精子畸形率检测实验

精子畸形率检测
一、实验目的：
精子畸形试验是检测受试化学毒物能否破坏哺乳动物精子正常形态的实验方法。

通过该实验，学习和掌握小鼠精子畸形试验的原理和步骤。

1.熟悉精子畸形的概念及类型、精子畸形试验的实验设计、试验检测的遗传学终点。

2.学习和掌握小鼠精子畸形试验的基本方法步骤，正常精子及畸形精子的镜下观察。

3.了解精子畸形试验数据整理、分析方法及结果的评价。

二、实验原理：
1.小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遗传性，许多常染色体及X、Y性染色体基因直接或间接地决定精子形态。

2.精子的畸形主要是指形态的异常，是决定精子形成的基因发生突变的结果。

因此形态的改变提示有关基因及其蛋白质产物的改变。

三、实验器材及试剂：
眼科剪、眼科镊、小平皿、显微镜、擦镜纸、带橡皮头吸管、载玻片、玻璃染缸
1%伊红染液、9%生理盐水
四、实验步骤：
1.制片
颈椎脱臼处死小鼠，取出双侧附睾，将附睾放入1ml磷酸盐缓冲液或生理盐水中。

用眼科剪将附睾纵向剪1~2下，静止3~5min，轻轻摇动。

吸取此精子悬液滴于清洁载玻片一端，均匀推片，待玻片晾干后用甲/乙醇固定5min以上，自然晾干。

用1%~2%伊红染色15min，用水轻冲，干燥。

2.阅片
在低倍镜下找到背景清晰、精子重叠较少的区域，然后用油镜计数。

每只小鼠为一观察单位，计数1000条完整的精子中畸形精子数，计算各组小鼠精子畸变率。

其中有头无尾（轮廓不清）、头部与其他精子或碎片重叠及人为剪碎的精子均不计算。

精子畸形主要表现在头部，其次为尾部，可分为无钩、香蕉形、胖头、无定形、尾折叠、双头、双尾等。

异常精子均应记录显微镜的坐标数，以备复查。

并分别记录异常类型，以便统计精子畸形率及精子类型的构成比。

判断双头、双尾畸形时，要注意与两条精子的部分重叠相鉴别，判断无定形时要与人为剪碎及折叠相鉴别。

五、注意事项：
判断双头、双尾畸形时，要注意与两条精子的部分重叠相鉴别，判断无定形时要与人为剪碎及折叠相鉴别。

使用的小鼠要健康，以免感染、体温增高等可能导致精子畸形率增高，造成假阳性结果。