Ａｄ ａｖ ａ ｎｃ ｅ ｓ ｉ ｎ Ｒｅ ｃ ｏｍｂｉ ｎａ ｓ ｅ Ｐｏｌ ｙｍｅ ｒ ａ ｓ ｅ Ａｍ ｐｌ ｉ ｉｃ ｆ ａ ｔ ｉ ｏｎ
ＬⅢ
Ｄｏ ｎ ｇ ｈ ｏ ｎ ｇ， Ｗ ＡＮＧ Ｄｅ ｌ ｉ ａ ｎ ， ＧＵ０ Ｙａ ｎ ｈ ｕ ａ，ＮＩ Ｅ Ｙａ ｎ ｙ ａ ｎ，、 ７ Ⅲ
２ ０ １ ６年第 ５期 Ｖ ｏ １ ． ２ ６ Ｎ ｏ ． ５
检 验检 疫学 刊 Ｊ Ｏ Ｕ Ｒ Ｎ Ａ Ｌ Ｏ Ｆ Ｉ Ｎ Ｓ Ｐ Ｅ Ｃ Ｔ Ｉ Ｏ Ｎ Ａ Ｎ Ｄ Ｑ Ｕ Ａ Ｒ Ａ Ｎ Ｔ Ｉ Ｎ Ｅ
重组酶聚合酶扩增技术 的研究进 展
刘冬 虹 王德 莲 ’ 郭 燕华 聂 炎炎 吴 环 曾国权
Ｈｕ ａ ｎ， Ｚ Ｅ ＮＧ Ｇｕ ｏ ｑ ｕ ａ ｎ
（ Ｇ ｕ ａ ｎ ｇ ｚ ｈ ｏ ｕ Ｑ ｕ ａ ｌ ｉ ｔ ｙ Ｓ ｕ ｐ ｅ ｒ ｖ ｉ ｓ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ Ｔ ｅ ｓ ｔ ｉ ｎ ｇ Ｉ ｎ ｓ ｔ ｉ ｔ ｕ ｔ ｅ ，Ｇ ｕ ａ ｎ ｇ ｚ ｈ ｏ ｕ ，Ｇｕ ａ ｎ ｇ ｄ ｏ ｎ ｇ ，５ ｌ １ ４ ４ ７ ）
１ 前பைடு நூலகம்言
利用 重组 酶和 单链 结合 蛋 白在 常 温下协 同实现 引物 和模 板 的特异 结合 。 反应 体 系主要 有 Ｔ ４噬菌 体编码 的重 组 酶蛋 白 ｕ ｖ ｓ Ｘ和 ｕ ｖ ｓ Ｙ Ｅ ￣ 、 单链 结 合蛋 白ｇ ｐ ３ ２及 Ｂ ｓ ｕ Ｄ Ｎ Ａ聚合 酶 、 引物 、 模板 、 缓 冲液等 ［ ２ １ 。 在恒 温下 ． 重 组 酶蛋 白在 Ａ Ｔ Ｐ的参 与下 与单 链 核酸 （ 引物 ） 结 合形成 蛋 白一 核苷 酸复合 物 ， 该复合 物 可 以在 双链 Ｄ Ｎ Ａ（ 模板 ） 上 进行 双 向扫 描 ， 寻 找 与引 物同源的靶序列 。 一旦找到 ， 重组酶可打开双链Ｄ Ｎ Ａ， 同 时引 物与 同源 序列 发生链 交换 反应 ， 在Ｄ Ｎ Ａ聚合 酶 的作 用下启 动 Ｄ Ｎ Ａ合成 反应 。 单 链结 合蛋 白与 被引 物替 换掉 的母链 结合 ， 防止被 进一 步替换 。 在这个 体 系 中 ．由一对 相对 的引 物 同时启 动和完 成一 个合 成
ｃ ｏｓ ｔ ， ＲＰＡ ｈ ａ ｓ ｂ ｅ ｅ ｎ ｃ ｏ ｎｓ ｉ ｄｅ ｒ ｅ ｄ ａ ｓ ａ ｎ ｅ ｗ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎｉ ｑ ｕｅ ｗｈｉ ｃ ｈ ｃ ａ ｎ ｒ ｅ ｐｌ ａ ｃ ｅ ＰＣＲ．Ｉ ｎ ｔ ｈｉ ｓ ｒ ｅ ｖｉ ｅ ｗ． ｔ ｈｅ ｐ ｒ ｉ ｎｃ ｉ ｐｌ ｅ．
ｅ ． ｇ ． ， ｐ ｏ ｌ ｙ ｍｅ ｒ ａ ｓ ｅ ｃ ｈ ａ ｉ ｎ ｒ ｅ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ （ Ｐ Ｃ Ｒ）ａ ｎ ｄ ｉ ｓ ｏ ｔ ｈ ｅ ｒ ｍａ ｌ Ｄ Ｎ Ａ ａ ｍｐ ｌ ｉ ｉ ｆ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ， Ｒ Ｐ Ａ ｃ ａ ｎ ｅ ａ ｓ ｉ ｌ ｙ ｏ ｂ ｓ ｅ ｒ ｖ ｅ ｔ ｈ ｅ ｔ ｅ ｓ ｔ
Ｋｅ ｙ Ｗ ｏｒ ｄ ｓ：Ｒｅ ｃ ｏ ｍｂ ｉ ｎ ａ ｓ ｅ Ｐｏ ｌ ｙ ｍｅ ｒ ａ ｓ ｅ Ａｍ ｐ ｌ ｉ ｉｃ ｆ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｔｅ ｃ ｈ ｅ ｎ ｉ ｑ ｕｅ； Ｄｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｍｅ ｔ ｈｏ ｄ； Ａｐｐ ｌ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ Ａｒ ｅ ａ
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ：Ｒｅ ｃ ｏ ｍｂ ｉ ｎ ａ ｓ ｅ Ｐ ｏ ｌ ｙ ｍｅ ｒ ａ ｓ ｅ Ａｍｐ ｌ ｉ ｉ ｆ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ （ ＲＰ Ａ） ｉ Ｓ ａ ｎ ｅ ｗ ｋ ｉ ｎ ｄ ｏ ｆ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｉ ｑ ｕ ｅ ｗｈ ｉ ｃ ｈ ｃ ａ ｎ ｍａ ｋ ｅ
ｃ ｈ ａ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ｓ ｔ ｉ ｃ 。 ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｏ ｆ ＲＰ Ａ． ａ ｎ ｄ ｉ ｔ ｓ ａ ｐ ｐ ｌ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｉ ｆ ｅ ｌ ｄ ｓ ａ ｔ ｈ ｏ ｍｅ ａ ｎ ｄ ａ ｂ ｒ ｏ ａ ｄ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ｌ ａ ｓ ｔ ｄ ｅ ｃ ａ ｄ ｅ ａ ｒ ｅ ｓ ｕ ｍｍ ａ ｒ ｉ ｚ ｅ ｄ ．Ｔ ｈ ｅ ａ ｐ ｐ ｌ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ＲＰ Ａ ｉ ｎ ｉ ｎ ｓ ｐ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｉ ｆ ｅ ｌ ｄ ｉ Ｓ ａ ｌ ｓ ｏ ｐ ｒ ｏ ｓ ｐ ｅ ｃ ｔ ｅ ｄ ．
ｍｉ ｃ ｒ ｏ — ｎ ｕ ｃ ｌ ｅ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ｔ ｏ ｂ ｅ ｅ ｉｃ ｆ ｉ ｅ ｎ ｔ ｌ ｙ ａ ｎ ｄ ｒ ａ ｐ ｉ ｄ ｌ ｙ ａ ｍｐ ｌ ｉ ｉ ｆ ｅ ｄ ｉ ｎ ｖ ｉ ｔ ｒ ｏ ．Ｃｏ ｍｐ ａ ｒ ｅ ｄ ｗｉ ｔ ｈ ｔ ｈ ｅ ｔ ｒ ａ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｉ ｑ ｕ ｅ ｓ
（ 广州质量监督检测研究 院 广东广州 ５ １ １ ４ ４ ７ ）
摘 要 重组酶 聚合 酶扩 增技 术是 一种 可使 微 量核酸 在体 外 高效 快速扩 增 的新技 术 。 与传 统 Ｐ Ｃ Ｒ及 等 温 扩增 技术 相 比较 ， 其最 显著 的优势 是在 ２ ５℃． ４ ３℃条 件 下 ， ５ — ２ ０ ｍｉ ｎ内观察 到检 测 结果 ， 且 操作 简单 ， 设 备 成 本低廉， 被 认 为是 一种 可 以代 替 Ｐ Ｃ Ｒ 的新技 术 。 本文 综述 了重 组酶 聚合 酶扩增 技术 的原 理和 特 点 、 检测 方 法 及 近 十年 来在 国内外不 同领 域 的应用 情况 ， 并 展望 了该 技术在 检 测领域 中的未来 方 向。 关 键词 重组 酶聚合 酶 扩增技 术 ； 检测 方 法 ； 应用 领域
中图分 类号 Ｑ ７ ８ ９
Ａｄ ａｖ ａ ｎｃ ｅ ｓ ｉ ｎ Ｒｅ ｃ ｏｍｂｉ ｎａ ｓ ｅ Ｐｏｌ ｙｍｅ ｒ ａ ｓ ｅ Ａｍ ｐｌ ｉ ｉｃ ｆ ａ ｔ ｉ ｏｎ
ＬⅢ
Ｄｏ ｎ ｇ ｈ ｏ ｎ ｇ， Ｗ ＡＮＧ Ｄｅ ｌ ｉ ａ ｎ ， ＧＵ０ Ｙａ ｎ ｈ ｕ ａ，ＮＩ Ｅ Ｙａ ｎ ｙ ａ ｎ，、 ７ Ⅲ
２ ０ １ ６年第 ５期 Ｖ ｏ １ ． ２ ６ Ｎ ｏ ． ５
检 验检 疫学 刊 Ｊ Ｏ Ｕ Ｒ Ｎ Ａ Ｌ Ｏ Ｆ Ｉ Ｎ Ｓ Ｐ Ｅ Ｃ Ｔ Ｉ Ｏ Ｎ Ａ Ｎ Ｄ Ｑ Ｕ Ａ Ｒ Ａ Ｎ Ｔ Ｉ Ｎ Ｅ
重组酶聚合酶扩增技术 的研究进 展
刘冬 虹 王德 莲 ’ 郭 燕华 聂 炎炎 吴 环 曾国权
Ｈｕ ａ ｎ， Ｚ Ｅ ＮＧ Ｇｕ ｏ ｑ ｕ ａ ｎ
（ Ｇ ｕ ａ ｎ ｇ ｚ ｈ ｏ ｕ Ｑ ｕ ａ ｌ ｉ ｔ ｙ Ｓ ｕ ｐ ｅ ｒ ｖ ｉ ｓ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ Ｔ ｅ ｓ ｔ ｉ ｎ ｇ Ｉ ｎ ｓ ｔ ｉ ｔ ｕ ｔ ｅ ，Ｇ ｕ ａ ｎ ｇ ｚ ｈ ｏ ｕ ，Ｇｕ ａ ｎ ｇ ｄ ｏ ｎ ｇ ，５ ｌ １ ４ ４ ７ ）
１ 前பைடு நூலகம்言
利用 重组 酶和 单链 结合 蛋 白在 常 温下协 同实现 引物 和模 板 的特异 结合 。 反应 体 系主要 有 Ｔ ４噬菌 体编码 的重 组 酶蛋 白 ｕ ｖ ｓ Ｘ和 ｕ ｖ ｓ Ｙ Ｅ ￣ 、 单链 结 合蛋 白ｇ ｐ ３ ２及 Ｂ ｓ ｕ Ｄ Ｎ Ａ聚合 酶 、 引物 、 模板 、 缓 冲液等 ［ ２ １ 。 在恒 温下 ． 重 组 酶蛋 白在 Ａ Ｔ Ｐ的参 与下 与单 链 核酸 （ 引物 ） 结 合形成 蛋 白一 核苷 酸复合 物 ， 该复合 物 可 以在 双链 Ｄ Ｎ Ａ（ 模板 ） 上 进行 双 向扫 描 ， 寻 找 与引 物同源的靶序列 。 一旦找到 ， 重组酶可打开双链Ｄ Ｎ Ａ， 同 时引 物与 同源 序列 发生链 交换 反应 ， 在Ｄ Ｎ Ａ聚合 酶 的作 用下启 动 Ｄ Ｎ Ａ合成 反应 。 单 链结 合蛋 白与 被引 物替 换掉 的母链 结合 ， 防止被 进一 步替换 。 在这个 体 系 中 ．由一对 相对 的引 物 同时启 动和完 成一 个合 成