关于生物技术综合实验报告
关于生物技术综合实验报告
生物技术综合实验
甘薯γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)基因的克隆和原核表达
学生：学号：
同实验者：
谷胱甘肽(glutathione, GSH) GSH具有多种重要生理功能, 抗自由基和抗氧化应激作用, 保护细胞膜的完整性等。γ-GCS是植物细胞中GSH生物合成的限速酶, 可以调控GSH 的生物合成量。GSH在生物体抵御冷害、干旱、重金属、真菌等胁迫过程中起着重要作用, 说明γ-GCS也与植物抗逆过程密切相关。
实验一甘薯叶片RNA提取
一、实验目的
1. 了解真核生物RNA提取的原理；
2. 掌握Trizol提取的方法和步骤。
二、实验原理
Trizol 试剂是由苯酚和硫氰酸胍配制而成的单相的快速抽提总RNA的试剂，在匀浆和裂解过程中，能在破碎细胞、降解细胞其它成分的同时保持RNA的完整性。TRIzol的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白，
核酸物质解聚得到释放。苯酚虽可有效地变性蛋白质，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIzol中还加入了8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase。%的8－羟基喹啉可以抑制RNase，与氯仿联合使用可增强抑制作用。异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质并使蛋白质二级结构消失，导致细胞结构降解，核蛋白迅速与核酸分离。β-巯基乙醇的主要作用是破坏RNase蛋白质中的二硫键。在氯仿抽提、离心分离后，RNA处于水相中，将水相转管后用异丙醇沉淀RNA。用这种方法得到的总 RNA中蛋白质和DNA污染很少。
三、实验材料
1. 材料
甘薯叶片，品种为徐薯18
2. 试剂
①无RNA酶灭菌水：加入%的DEPC，处理过夜后高压灭菌；
② Trizol试剂；
③氯仿；
④异丙醇、75％乙醇；
⑤ TBE缓冲液；
⑥上样缓冲液
3. 仪器
高压灭菌锅、微量移液器、台式离心机、超净工作台、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、塑料离心管、枪头和EP 管架
四、实验方法
1. 将叶片取出放入研钵中，加入适量液氮，迅速研磨成粉末，每50-100 mg植物叶片加入1 mL Trizol试剂，室温放置5 min，使样品充分裂解；
2. 每1 mL Trizol试剂加入200 μL氯仿，用手剧烈振荡混匀后室温放置3-5 min使其自然分相；
3. 4℃ 12,000 rpm 离心15 min，吸取上层水相转移到新管中；在上清中加入等体积冰冷的异丙醇，室温放置15 min；
4. 4℃ 12,000 rpm 离心10 min，弃上清，RNA沉淀于管底；
5. RNA沉淀中加入1 mL 75%的乙醇，温和震荡离心管，悬浮沉淀； 4℃ 8,000 rpm离心2 min，弃上清；
6. 室温放置10 min晾干沉淀；
7. 沉淀中加入20μL RNase-free ddH2O，轻弹管壁，以充分溶解RNA，-70℃保存；
8. 用1%的琼脂糖凝胶电泳进行检测，用EB染色并照相。
五、实验结果
1. RNA提取结果
依照Trizol 试剂盒方法，提出的RNA较少，此部分未以图或数据显示。
2. RNA后电泳结果
如图1. 其中9a为本组实验结果。由图可知RNA条带非常模糊，拖尾现象严重，几乎无法分清具体条带，亮度较大。点样孔附近的红色部分为杂质，在提取过程中并未很好除去。
图1. RNA提取跑胶结果。其中1泳道为样品Marker，9a泳道为本小组RNA样品。与标准对照可见条带模糊，拖尾现象严重。
六、分析与讨论
1. RNA的提取
产量并不多，可能是因裂解样品不充分或RNA沉淀未完全溶解所致。在实验过程中，由于对操作时间的掌握不熟练、操作技巧不完善，留上清与弃上清时令RNA损失了部分，使最终RNA产量不理想。
2. RNA电泳结果
有EB存在时，电泳后28S rRNA和18S rRNA在紫外灯下应看得很清楚，另出现条由tRNA， rRNA和5S rRNA组成的较模糊、迁移较快的带。如果
RNA没有降解，则28S rRNA的亮度应为18S rRNA的2
倍，且这两条带都无弥散现象发生。由图1. 9a可知，RNA 拖尾现象严重，说明RNA已大部分被降解；此外点样孔附近出现红色部分杂质，分析可能有并未除尽的蛋白质，同样影响RNA电泳结果。
在进行实验时，本小组成员未严格戴上口罩并勤换手套，这可能使外源
RNAase进入样品，导致其降解严重。另外，提取出RNA 后本小组未立即将样品放入-70℃保存，也为导致结果不理想的重要原因之一。在最初用氯仿萃取分层的过程中，由于水相吸取过多，掺杂入部分蛋白质杂质而未于后续纯化步骤除尽，RNA条带拖尾严重可能还受该蛋白质影响。
七、总结：
本次试验RNA提取非常失败，从跑胶结果可见其降解严重。虽然大实验无法避免试剂交叉污染的可能性，且电泳用胶的质量也会影响实验结果，但从图
1. 2a，3a，2b等条带较为清晰的小组实验结果可知，琼脂糖凝胶质量以及试剂对结果干扰不大。那么本小组成员在提取过程中的操作一定出现了很大失误。首先口罩、手套应该严格按规定佩戴，提取过程对移液枪等仪器使用需谨慎仔细，尽量避免混入杂质。其次为排除部分杂质影响可对RNA 样品用紫外线分光光度计测定吸光值检验，将有助于结果分析。最后，细节决定成败，我们应汲取教训避免接下来的实
验出现类似问题。
实验二第1链cDNA的合成和模板的验证
一、实验目的
1. 掌握第1链cDNA的合成方法和步骤
二、实验原理
真核生物基因多为断裂基因，编码区不连续，需经转录后加工才能成为成熟mRNA。以真核成熟mRNA为模板合成cDNA，进而获得有连续氨基酸编码的DNA序列，无需转录后加工，即可在原核细胞中表达。
真核生物的mRNA都有PolyA尾巴。引物：Oligo dT。莫洛尼
氏鼠白血病毒逆转录酶以单链RNA为模板，在引物的引发下合成与模板互补的DNA链。
mRNA 反转录生成的cDNA可作为PCR的模板进行扩增称为RT-PCR，RT-PCR比Northern杂交更灵敏，对RNA的质量要求较低，操作简便，它是在转录水平上检测基因时空表达的常用方法。
三、实验材料
1. 材料
徐薯18叶片RNA样品
2. 试剂
① dNTP mixture；
② Oligo (dT) Primer (10 μM)；
③ Total RNA；
④ RNase free ddH2O；
⑤ M-MLV 反转录酶；
⑥ 5×First-strand Buffer；
⑦M DTT；
⑧ Ribonuclease Inhibitor (40 U/μL)
3. 仪器
10μL 和100μL 的移液枪、的EP管、PCR仪等
四、实验方法
1. 在RNase free Microtube 管中配制下列混合液：
dNTP mixture1 μL
*Oligo (dT) Primer (10 μM) 4 μL
Total RNA2 μL
生物技术综合实验报告
实验一工作液的配制、培养基配制、器皿洗涤及灭菌
一、实验目的
掌握各种工作液配制方法；了解植物培养基的构成及配制方法；掌握高温高压灭菌的方法。
二、原理
培养基是植物组织培养的基本条件，同时也是关键因素。
湿热条件(121℃的蒸汽，10分钟)能够有效地杀灭附着在玻璃器皿、器具以及溶液和培养基中的微生物达到灭菌的目的。
三、器具和试剂
灭菌锅，天平，电炉，微波炉，三角瓶，封口膜，移液管，移液器，量筒，烧杯，pH试纸，培养皿，滤纸，Parafilm 封口膜。
琼脂，MS培养基大量元素，无菌水，葡萄糖，2, 4-D，IBA，KT ，1M NaOH及HCl，卡那霉素，头孢霉素，乙酰丁香酮。
四、实验内容
PH调节剂的配制、培养基母液的配制、培养基的配制、各种相关物品的准备
培养基的配制步骤
1、取个干净烧杯，加入1/3-2/3左右的蒸馏水，用移液管取所需的母液加入烧杯。
2、称取定量的蔗糖加入烧杯中并不断搅拌，直到完全溶解，定容。
3、用NaOH或者稀HCL调剂酸碱值。
4、称取定量琼脂糖加入烧杯中，加热煮沸搅拌，待琼脂完全溶解，分装。
5、高压灭菌棉花无菌苗培养基的制备
1、取25 ml MS大量元素母液，称取葡萄糖15g、于1升的烧杯中，定容后调pH值为，加入/l 琼脂煮沸。
2、然后将其分装到100毫升的三角瓶中，每瓶40毫升。
3、用封口膜封口后在灭菌锅中灭菌15分钟。
4、灭菌后臵于水平的工作台上冷却即可。
要求：配制 1L
拟南芥无菌苗培养基的制备
1、拟南芥无菌苗培养基：1/2 MS大量元素+蔗糖10g/L，PH值；加入琼脂高温高压灭菌。
2、%琼脂糖：琼脂糖/100ml 蒸馏水；无菌苗培养基和%琼脂糖均121°高压灭菌15分钟。
3、另准备20套9cm培养皿，灭菌。
要求：配制，装1瓶灭菌，灭菌后培养基倒皿。
五、注意事项
1、为了尽量减少人为的误差，必须严格按实验步骤进行操作，严格按照要求的量来配制工作液、母液及培养基。
2、应当把培养基中的各种成分都写在纸上，加进去一个以后即划掉一个。
3、所有装着培养基的试管、玻璃罐、玻璃瓶和培养皿等都应当清楚地做上标记。
4、每小组的操作的具体事项请参照黑板上贴的任务分组。
5、爱护实验仪器及耗材，小心使用玻璃器皿，合理灭菌，因为灭菌耗时较长。
实验二无菌苗的制备
一、原理
化学灭菌：%升汞(Hgcl2)溶液浸泡10分钟可以对棉花种子等外植体进行灭菌，84消毒液浸泡3分钟可以对拟南芥等小种子外植体进行消毒。物理消毒：紫外灯消毒、酒精灯火焰或高温烧灼5min左右可有效杀死镊子、剪刀等不锈钢操作器具的菌类达到消毒的目的。
二、实验材料、器具和试剂
棉花品种YZ1;拟南芥col-0野生型灭菌锅，天平，电炉，三角瓶，封口膜，镊子，酒精灯，剪刀，移液管，超净工作台。
%升汞溶液，84消毒液，75%酒精
三、实验内容
拟南芥无菌苗培养基倒皿
1. 取上次灭菌好的拟南芥培养基，稍微拧松瓶盖，微波炉煮沸，边煮边摇动，至全部融化。
2. 将上次灭菌好的9cm培养皿分开放臵超净工作台上。
3. 将融化好的培养基分装于培养皿中，将皿至于超净台上吹干.。
共培养培养基的配制
成分数量成分数量
MS大量元素 (20倍） 50 ml 2,4-D (/ ml)1 ml
NH4NO3 (20倍) 50 ml 甘氨酸(1000倍)1 ml
微量元素 (100倍)10 ml KT(/ml)1 ml
铁盐 (100倍) 10 ml 葡萄糖 30g/L
微生素(1000倍) 1 mlPH值肌醇 (100倍) 1 ml
依次加入上述物质，调PH值，然后分装至2个500ml 蓝盖瓶，每瓶加入4g琼脂，灭菌，灭菌后倒皿。
选择培养基的配制
共培养培养基 +卡那霉素50mg/L + 头孢霉素400 mg/L 灭菌后，待培养基凉至60度左右加入，混匀，倒皿。
棉花无菌苗的制备
1、将棉籽用手术剪刀去壳。
2、用%的升汞灭菌13分钟。
3、无菌水冲洗三遍，接种于无菌苗培养基中。
4、28℃条件下暗培养7天。
拟南芥无菌苗的制备
大量法灭菌：将拟南芥种子放入离心管中，加入84消毒液：无菌水=1:1的混合液1ml，上下摇晃灭菌2min，弃消毒液；加入1ml 75%的酒精混匀1min，然后无菌水清洗4次；加入%琼脂糖溶液悬浮种子，用移液枪涂布于拟南芥无菌苗培养基，
吹干，封口。弱光培养两天至种子萌发，转至光照培养室培养两周。
五、注意事项
所有操作均在超净工作台上进行。
六、实验结果
一周后观察无菌苗的生长状况
1、六瓶接种的棉花无菌苗中有一瓶被轻度污染，其余五瓶生长状况良好。
2、拟南芥的无菌苗因涂布不均匀长势一般，幼苗较其他小组要弱小，叶片颜色较深。
实验三愈伤组织的诱导及农杆菌介导的棉花遗传转化
一、实验目的
掌握植物体细胞胚胎发生的基本理论；了解植物愈伤组织在诱导和分化过程中的形态学、细胞学特征；进一步巩固植物离体培养和无菌操作的步骤；掌握植物遗传转化的方法、理论；掌握根癌农杆菌介导的植物遗传转化技术。
二、实验原理
植物细胞全能性：植物的每个细胞都包含着该物种的全部遗传信息，从而具备发育成完整植株的遗传能力。
愈伤组织：
胚性愈伤：呈淡黄色或者黄绿色，质地较均匀；细胞球状或近球状，细胞核大，细胞质浓
非胚性愈伤：呈褐色、白色粉末状或白色、绿色坚硬块
状；细胞一般为长柱状等非规则形状，细胞核小，细胞质较稀。
农杆菌介导转基因的原理：植物细胞在受伤后，创伤分子诱导农杆菌Vir区各种基因的激活和表达，导致T-DNA被剪切，加工，形成T-链蛋白复合体，通过农杆菌和植物细胞的细胞膜，细胞壁进入植胞内，T-复合体上的核靶向序列可引导T-DNA整合到植物基因组。
三、材料与用品
1、实验材料：棉花材料YZ1、农杆菌菌株LBA4404。
2、用具：超净工作台，显微镜，载玻片，天平，三角瓶，封口膜，橡皮筋，镊子，酒精灯，培养皿，滤纸，剪刀，医用手术刀，摇床。
3、药品：诱导、共培养培养基，卡宝品红染色液，MGL 活化培养基，LB培养基，乙酰丁香酮。
四、实验步骤
棉花愈伤组织的诱导及观察
1、愈伤诱导培养基的配制
2、无菌苗的制备
3、无菌苗的切取：选取培养7天左右健壮的无菌苗臵于垫有滤纸的培养皿上，用解剖刀切掉子叶及生长点，切掉胚根及相连的约1/4的下胚轴，余下的下胚轴用作愈伤组织诱导的外植体，用解剖刀将下胚轴切成～小段。
4、外植体接种及离体培养：将切离好的外植体接种于愈伤诱导培养基上，平行放臵，28℃光照培养，每天14小时光照，进行愈伤组织诱导及增殖培养。
5、愈伤组织继代：待培养一个月左右，将增殖后的愈伤组织连同下胚轴切断继代到分化培养基上，进行胚性愈伤组织的分化。
6、愈伤组织形态观察：分别挑取少量非胚性愈伤和胚性愈伤组织，臵于载玻片上，滴几滴清水用镊子捣碎愈伤组织，然后滴加一滴卡宝品红染色数秒钟后，在显微镜下观察比较两者细胞学特征。
农杆菌介导的棉花下胚轴的遗传转化
1、共培养及选择培培养基的配制
2、无菌苗的制备
3、农杆菌的活化：从超低温冰箱内取出保存菌株的甘油管在冰上融化；按1:100的体积加入20ml LB液体培养基里摇菌，28℃暗培养36-48hr；将浑浊的农杆菌液涂布于LB 平皿上，28℃暗培养36-48hr；把培养基表面菌落刮入装有20ml MGL培养基的三角瓶中，28℃、200rpm摇30min；OD 值在之间即可用于侵染。
4、下胚轴与农杆菌共培养：把无菌苗切成~7mm茎段，用镊子夹到经活化的菌液中进行侵染，摇匀，侵染10分钟；倒掉菌液，将下胚轴转入装有滤纸的灭菌培养皿中，吹5分
钟使表面稍为干燥；再将下胚轴分散布于垫有滤纸的共培养培养基中，19-21℃, 暗培养48-60小时结束共培养。
5、选择培养：把经过共培养的下胚轴用镊子转入选择培养基中，培养30天左右继代一次转入相同的选择培养基中。
五、注意事项
1、在切无菌苗时，一定要使用锋利的刀片,尽量做到一刀能切断，避免挤压茎段。
2、无菌苗培养时间不宜过长。
3、从超低温冰箱内取出的甘油管，应尽量减少其在冰箱外的时间，用完后尽快放回冰箱。
4、侵染时下胚轴稍为干燥可以增加农杆菌的吸附。
5、共培养后第一次进行选择培养时应尽量使培养的环境保持干燥，可以减少农杆菌的污染。
6、整个过程均为无菌操作环境。
六、实验结果：
1．锥形瓶与平皿中的下胚轴生长状况均良好，观察到平皿中农杆菌介导转化的下胚轴有发黑的现象，而锥形瓶中诱导的愈伤组织则无发黑现象。
2．两个平皿中的拟南芥均生长缓慢且幼叶发黄，推测原因可能与杂菌感染有关。
生物技术制药实验报告
人表皮生长因子在大肠杆菌中的
表达与纯
第一节引言
表皮生长因子(EGF)概述
生长因子在人体中的信号传导部分起着关键的作用，它可通过与细胞表面的蛋白质受体结合，参与细胞的各种生命活动。生长因子可以是维生素，碱基，多肽等。所研究的表皮生长因子，就是一种人机体细胞合成的一种多肽。在生物体内，每个细胞的生长状态不同，在不同组织中的细胞的表皮生长因子参与生长、增值、死亡等过程。
目前，表皮生长因子已得到广泛应用。在许多公司已经开始研发甚至是生产出EGF，多种疾病的诱发原因很多，我们可以用EGF来进行详细的诊断。之后致病的查出原因，给病人减少心理的压力，带来一线生机。在经过强烈的光刺激后，尤其是激光，人们的眼部会有很大的损伤，最严重的就是眼角膜损伤，无法修复。人体在经过紫外线的照射下皮肤的损伤以及高温、蒸气、火等造成的皮肤大面积与原来的不一样的皮肤。对于这些伤害，我们可使用含有可促进人体表皮细胞的新陈代谢EGF的药膏或者是化妆品，使皮肤变得如初。
在最早研究表皮生长因子的时候就只是证明是多肽，还没有命名。是由Cohen在1960年，在提取神经生长因子时，
意外发现除此种物质以外的一种多肽。多个科学家对其充满好奇心，在之后的十年内，Savage真正的研究清楚，命名此种多肽为表皮生长因子。
表皮生长因子(EGF)的结构与性质
不同的生物中，表皮生长因子的蛋白一级结构不同。研究表明家族成员一般在多于50个氨基酸，而少于80个氨基酸，与我们所熟悉的胰岛素一样，表皮生长因子是由前体加工成的成熟的多肽，在具有生物活性。如人体中的表皮生长因子是由53个氨基酸组成。
整个hEGF分子由两个结构域组成。残基1～33，形成N 一端结构域；34～53为C一端结构域；成熟hEGF的序列位于单链多肽的C一末端附近，由53个氨基酸残基组成，并且其C一端和N一端分别由Arg／Asp ／Arg／His邻接，故成熟的EGF分子，可以经专一性Arg内肽酶的作用，从前体释放。二级结构上存在着反平行β片层结构是EGF骨架的常见结构，N一端和C一端在整个三维结构中不会发生什么变动，维持此结构的是由三个二硫键，因此分子在一定的条件下生物活性表现“顽强”。我们知道同一种酶在不同的生物中有不同的生物效应，同时不同的酶在不同的生物中会有相同的生物效应，hEGF也会有此种现象。hEGF-β和hEGF-γ是hEGF的两种形式，在分子结构和同源性中相似度高，在蛋白中一级结构中即使是在C末端的某个位置上仅仅只有
一个Arg的差别，当它们作用于不同细胞中的同一个受体，在生物体中的作用是一样的。
与许多古细菌中的酶一样如生活在温泉中古细菌，人体表皮生长因子在100℃煮沸达到30 min，仍然能保持结构、活性等稳定性；许多蛋白质在具有强列的催化效率的酶如胰蛋白酶作用下肽链被断掉，而表皮生长因子耐它的消化。EGF 在狭小的活性微环境中，由于常见的丙氨酸、苯丙氨酸和赖氨酸会提供作用基团，表皮生长因子才能与受体结合反应。多肽具有N端和C端，有的在生物活性中不起作用，有的是至少有一段起作用，据研究表明，表皮生长因子结构的两端在细胞的生长中都很重要。
EGF的生物学效应及应用
细胞通过在信号传导的过程中有多种方式包括直接或间接的接触。自分泌或旁分泌是hEGF作用的方式，在生物体内它亦可以与其他的因子结合作用于细胞。EGF生物效应很多，如下所述：
1.来源于人体的不同种组织的上皮细胞为了适应人体的需要，从基因上赋予它很高分裂效率。EGF在其中起着关键性的作用。首先人体的皮肤表层会产生脱皮现象，证明有大量的细胞死亡。同样，皮肤的表面受到伤害在愈合的过程会结痂，新的皮肤又长出来了。EGF在创伤修复中起着功不可没的作用，在肝脏、肠道、角膜、胃等多种组织创伤的恢
复的试验研究取得重大的突破，在临床上已经运用于烧伤、烫伤、创伤及外科手术伤口的愈合，使病人的痛苦少一点。
医疗报告生物医学仪器实验报告
数据采集综合性训练 目录 一、科研训练目的以及内容3 二、科研训练设备3 三、采集系统构成3 四、驱动程序说明5 五、程序框架6 六、代码关键算法说明7 七、实验总结及讨论8 八、专题资料总结11 参考文献17 指导教师：邹远文 材料科学与工程学院 生物医学工程专业 0843015044 王夕雨 一、科研训练目的及内容
1、科研训练目的 数据采集是仪器设计中的关键环节，涉及计算机语言、微机原理、操作系统、数字电路、嵌入式系统、数字信号处理等多门课程的内容；同时要求具备计算机编程、设备器件组装等实际操作能力。通过此项训练，能将多门课程的内容融合，加深学生对课程内容的理解，提升学生实际运用课程知识的能力； 同时为学生进入科研训练和毕业论文阶段，打下工程运用的基础。 2、科研训练内容 1、USB和BIOPAC的AD/DA、数字IO的编程（VC++）和使用 2、练习采集数据存储与管理 3、练习示波器和信号发生器 二、科研训练设备 1、计算机 2、USB数据采集卡和BIOPAC数据采集器 3、示波器和信号发生器 三、采集系统的构成 本次数据采集系统主要是USB数据采集与电脑和示波器数据采集，信号发生器用FG-275/FG-273A。 图1数据采集卡 图2信号发生器 图3示波器 USB数据采集系统的构成如下图1所示。[1]
图4、USB数据采集系统 示波器数据采集系统的构成如图5。泰克TDS3000C系列示波器拥有高达500MHz的带宽，在紧凑的电池供电的设计中提供了经济的性能，这一流行的产品系列现在配有USB主机端口和PC连接软件，同时提供了熟悉的操作和简单的导航功能，您可以用更少的时间学习和重新学习怎样使用示波器，用更多的时间完成手头的任务。[2] 图5、示波器数据采集系统 FG-275/FG-273A函数信号发生器。[3] FG-273A/-275函数信号发生器规格 方波特性： 对称性：±3%或更小(100Hz时) 上升及下降时间：最大100ns(最大输出) 正弦波特性： 失真：1%或更小(100KHz时) 三角波特性： 线性：1%或更小(100KHz时) 电源要求：100/120/220/240VAC,50/60Hz,约20VA 尺寸：240(宽)×64(高)×190(长)mm 重量：1.8kg 特点： ·扫描/函数/脉冲信号产生
生物社会实践报告
生物社会实践报告 实践者：宋继达 所属学校：武汉理工大学 专业班级：生物技术0901班 实践单位：广东省惠州市惠东县平海镇港口国家级海龟自然保护区 实践日期：XX年7月21日——XX年7月27日 实践时间：7天 实践原因：保护区位于家乡港口，地理位置适宜；海龟是港口所特有的海洋动物，身为港口人对之有着特殊的情感；个人的成长经历及兴趣爱好涉及海洋生物和海洋生态方面。 实践目的：增进对海龟保育工作的认识，增强爱护海洋生态环境的观念，加强学习和动手能力，增加社会实践的经验以及完成这次暑期社会实践的作业。 实践内容：到海龟保护区的海龟馆里体验海龟管理员的日常工作：给海龟投喂食物，清洗海龟池，维护海龟馆的清洁卫生，维持游客在海龟馆里的参观秩序，劝阻游客一些不文明的、对海龟有伤害性的不良行为，以及协助海龟管理员完成其他一些工作。 实践结果：虽然此次社会实践为期只有7天，其深入程度也仅仅是体验保护区内海龟管理员工作生活的浅层水平，但
这一个星期的实践的确让我了解了不少关于海龟生活习性和保育方面的知识，以及保护区在建设发展方面面临的问题和艰辛。感谢他们为我提供的实践机会，让我拓展了知识和视野，对海龟这一海洋爬行动物以及海洋生态保育有了更深一步的了解，为以后的学习与就业留下难得的经验与启发。 体会总结：生态环境和物种是这个地球上一旦失去后就难以复得的宝贵财富。港口人民一直以来与海龟为邻，见证了从发现海龟湾、盗挖海龟蛋、捕杀海龟到共同携手保护海龟，与海龟和谐共处的百年历史。作为一个从小认识海龟的港口人，中国大陆乃至亚洲大陆漫长海岸线上唯一的海龟产床的独特之处让我既自豪又担忧。全球的海龟数量在下降，而港口海龟自然保护区近年海龟上岸产卵的情况不容乐观，我国海域的海龟生境和数量形势严峻。海龟保护需要不断努力下去，希望有更多有志于这方面的年轻人投身于这方面，同时向正在为海龟保护付出努力的工作者致敬！ 导语：广东省惠东县港口国家级海龟自然保护区是今天中国大陆18000公里海岸线上最后的一个海龟产床，也是亚洲大陆唯一的海龟自然保护区。1985年6月，广东省渔业行政主管部门批准成立海龟自然保护区。1986年12月，广东省人民政府批准海龟自然保护区晋升为省级保护区。1992年10月经国务院批准晋升为国家级自然保护区，主要保护对象为以国际濒危、国家二级保护动物海龟，及其产卵繁殖栖息
现代生物学实验技术实验报告
现代生物学实验技术实验报告 实验一、超薄切片 一、实验目的 学习掌握常规生物样品前处理技术及样品包埋块的制备技术。 二、实验材料 植物幼嫩叶片、小鼠肝脏细胞 三、实验试剂 2.5％戊二醛、PBS、1％锇酸、30％丙酮、100％丙酮、 Epon812包埋液、蜡油 四、实验器材 离心管、玻璃棒、滴管、移液枪、刀片、镊子、牙签、烘箱、切片机、 五、实验步骤 1、取材固定：从植株上取叶片或者取小鼠肝脏细胞，切取 1mm3左右大小的组织块，立即放入PBS（pH7.2)配制 的2.5%戊二醛中固定1小时。 2、用0.1molPBS缓冲液冲洗三次每次3～5分钟。 3、1％锇酸固定1小时，然后用缓冲液冲洗三次每次3～5 分钟。 4、丙酮脱水：30％－50％－70％－80％－90％－100％－ 100％每级5～10分钟
5、浸透：脱水剂：包埋剂=3：1 1小时 脱水剂：包埋剂=1：3 过夜 6、聚合：45 ℃12h 60 ℃24h 磷酸缓冲液0.2molL-1 PBS 配制 A液：Na2HPO4 .2H2O 35.61g 加DDW 至1000ml B液：NaH2PO4 .H2O 27.6g 加DDW 至1000ml 不同pH磷酸缓冲液的配制 pH 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 A液(ml) 18.8 24.5 30.5 36.0 40.5 43.5 B液(ml) 31.2 25.5 19.5 14.0 9.5 6.5 Epon812包埋液的配制 Epon812树脂20ml DDSA 4.6ml MNA 15.3ml DMP-30 0.8ml
2、支持膜的制备 将一个干净的载玻片垂直放入含有0.3~0.5%氯仿配制的聚乙烯醇缩甲醛制模剂中，放置两三秒后将载玻片垂直取出。用刀片在含有膜的载玻片上划出所需要的正方形，然后将载玻片45度倾斜放入水溶液中，使膜飘在水面上，选取厚薄合适的膜，将膜放在载网上，以备后面用。 3、切片 首先制刀，将玻璃片制成梯形的刀片，以备切片时使用。将包埋块置于显微镜下进行修整，将其修为最上端为正方体。在切片机上进行切片操作，使切下来的样品片漂浮在水槽中。对切下来的样品块进行染色并观察。 六、注意事项 1、取材的时候动作要迅速，组织离体后应将其快速放入 固定液中。并且要尽量减少损伤，减少牵拉或挤压组 织。组织块的大小一般为1mm3。 2、用固定液固定的样品若漂浮在溶液表面，应通过抽真 空的方法让样品沉入溶液中。 3、饿酸为剧毒、极易挥发的试剂，使用时要注意安全。 4、脱水时要逐级脱水，而不能急剧脱水，更换液体时动 作要快，不要让组织离开溶液，否则会在组织内外产 生气泡。
生物医学工程大实验报告
心电检测实验 实验目的 1.复习放大器,滤波器等相关知识, 了解心电测量的原理，并学习用生理信号采集系统记录人体心电图。 2.要求掌握心电测量电路的硬件实现方法，锻炼电路板的焊接与调试能力. 3.学习正常心电图中各波的命名与波形，了解其生理意义。 实验器材 信号发生器，电源，示波器，电机夹，导线若干，电路板一块 实验原理 1.心脏的基本构造和心电图(ECG) 心脏处于人体的循环系统的中心，主要由心肌构成，心肌是可兴奋组织，它的收缩和舒张是人体血液循环的动力；心肌将心脏分隔成左，右心房和心室四个心腔，腔间有瓣膜控制血液在房室间的流动，通过动脉血管将氧和酶等各种营养物质供给全身组织，并将静脉回流带来的组织代谢废物运走。 心脏是自律性器官，有特殊起博心肌细胞和神经传导树支(束)，包括窦房结，结间束，房室结，房室束，左右束支；在起博心肌细胞(窦房结内)的自律作用下，通过房、室、神经束的传导使心肌收缩和舒张完成心脏的博动；另外，参于循环系统调节的有：交感神经，兴奋时通过肾上腺素使心率加快，而副交感神经兴奋时使心率变慢，还
有化学性的体液因素也可影响心脏的博动。 神经细胞元的放电过程已得到实验认证，心脏特殊起博心肌细胞博动和神经传导树支(束)的传导过程都是神经细胞元放电和传导的过程，因此，可通过在人体体表层安放灵敏度很高的电极接受这些微弱的心脏电活动，称为ECG(electrocardiogram)---心电图，早在1903年就发现心电图及基本测量方法；心电图机检查人体的ECG，判断心脏活动正常与否仍是医院目前首选的检查手段。 标准ECG及参数如下： 典型心电图波形 目前ECG的测量技术已很成熟，标准ECG都打印在栅格纸上，标明X方向每格0.04秒，Y方向每格0.1mv.一般来说，P波表征心脏收缩期开始；QRS复合波是心室收缩的结果，指示心室收缩期开始；T波是心室舒张的结果，将延续到下一个P波止. ECG测量基本导联三角形(肢体)：
分子生物学实验报告
分子生物学实验 院系：生命科学与技术学院 专业：生物科学（基地） 班级： 201101班 学号： 姓名： 分子生物学基础实验 分子生物学实验技术已成为生物化学及分子生物学以及相关学科院系教学科研不可缺少的一部分。为提高学生在分子生物学技术方面的动手能力，生物技术综合实验室主要开设常用而基本的分子生物学实验技术。它的内容包括质粒DNA的制备；DNA的重组；PCR基因扩增等等。 实验一质粒DNA的小量制备 一、实验原理 要把一个有用的外源基因通过基因工程手段，送进细胞中去进行繁殖和表达，需要运载工具，携带外源基因进入受体细胞的这种工具就叫载体（vector）。载体的设计和应用是DNA体外重组的重要条件。作为基因工程的载体必须具备下列条件:(1)是一个复制子，载体有复制点才能使与它结合的外源基因复制繁殖；（2）载体在受体细胞中能大量增殖，只有高复制率才能使外源基因在受体细胞中大量扩增；（3）载体DNA链上有1到几个限制性内切酶的单一识别与切割位点，便于外源基因的插入；（4）载体具有选择性的遗传标记，如有抗四环素基因（Tc r），抗新霉素基因（Ne r）等，以此知道它是否已进入受体细胞，也可根据这个标记将受体细胞从其他细胞中分离筛选出来。细菌质粒具备上述条件，它是基因工程中常用的载体之一。 质粒（plasmid）是一种染色体外的稳定遗传因子，大小在1～120kb之间，具
有双链闭合环状结构的DNA分子，主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中。质粒具有自主复制和转录能力，能使子代细胞保持它们恒定的拷贝数，可表达它携带的遗传信息。它可独立游离在细胞质内，也可以整合到细菌染色体中，它离开宿主的细胞就不能存活，而它控制的许多生物学功能也是对宿主细胞的补偿。 质粒在细胞内的复制，一般分为两种类型：严密控制型（stringent control）和松弛控制型（relaxed control）。前者只在细胞周期的一定阶段进行复制，染色体不复制时，它也不复制。每个细胞内只含有1个或几个质粒分子。后者的质粒在整个细胞周期中随时复制，在细胞里，它有许多拷贝，一般在20个以上。通常大的质粒如F因子等，拷贝数较少，复制受到严格控制。小的质粒，如ColE Ⅰ质粒（含有产生大肠杆菌素E1基因），拷贝数较多，复制不受严格控制。在使用蛋白质合成抑制剂－氯霉素时，染色体DNA复制受阻，而松弛型ColEⅠ质粒继续复制12－16h，由原来20多个拷贝可扩增至1000－3000个拷贝，此时质粒DNA占总DNA的含量由原来的2％增加到40％－50％。本实验分离提纯化的质粒pBR322、pUC19就是由ColE Ⅰ衍生的质粒。 所有分离质粒DNA的方法都包括三个基本步骤:培养细菌使质粒扩增；收集和裂解细菌；分离和纯化质粒DNA。采用溶菌酶可破坏菌体细胞壁，十二烷基硫酸钠（SDS）可使细胞壁解，经溶菌酶和阴离子去污剂（SDS）处理后，细菌染色体DNA 缠绕附着在细胞壁碎片上，离心时易被沉淀出来，而质粒DNA则留在清液中。用乙醇沉淀、洗涤，可得到质粒DNA。 质粒DNA的相对分子量一般在106－107范围内，如质粒pBR322的相对分子质量为2.8×106，质粒pUC19的相对分子质量为1.7×106。在细胞内，共价闭环DNA（covalently closed circular DNA，简称cccDNA）常以超螺旋形式存在。如果两条链中有一条链发生一处或多处断裂，分子就能旋转而消除链的张力，这种松弛型的分子叫做开环DNA（open circular DNA，简称ocDNA）。在电泳时，同一质粒如以cccDNA形式存在，它比其开环和线状DNA的泳动速度快，因此在本实验中，自制质粒DNA在电泳凝胶中呈现3条区带。 二、实验目的 1．掌握最常用的提取质粒DNA的方法和检测方法。 2．了解制备原理及各种试剂的作用。 三、实验材料和试剂
《医学免疫学与微生物学》实验报告
［实验名称］:沉淀反应 ［实验目的］:通过单向琼脂扩散测定待测血清Ig 含量 ［实验材 料］: 打孔器 (1) 将溶解后的离子琼脂冷却到4 5 °C ，加入适 当浓度的抗原混 合均匀，吸取3—4毫升加在载玻片上，使其均匀布满载玻片 而又 不流失。 (2) 琼脂凝固后制成凝胶板，然后隔适当距离打孔。 (3) 在孔内滴加待测可溶性抗体。 (4) 将凝胶平板放入带盖瓷盘中，下面垫一湿纱布以保持湿度，置 于3 7 °0恒温箱中2 4小时，观察沉淀环。 单向琼脂扩散是一种定量试验，主要用来测定标本中各种免疫球 蛋白或补体成分的含量。 在孔中加入待测抗体使其向四周扩散，经一定时间后抗体与琼脂 中抗原相遇，在比例适宜处生成白色沉淀环。 沉淀环直径与抗体浓度成正比。根据测试样品沉淀环直径的大 小，可从已知的标准曲线中查出样品中抗体的含量。 实验二 ［实验名称］:间接凝集抑制试验（妊娠试验） ［实验目的］:测定待检尿液中是否含HCG （绒毛膜促性腺激素）以诊断妊娠 ［实验材料］:孕妇尿液、非孕妇尿液、HCG 致敏乳胶抗原、抗HCG 血清、载 实验一 1%离子琼脂、白喉类毒素、白喉抗毒素、载玻片、毛细吸管 ［试验步骤］: ［实验结果］: (沉淀环直径) 测量沉淀环直径: 毫米 ［实验分析］
玻片等 ［试验步骤］: （1）取一片载玻片，标记出左右。 （2）在载玻片左侧加一滴待检尿液，右侧加一滴非孕妇尿液。 （3）在两侧尿液中分别加一滴抗HCG血清，摇动混匀2 —3分钟。 （4）在两侧液滴中分别再加一滴HCG致敏乳胶抗原，摇动混匀2 — 3分钟。 （5）观察判定结果。 ［实验结果］:（凝集和非凝集的描述） 左侧（待检尿液侧）呈现均匀的乳状液状态，无凝集颗粒。间接凝集抑制阳性。 右测（非孕妇尿液侧）出现明显的凝集颗粒。间接凝集抑制阴性。 ［实验分析］:（结合实验原理） 孕妇尿液中的HCG含量显著增高。尿液中的HCG与加入的抗HCG结合, 抗HCG被消耗，使得加入的HCG乳胶抗原不能再与抗HCG结合，不出现乳胶抗原间接凝集反应（凝集被抑制），所以液滴呈现均匀乳状液，为乳胶间接凝集抑制阳性反应。 非孕妇尿液中HCG含量极少，不足以抑制抗HCG与HCG乳胶抗原发生间接凝集反应，所以出现乳胶颗粒的凝集，为乳胶间接凝集抑制阴性反应。
生物医学工程大实验报告
生物医学工程大实验报告 生物医学工程大实验报告实验目的心电检测实验 1.复习放大器 , 滤波器等相关知识 , 了解心电测量的原理，并学习用生理信号采集系统记录人体心电图。 2.要求掌握心电测量电路的硬件实现方法，锻炼电路板的焊接与调试能力. 3.学习正常心电图中各波的命名与波形，了解其生理意义。 实验器材信号发生器，电源，示波器，电机夹，导线若干，电路板一块实验原理 1.心脏的基本构造和心电图 ECG 心脏处于人体的循环系统的中心，主要由心肌构成，心肌是可兴奋组织，它的收缩和舒张是人体血液循环的动力；心肌将心脏分隔成左，右心房和心室四个心腔，腔间有瓣膜控制血液在房室间的流动，通过动脉血管将氧和酶等各种营养物质供给全身组织，并将静脉回流带来的组织代谢废物运走。 心脏是自律性器官，有特殊起博心肌细胞和神经传导树支束，包括窦房结，结间束，房室结，房室束，左右束支；在起博心肌细胞窦房结内的自律作用下，通过房.室.神经束的传导使心肌收缩和舒张完成心脏的博动；另外，参于循环系统调节的有交感神经，兴奋时通过肾上腺素使心率加快，而副交感神经
兴奋时使心率变慢，还有化学性的体液因素也可影响心脏的博动。 神经细胞元的放电过程已得到实验认证，心脏特殊起博心肌细胞博动和神经传导树支束的传导过程都是神经细胞元放电和传导的过程，因此，可通过在人体体表层安放灵敏度很高的电极接受这些微弱的心脏电活动，称为 ECGelectrocardiogram--- 心电图，早在1903 年就发现心电图及基本测量方法；心电图机检查人体的 ECG，判断心脏活动正常与否仍是医院目前首选的检查手段。 标准 ECG及参数如下典型心电图波形目前 ECG的测量技术已很成熟，标准 ECG都打印在栅格纸上，标明 X 方向每格 0.04 秒， Y 方向每格 0.1mv.一般来说， P 波表征心脏收缩期开始； QRS复合波是心室收缩的结果，指示心室收缩期开始； T 波是心室舒张的结果，将延续到下一个 P波止.ECG测量基本导联三角形肢体导联1 右手接电极白左脚接电极红导联3 左手接电极贴在右胸，黑的地电极贴在右胸白电极下18 公分处，红的电极贴在左下与黑电极对称处，此测量法为2 导联 ECG；不同导联接法测量的 ECG波形不同，表征的医学意义也不同；实际上 ECG已经有用12 导联测量的心电图机，24 小时动态 ECG记录仪也是医院常用的仪器 .2.心电信号的电特征分析心电信号的频率范围在 0.05-100Hz 以内，而90的 EEG频谱能量集中在 0.25-35Hz 之间，心电信号频率较低，大量是直流成分。人体信号是一
生物技术实验报告
生物技术实验报告 篇一：生物技术实验报告 组别：第六组 组员：苏琳伟、陈治、陈家和、陈硅 报告人：陈硅 学号：10349069 词汇&释义： Parafilm 封口膜 Chloroform 氯仿（三氯甲烷） Isopropanol 异丙醇 DEPC 焦碳酸二乙酯 TRIZOLa mono-phasic solution of phenol and guanidine isothiocyanate Phenol苯酚 isthiocyanate 异硫氰酸胍 MCS multiple cloning site （polycloning site） 注：MSC是DNA载体序列上人工合成的一段序列，含有
多个限制内切酶识别位点。能为外源DNA提供多种可插入的位置或插入方案。 实验任务： 1. 从猪肌肉纤维中提取RNA; 2. 2对RNA上EGFP基因密码子片段进行RT-PCR扩增; 3. 将经RT-PCR技术扩增的cDNA与插入载体质粒，并将其转化入大肠杆菌进行克隆； 4. 从大肠杆菌中提取含目的基因的载体质粒。 实验目的: 1.掌握提取纯化总RNA的原理和技术； 2.掌握RT-PCR原理和技术； 3.掌握TA克隆原理和技术。 实验原理： A．总RNA提取和纯化 RNA 分离的最关键因素是尽量减少RNA 酶的污染。但RNA 酶活性非常稳定，分布广泛，除细胞内源性RNA 酶外，环境中也存在大量RNA 酶。因此在提取RNA 时，应尽量创造一个无RNA 酶的环境，包括去除外源性RNA 酶污染和抑制内源性RNA 酶活性，主要是采用焦碳酸二乙酯（DEPC）去
除外源性RNA 酶，通过RNA 酶的阻抑蛋白Rnasin 和强力的蛋白质变性剂如异硫氰酸胍抑制内源性RNA 酶。 Trizol试剂是直接从细胞或组织中提取总RNA的试剂，是一种由苯酚和异硫氰酸胍组成的单相溶液它在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性，裂解细胞并释放出RNA,酸性条件使RNA与DNA分离,加入氯仿后离心，样品分成水样层和有机层。RNA存在于水样层中。收集上面的的水样层后，RNA可以通过异丙醇沉淀来还原。在除去水样层后，样品中的DNA和蛋白也能相继以沉淀的方式还原。乙醇沉淀能析出中间层的DNA，在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白。共纯化DNA对于样品间标准化RNA的产量十分有用。 无论是人、动物、植物还是细菌组织，各种样品最大使用量（1ml Trizol），动物组织( 50mg)，植物组织(100 mg)，丝状真菌( 100mg)，动物细胞(5×106～1×107)，酵母(1×107) 。 TRIZOL试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA 的析出。例如，从大鼠肝脏抽提的RNA琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色，可见许多介于7 kb和15 kb之间不连续的高分子量条带，（mRNA和hnRNA成分）两条优势核糖体RNA 条带位于~5 kb (28S)和~2 kb (18S)，低分子量RNA介于0.1 和 0.3 kb之间 (tRNA, 5S)。当抽提的RNA用TE稀释时其
细胞原代培养细胞生物学实验报告
细胞生物学实验报告 细胞原代培养 姓名： 学号： 班级： 专业： 同组成员： 一、实验原理
细胞培养是生物学和医学研究中最常用的手段之一，可分为原代培养和传代培养两种。原代培养是直接从生物体获取组织或器官的一部分进行培养。由于培养的细胞刚刚从活体组织分离出来，故更接近于生物体内的生活状态。这一方法可为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段。同时也为以后传代培养创造条件。 原代培养的方法： 1、组织块法在平皿中用弯头剪把组织尽量剪碎，每个组织块小于1mm3大小。用Hanks 液洗涤2—3次，自然沉淀。用吸管吸去上清液。将组织块贴于培养瓶进行培养。 2、酶消化法将1mm3大小的组织块放入1个三角瓶内加入10—30ml的%的胰蛋白酶。370C磁棒搅拌消化20－30分钟。然后终止消化。用几层无菌纱布过滤。取过滤液，离心800rpm 5—10分钟收集细胞。弃上清，加入带有双抗的培养基，放入培养瓶培养。 取材注意事项： 取材要注意新鲜和保鲜。取材应严格无菌。取材和原代细胞制作时，要用锋利的器械，如手术刀或剃须刀片切碎组织，尽可能减少对细胞的机械损伤。要仔细去除所取材料上的血液（血块）、脂肪、坏死组织及结缔组织，切碎组织时应避免组织干燥，可在含少量培养液的器皿中进行。取材应注意组织类型、分化程度、年龄等，一般来讲，胚胎组织较成熟个体组织容易培养，分化低的较分化高的组织容易生长，肿瘤组织较正常组织容易培养。 二、实验目的 1、理解细胞原代培养原理 2、熟悉细胞原代培养方法与过程 3、了解细胞原代培养的应用 4、独立进行细胞原代培养操作 三、实验材料 手术小直剪刀、眼科直镊子、眼科弯镊子、玻璃平皿、培养瓶、试管、移液管、巴斯德吸管、废液缸、75%酒精棉球、酒精灯。 动物：9-12日龄的鸡胚蛋 四、实验步骤
(完整版)初中生物实验报告单.docx
实验报告单 实验时间年月日（星期）班级学生姓名 实验内容练习使用显微镜 说出显微镜的主要结构的名称和用途。 实验目的练习使用显微镜，学会规范操作显微镜。 尝试使用低倍镜观察到清晰的物像。 实验器材显微镜、写有“上”字的玻片、擦镜纸、纱布。 实验报告单实验时间年月日（星期）班级学 实验内容观察人和动物细胞的基本 学会制作人口腔上皮细胞临时装片。 实验目的用显微镜观察动物细胞的形态结构。 初步学会画细胞结构图。 显微镜、载玻片、盖玻片、0.9%生理盐水、碘液、 实验器材 吸水纸、其他动物细胞的永久装片。 实验步骤 1、取镜安放实 2、对光 3、放置玻片验 标本 步 4、观察 骤 实验步骤 5、收放 结 论 实验过程讨论分析 取显微镜时，左手握 显微镜是贵重仪器，双手取镜是为了。 住，右手托 安放显微镜略偏左的目的是： 住。安放显微镜应略 。 偏。 转动转换器，使低倍物镜对准当外界光源暗时，应选用光圈对准通光孔，同时选 孔。用反光镜。 把要观察的玻片放在 尽量使要观察的标本正对通光孔中央，这样物像容易 上，尽量使要观察的标本正对 在中找到。 中央。 转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓 眼睛应从侧面注视的目的是：避免 。 降，直至为 镜筒上升切忌太快，因为只有在 止，眼睛应从侧面注 位置上，物象才清晰。若镜筒上升太快，极易错过 视。 焦距。 时针转动粗准焦螺旋， 要将视野右下方的物像移到视野中央，则推移装片的 使镜简缓缓上升直到看清物像为 方向是。 止。再转动 “上”字装片在显微镜下呈图像。说明显微镜成像 准焦螺旋，使物像更清晰。 是。 实验过程讨论分析 实验后，把显微镜擦拭干净。 转动转换器使两个物镜。镜 筒降至处，反光镜放在 实 验 成 绩 实验步骤实验过程 为什 ①擦干净载玻片和盖玻片。 ②在载玻片中央，滴一滴 碎屑 实浓度一般是。 抹要均 1、制作人口腔 ③用消毒牙签的一端在口腔 侧壁轻刮几下。 验上皮细胞临时装避免 片。 ④把牙签上附有碎屑的一端， 放在载玻片的水滴中涂抹几下。 步⑤盖上盖玻片。 气泡与 ⑥在盖玻片一侧加在 骤 另一侧用吸水纸吸。 2、是微镜观察 人口腔上皮细胞 实验步骤实验过程讨论分 按生物绘图要求，画出人体口腔上皮细胞的结构 结图，并注明各部分结构的名称。实 验 成 论绩 指导教师： _________________实验教 指导教师： _________________实验教师：_______________
微生物鉴定常用的生理生化试验实验报告
山东大学实验报告2017年12月4日 ___________________________ 科目：微生物学实验题目：微生物鉴定常用的生理生化试验姓名：丁志康 一、目的要求 1.证明不同微生物对各种有机大分子的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的 酶系统。 2.掌握进行微生物大分子水解试验的原理和方法。 3.了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的重要作用。 4.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。 5.了解IMViC反应的原理及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。 二、基本原理 1、生物对大分子的淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用。胞外酶只要为水解酶，通过加水裂解大的物质为较小的化合物，使其能被运输至细胞内。如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、双糖和单糖；脂肪酶水解脂肪为甘油和脂肪酸；蛋白酶水解蛋白质为氨基酸等。这些过程均可通过观察细菌菌落周围的物质变化来证实；淀粉遇碘液会产生蓝色，但细菌水解淀粉的区域，用碘测定不在产生蓝色，表明细菌产生淀粉酶。脂肪水解后产生脂肪酸可改变培养基的pH，使pH降低，加入培养基的中性红指示剂会使培养基从淡红色变成深红色，说明胞外存在着脂肪酶。 2、糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应，在肠道细菌的鉴定上尤为重要。绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源，但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异。有些细菌能分解某种糖产生有机酸（如乳糖、醋酸、丙酸等）和气体（如氢气、甲烷、二氧化碳的等）；有些细菌只产酸不产气。例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气；伤寒杆菌分解葡萄糖产酸不产气，不能分解乳糖；普通变形杆菌分解葡萄糖产酸产气，不能分解乳糖。发酵培养基含有蛋白胨，指示剂（溴甲酚紫），倒置的德汉氏小管和不同的糖类。当发酵产酸时，溴甲酚紫指示剂可由紫色（pH6.8）变为黄色（pH5.2）。气体的产生可由倒置的德汉氏小管中有无气泡来证明。 3、IMViC反应是吲哚试验、甲基红试验、伏-普试验和柠檬酸试验4个试验的首字母缩写。这四个实验主要是用来快速鉴别大肠杆菌和产气杆菌，多用于水的细菌检查。 （1）吲哚试验：某些细菌有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸形成吲哚（靛基质），吲哚能与对二甲基氨基苯甲醛作用生成玫瑰吲哚而呈红色。 （2）甲基红试验：某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进一步被分解成为甲酸、乙酸、琥珀酸等，使培养基pH下降至4.5以下，加入甲基红指示剂可呈红色。如细菌分解葡萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转化为其他物质（如醇、醛、酮、气体和水），培养基pH在5.4以上，加入甲基红指示剂呈橘黄色。本试验常与V-P试验一起使用，因为前者呈阳性的细菌，后者通常为阴性。 （3）伏-普（二乙酰）试验：某些细菌能发生如下转换：葡萄糖→丙酮酸（脱羧）→乙酰甲基甲醇→2，3—丁烯二醇，在有碱存在时氧化成二乙酰，后者和胨中的胍基化合物起作用产生粉
南方科技大学生物小鼠解剖英文实验报告
姓名班级学号实验日期2014.5.21 科目实验名称Mouse Dissection 合作者指导教师成绩 LAB 10: Mouse Dissection Introduction: In biomedical research, animal models are always regarded as indispensable tools. They contribute to the scientific discovery in biology and our understanding of the functions of individual genes, even the mechanism of different diseases. Typically, although mice are different from humankind in size and appearance, they have a distinct genetic similarity. At the same time, mice have an efficient ability to reproduce, so they are important research tools for experiments in the lab. In this experiment, we will exercise to dissect a mouse, so that we can observe the inside of a mammalian body to identify the female and male mice. Learning and recognizing the anatomical structure of mice, including. Materials and Methods: Materials: Operation plate, Scissor, Forceps, Alcohol cotton, Mouse. Methods: [we get a male mouse] Part 1: Observations of external features. Make a table T-1. 1．Having an overhead view, identify the mouse’s head, neck, truck, and tail; observe the dorsal and ventral surfaces. Roughly record what is seen. 2．Observe the thorax which is supported by the rib cage, and the abdomen, and the details of appendages attached to the abdomen. 3．Find the mouth, two external nostrils, two external auditory canals, and anus, which are on the body surface. 4．Have a simply look at the surface of reproductive organ, prepuce, urethral and penis including. And locate the saclike scrotum; feel for the paired testes in the scrotum. Note the rough features. Part 2: Observation of organs and structures inside the mouse. [Open the Ventral Body Cavities, Thoracic Cavity, and Abdominopelvic Cavity in order. We must break the ribs near the attachment to the vertebral column to fold back the upper flaps.] Make a table T-2. 1.Ventral Body Cavities. a. Make a longitudinal incision through the skin with a dissecting scissor, from the neck to the preputial opening. Pierce the body wall below the ribs, with the blades angled upward, so that it won’t damage the internal organs. b. Pull the sides of the longitudinal incision, and look for the diaphragm. Then make two
生物化学实验报告
实验一糖类的性质实验 （一）糖类的颜色反应 一、实验目的 1、了解糖类某些颜色反应的原理。 2、学习应用糖的颜色反应鉴别糖类的方法。 二、颜色反应 （一）α-萘酚反应 1、原理糖在浓无机酸（硫酸、盐酸）作用下，脱水生成糠醛及糠醛衍生物，后 者能与α-萘酚生成紫红色物质。因为糠醛及糠醛衍生物对此反应均呈阳性，故此反应不是糖类的特异反应。 2、器材 试管及试管架，滴管 3、试剂 莫氏试剂：5％α-萘酚的酒精溶液1500mL.称取α-萘酚5g，溶于95％酒精中，总体积达100 mL，贮于棕色瓶内。用前配制。 1％葡萄糖溶液100 mL 1％果糖溶液100 mL 1％蔗糖溶液100 mL 1％淀粉溶液100 mL ％糠醛溶液100 mL 浓硫酸 500 mL 4、实验操作 取5支试管，分别加入1％葡萄糖溶液、1％果糖溶液、1％蔗糖溶液、1％淀粉溶液、％糠醛溶液各1 mL。再向5支试管中各加入2滴莫氏试剂，充分混合。倾斜试管，小心地沿试管壁加入浓硫酸1 mL，慢慢立起试管，切勿摇动。 观察记录各管颜色。 （二）间苯二酚反应 1、原理 在酸作用下，酮醣脱水生成羟甲基糠醛，后者再与间苯二酚作用生成红色物质。此反应是酮醣的特异反应。醛糖在同样条件下呈色反应缓慢，只有在糖浓度较高或煮沸时间较长时，才呈微弱的阳性反应。实验条件下蔗醣有可能水解而呈阳性反应。 2、器材 试管及试管架，滴管 3、试剂 塞氏试剂：％间苯二酚－盐酸溶液1000 mL，称取间苯二酚0.05 g溶于30 mL 浓盐酸中，再用蒸馏水稀至1000 mL。 1％葡萄糖溶液100 mL 1％果糖溶液100 mL 1％蔗糖溶液100 mL 4、实验操作
关于生物技术综合实验报告
关于生物技术综合实验报告生物技术综合实验 甘薯γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)基因的克隆和原核表达 学生：学号： 同实验者： 谷胱甘肽(glutathione, GSH) GSH具有多种重要生理功能, 抗自由基和抗氧化应激作用, 保护细胞膜的完整性等。γ-GCS是植物细胞中GSH生物合成的限速酶, 可以调控GSH 的生物合成量。GSH在生物体抵御冷害、干旱、重金属、真菌等胁迫过程中起着重要作用, 说明γ-GCS也与植物抗逆过程密切相关。 实验一甘薯叶片RNA提取 一、实验目的 1. 了解真核生物RNA提取的原理； 2. 掌握Trizol提取的方法和步骤。 二、实验原理 Trizol 试剂是由苯酚和硫氰酸胍配制而成的单相的快速抽提总RNA的试剂，在匀浆和裂解过程中，能在破碎细胞、降解细胞其它成分的同时保持RNA的完整性。TRIzol的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白，
核酸物质解聚得到释放。苯酚虽可有效地变性蛋白质，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIzol中还加入了8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase。%的8－羟基喹啉可以抑制RNase，与氯仿联合使用可增强抑制作用。异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质并使蛋白质二级结构消失，导致细胞结构降解，核蛋白迅速与核酸分离。β-巯基乙醇的主要作用是破坏RNase蛋白质中的二硫键。在氯仿抽提、离心分离后，RNA处于水相中，将水相转管后用异丙醇沉淀RNA。用这种方法得到的总 RNA中蛋白质和DNA污染很少。 三、实验材料 1. 材料 甘薯叶片，品种为徐薯18 2. 试剂 ①无RNA酶灭菌水：加入%的DEPC，处理过夜后高压灭菌； ② Trizol试剂； ③氯仿； ④异丙醇、75％乙醇； ⑤ TBE缓冲液； ⑥上样缓冲液 3. 仪器
医学分子生物学实验报告
医学分子生物学实验报告
日期：2012-04-14 医学分子生物学实验报告 一、实验名称： 1、质粒的提取 2、质粒DNA的限制性内切酶酶切 3、DNA琼脂糖凝胶电泳 二、实验目的： 1、掌握碱裂解法分离质粒DNA的基本原理和操作要点 2、了解限制性内切酶作用的原理、特点和酶切质粒DNA的试验方法 3、学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术 三、实验原理： 质粒是一种染色体外能够稳定遗传的因子，具有双链共价闭环结构的DNA分子。是染色体外小型（1-200kb）的共价、闭合、环状的双链DNA分子（cccDNA），能自主复制并能稳定遗传的遗传因子。 碱裂解法利用宿主菌巨大线状染色体DNA与相对较小的闭环双链质粒DNA的结构的差异来提取质粒DNA。碱变性DNA时，线状基因组DNA变性充分而质粒DNA处于拓扑缠绕的自然状态而不能彼此分开。当去除变性条件时（酸中和），质粒DNA迅速准确配置重新形成完全天然超螺旋状分子，而难于复性的长链线状的基因组DNA则与破裂的细胞壁、细菌蛋白相互缠绕成大型复合物，被SDS包盖，当K+取代Na+时这些复合物会从溶液中沉淀下来，附在细胞碎片上一起被离心除去。 质粒检测：(1)电泳检测：质粒电泳一般有三条带，分别为质粒的超螺旋、开环、线型三种构型；（2）吸光值检测：采用分光光度计检测260nm、280nm波长吸光值，若吸光值260nm/280nm的比值介于1.7－1.9之间，说明质粒质量较好，1.8为最佳，低于1.8说明有蛋白质污染，大于1.8说明有RNA污染。 Ⅱ型酶识别的DNA序列一般含有4～6个核苷酸。有的在识别顺序的对称轴上对双链DNA 同时切割产生平末端；有的在识别顺序的双侧末端DNA双链产生粘性末端。Ⅱ型限制性内切酶需要Mg2+激活，大部分Ⅱ型酶所识别的序列具有反向对称的结构，或称为回文结构。质粒DNA通常都具有一个或多个限制性内切酶酶切识别序列，可被相应限制性内切酶切出相应数量的切口，从而产生相应数量的酶切片断。本实验采用的EcoRⅠ和Hind的识别序列和酶切位点分别为 GAATTC 和AAGCTT CTTAAG TTCGAA DNA在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。 核酸为两性分子，在pH3.5时，整个分子带正电； pH8左右时，整个分子带负电。 在碱性环境下，核酸分子之糖-磷酸骨架中的磷酸基团，是呈离子化状态的，把这些核酸分
生物制药综合性实验实验报告
广东药学院 基因工程（跨课程）综合性实验论文 姓名 班级 学号 指导教师 广东药学院 生命科学与生物制药学院生物制药研究所
目录 摘要 (2) 前言 (3) 一、材料与方法 (3) 1.1 材料 (3) 1.1.1 重组蛋白质药物单元的实验材料 (3) 1.1.2重组DNA药物单元的实验材料 (3) 1.2 方法 (4) 1.2.1 重组蛋白质药物单元 (4) 1.2.1.1 工程菌构建（已由老师完成） (4) 1.2.1.2 工程菌表达筛选 (6) 1.2.1.3 制备IL-18工程菌甘油种 (8) 1.2.1.4 GST工程菌生长曲线分析 (8) 1.2.1.5 GST工程菌表达影响因素试验 (8) 1.2.1.6 表达进程分析 (9) 1.2.1.7 凝胶扫描分析 (9) 1.2.1.8 发酵工艺（观摩） (9) 1.2.2 重组DNA药物单元 (9) 1.2.2.1 质粒TCRVα12.2-Vβ7.1-EYFP的大规模制备 (9) 1.2.2.2 TCR质粒-脂质体复合物制备与分析 (10) 1.2.2.3 TCR体外转染活性检测 (11) 1.2.2.4 TCR转染体内试验 (12) 二、结果与讨论 (12) 2.1 重组蛋白质单元结果与讨论 (12) 2.1.1 IL-18工程菌表达筛选SDS-PAGE (12) 2.1.2 GST工程菌生长曲线分析 (14) 2.1.3表达影响因素试验 (15) 2.1.4 表达进程试验 (16) 2.2 重组DNA药物单元结果与讨论 (18) 2.2.1质粒阴离子交换层析纯化 (18) 2.2.2 质粒柱层析样品琼脂糖电泳分析 (19) 2.2.3 质粒-脂质体复合物制备 (20) 2.2.4 TCR转染基因表达荧光检测 (20) 2.2.5 TCR体外转染活性检测 (21) 2.2.6 TCR转染体内试验 (23) 三、小结 (25) 致谢 (25)
七年级生物实验报告单_共10篇.doc
★七年级生物实验报告单_共10篇 范文一：七年级生物上册实验报告单七年级生物实验报告册2015年秋季上学期 学校三台花园初中班级七年级姓名 目录 一、调查校园、公园或农田的生物种类.............................................2二、非生物因素对某种动物影响......................................................3三、练习使用显微镜 (4) 四、观察植物细胞........................................................................5五、观察动物细胞 (6) 六、人体的基本组织........................................................................7七、观察草履虫 (8) 八、裸子植物和被子植物的种子...................................................9九、种子萌发的环境条件 (10) 十、植物茎内水分的运输...................................................11十一、观察叶片的结构 (12) 一、调查校园、公园或农田的生物种类实验报告 年级班实验人：组次：试验时间： 实验名称：调查校园、公园或农田的生物种类 实验目的：1、尝试调查的方法，初步学会调查记录 2、描述身边生物和生活环境
实验器材：调查表、笔、望眼镜、放大镜实验设计： 1、选择调查范围。校园、公园或农田 2、分组。8人一组，确定组长 3、设计调查路线。选择生物多、环境变化多得路线。 4、调查记录。 5、归类。 6、进行整理，系在笔记本上。 7、汇报调查结果。 二、非生物因素对某种动物影响实验报告 年级班实验人：组次：试验时间： 实验名称：非生物因素对某种动物影响 实验目的：影响鼠妇分布的环境因素实验器材：10只鼠妇、湿土、铁盘（塑料盘、纸盒）、纸板、玻璃板实验设计： 1.取一个方形的月饼盒，清洗干净，用记号笔在盒内画一条中线。【已做】 2.将10条大小形同，健康状况良好的黄粉虫放入一个纸杯，然后倒扣在月饼盒中线中间静置2分钟。绝对保持安静，不要大声说话和拍打桌子（为什么？），待黄粉虫适应一下环境。 3.2分钟后拿走纸杯，让黄粉虫自由活动，然后迅速用黑卡纸将月饼盒的一半遮起来，另一半有光线照射。明暗反差越大越好。 4.从黄粉虫自由活动算起，每隔一分钟统计一次明处和暗处的黄粉虫数目。共统计10次填入下表。 三、练习使用显微镜实验报告 年级班实验人：组次：试验时间： 实验目的：实验器材：实验设计： 1、_____：右手拿镜臂,左手托住镜座,放置于身体正前方偏左侧； 2、______：从镜头盒取出目镜和物镜,安装在镜头上；（拿物镜时手拿橡胶部位） 3、对光:转动转换器和遮光器,使物镜和遮光器较大孔对准通光孔,调节________使镜筒下降适当距离，转动__________，直到从目镜中看到一片白亮的视野。 4、放装片并固定：将永久玻片标本(有盖玻片一面向上)观察部分正对通光孔，压片夹固定； 5、观察：调节粗准焦螺旋使物镜与玻片靠近（下降过程眼睛注视物镜），通过目镜观察，_________调节粗准焦螺旋，使镜筒上升，直到看清物像，最后调节___________，使物像更加清晰。