农药生物测定实验指导书

供试昆虫：棉铃虫 3 龄幼虫；供试药剂：90%辛硫磷 三、仪器及用具
微量点滴器、分析天平、培养皿、滤纸、镊子、淀粉糊、烟叶等。 四、方法及步骤 1．药剂配制：将 90%辛硫磷用丙酮配制成 5 个系列浓度的丙酮药液：5.5、5.0、 4.5、4.0、3.5mg/ml。 2．试虫准备：取饥饿 12 h 试虫 72 头，在天平上逐头称重，放入垫有湿滤纸的 培养皿中，并在皿底编号。 3．夹毒叶片的制备：将干净叶片用打孔器打制成直径 0.5cm 的圆叶片，用微量 点滴器将不同浓度丙酮药液分别定量（2 uL）点滴在叶片上，待丙酮挥发后，用 淀粉糊涂在未点药叶片上，用镊子移于带药叶片上，用手指将上、下两张叶片粘 合制成夹毒叶片。另以涂有淀粉糊的无毒叶片作对照。每浓度制作 12 张夹毒叶 片，共 72 张。 4．饲喂：将带有不同浓度的夹毒叶片分别放入培养皿内饲喂棉铃虫，每皿放 1 片（1 皿+1 叶+1 虫）。 5．结果检查：饲喂一定时间（一般 2-4 h）后进行检查，凡吃完夹毒叶片的，以 无毒新鲜叶片继续饲喂，未吃完夹毒叶的就弃去此虫，不计入试验虫中。24 h 后，根据试虫取食面积、单位面积上着药量及试虫体重，求出每头试虫单位体重 受药量（µg/g），填入表 1 中。 6．致死中量的计算：按单位体重受药量自小到大顺序排列（表 2），并注明各号
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于横座标，与直线相交，再从交点处一垂直虚线与横轴相交，此点即为致为致死 中量的对数值。查反对数得致中量（LD50）值。
五、作业 1．绘制药量对数——死亡率机率值毒力曲线，求出供试药剂的致死中量。 2．为什么要以致死中量或致死中浓度作为比较药剂毒力的标准？ 3．在实验过程中那些地方容易出误差，如何克服？
农药生物测定实验指导书
（制药、植保专业用）
河南农业大学农药学研究室 2013.05.13
前言
农药生物测定实验是本课程教学过程中的一个实践性很强的教学环节。通过 对该课程学习，使学生通过学习理论和实践，掌握杀虫剂、杀菌剂、除草剂、植 物生长调节剂及杀线虫剂的室内生物测定的基本理论和基本技能，掌握各类农药 生物测定结果的评判和统计分析方法，以便在农药研究、生产和应用中能够正确 合理地评价农药的活性，为科学合理使用农药提供依据。
入表中。
每头试虫受药量（微克）=每微升药液中含药剂微克数×每头试虫受药微升
数
单位试虫受药量（μg 克药量/g 虫体 每头试虫受药量（μg）
重）=
试虫平均体重（g）
四、计算致死中量（LD50） 根据测定结果，在座标纸上以单位体重受药量（或每头受药量）为横座标。
以校正死亡率为纵座标，定出各单位体重受药量（或每头受药量）的校正死亡率
表 1 杀虫剂触杀毒力精密测定原始数据记录表
供试药 剂浓度
每微升药液含有药 剂
µg/mL
每头试虫接 试虫平 单位虫体重
受药量 µg/头 均
接受药量
克）
体重（g） (µg/g)
死亡率 %
校正死亡 率
（%）
对照
3
供试药 剂浓度
表 2 杀虫剂触杀毒力精密测定数据换算表
单位体重受药量或每头试虫受 药量
(微克/克体重或微克/头)
各点，连接各点。得药量——死亡率毒力曲线，呈 S 形。为了准确的求出致死中
量，应将 S 形曲线转换为直线，即将单位体重药量（或每头受药量）换算为对数
值（查对数表），校正死亡率换算成机率值（查死亡率与机率值换算表）并记载
于表中，以药量对数值为横座标，死亡率机率值为纵座标，定机率值与对应的各
点，用透明尺绘一直线通过各点或平分各点。在纵座标机率值 S 处引一虚线平行
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②粘虫：选取健康的 3—4 日令的雌成螨，用小毛笔挑起雌成螨，将其背贴 在粘胶上，注意螨足、触须及口器不要被粘着，每张玻片粘成螨 20-30 头，分三 行排列，在玻片上的另一端写上农药种类及浓度等。
③饲虫：将上述贴有雌成螨的玻片，放在干净无毒的塑料盒（或培养皿）内， 并垫上湿滤纸保湿，盖上盖，置室温为 25℃条件下培养。
度：0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0μg/μL 等。
2．称重：将选好的试虫，在分析天平上称重，每个浓度为一个处理，每处
理 10 头试虫，重复 3 次，将每 10 头试虫放在干净培养皿内，待处理。
3．点滴：根据试虫大小确定点滴药液量，一般以试虫接受药液不从体壁上
流失为宜。黄斑皮蠹 4 令幼虫每虫点滴 0.5 uL 于幼虫胸部背板处，各处理试虫
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实验三 杀虫剂胃毒毒力精密测定——夹毒叶片法
目前常用的杀虫剂胃毒毒力测定试验方法是夹毒叶片法，在两张叶片中间均 匀地放入一定量的杀虫剂后饲喂目标昆虫，按吞食的叶片面积计算食药量。适用 于咀嚼式口器昆虫。 一、实验目的：
熟练掌握胃毒毒力精密测定技术——叶片夹毒法，学习计算致死中量的方 法。 二、实验材料
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实验一 杀虫剂触杀毒力精密测定（微量点滴法）
室内比较精确的触杀毒力测定方法是点滴法和药膜法。本实验采用点滴法 （topical application）。是将一定量农药丙酮液点滴在虫体的一定部位上，药剂自 体壁进入体内。
一、实验目的： 学习和掌握触杀毒力精密测定技术——微量点滴法：绘制药量（或浓度）—— 死亡率毒力曲线，再转换成药量（或浓度）对数——死亡率机率值直线。求出致 死中量（LD50）或致死中浓度（LC50）；明确杀虫剂杀虫毒力表示方法的意义和 应用。 二、实验材料： 试虫：黄斑谷蠹 4 令幼虫。 药剂：辛硫磷、丙酮等。 仪器及用具：分析天平、培养皿、容量瓶、镊子、小试管及试管架、移液管、 微量点滴器等。 三、实验方法及步骤： （一）试验前的准备工作 1．试虫的移取： 取大小均匀一致 4 令黄斑皮蠹幼虫放入培养皿，每皿 10 头，为一个处理。 每个处理重复 3 次，分别在分析天平称重，求出平均体重。备用。 2．称药配药： 将待测药剂小心地移入洁净干燥的称量瓶中，在分析天平上准确称取一定量 药剂，放入小烧杯内，加少许丙酮溶解，再移入容量瓶中摇动，然后加入丙酮准 确至刻度。摇匀即为药液，备用。 3．微量点滴器的质量检定，根据说明书检查点滴仪是否服合质量要求。并 按试验要求的容量放到适当刻度，练习使用，或用毛细管微量点滴器，检查是否 畅通。 （二）预备试验
⑦检查：经 24 h 后，在双目解剖镜下检查死亡数及存活数。以小毛笔轻轻 触动螨足或口器，不动者即为死亡。
五、试验数据的处理 根据测试结果，如对照组有死亡，先求校正死亡率。查表转换为死亡率机率 值，将药剂的有效成分百分浓度转化为对数值，求出直线回归方程式 y=a+bx， 并从直线回归方程中求出 LC50 值。
本实验指导书共有 10 个实验，计划 20 学时，主要涉及农药室内活性测定、 数据统计分析方法及报告撰写方法等。为了减少与教课书的重复和强调学生的动 手能力，在内容的编写上，重点突出试验操作部分，理论知识设计相对较少。同 时为了培养学生独立完成实验的能力，不仅在课堂上要求每位学生都要动手实 验，而且在试验报告中要进行总结和分析。
④镜检：经 1 h 后用双目解剖镜检查每个雌螨。如有死亡个体应挑出弃去， 重新粘上健康的雌螨。
⑤浸药：将粘有雌螨的玻片一端浸人待测的不同浓度的药液中，并轻轻摇动 玻片，浸 5s 后取出，用吸水纸吸去附在螨体及粘胶上的药液；以蒸馏水浸 5 秒 钟为对照组。
⑥再培养：不同浓度处理的玻片，分别放在不同编号的塑料盒（或培养皿） 内，置于 27℃条件下培养；
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为确定合适的施药浓度（或剂量）（要求试虫死率亡分布在 16-84%范围内），
在正式试验前，必须先用几个浓度或剂量（范围较大）进行试点滴，根据 24 h
观察的死亡结果，确定最合适的点滴浓度，预备试验所用试虫可减少一半左右。
（三）正式试验步骤
1．药液的配制：根据预试结果，将容量瓶中的母液，用丙酮稀释成 5 个浓
药量对 数值
校正死亡率 (%)
死亡 率机 率值
LD50
对照
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实验二 杀虫剂触杀毒力精密测定——玻片浸渍法
玻片浸渍法（slide-dip method）是联合国粮农组织 1980 年推荐测定叶螨的 统一方法。适用于测定雌成螨，精确度高，但操作技术要求高，很难避免试虫吞 食药液产生胃毒作用干扰。
一、实验目的 学习和掌握测定叶螨触杀毒力的基本操作技术和方法。 二、实验材料 供试药剂：10%吡虫啉可湿性粉剂等。 试虫：蚜虫。 仪器及用具：恒温箱，双目解剖镜，培养皿，双面胶带，载玻片，150 ml 小烧杯，小摄子，滤纸等。 三、测定前的准备工作 1．饲料植物的准备 根据测试叶螨的不同种，决定栽培植物品种。 2．待测叶螨的采集和繁殖 从地里采集的叶螨放入采集器中，注意不让阳光直接照射，带回室内先清除 天敌，然后用小毛笔挑取开始产卵的雌成螨，接种在已备好的饲料植物上产卵繁 殖。 采集的饲料植物，于接种繁殖前，要细心进行净化，清除其它害螨，养虫室 内温度保持 25℃，相对温度 85%，光照 14-15 小时为宜。 用细毛笔在饲料植物上挑取整齐一致的第二代雌成螨进行测试，分别稀释 2000×、4000×、6000×、8000×、1000×成 5 个浓度，每个浓度重复 3 次，每 个重复 30 头，共需 450-540 头雌成螨。 3．测试药剂的配制：用蒸馏水按等级数将待测农药稀释成 5 个浓度，每个 浓度需配 100 毫升药液，分别放入 150 毫升的小烧杯内，备用。 四、方法及步骤： ①贴双面胶：先将双面胶带 Double (Sided adhesive tape)剪成二厘米长，贴在 载玻片的一端，然后用小镊子夹起粘胶上的纸片。
的点药液量应一致。先做对照（点滴丙酮）再从药剂浓度低浓度至高浓度依次点
滴，处理完毕后，给一定量新鲜饲料，置于 25-27 ℃恒温条件下培养。
4．结果观察与统计：24h 后观察记载试虫死活反应，计算死亡率及校正死亡
率，将结果记入表中。
为求得供试药剂的致死中量，需要根据用药浓度及体积求出每头试虫受药量
（μg），并换算出单位虫体重的受药量（μg 药量/g 虫体重），将换算结果一并填
本实验指导书是在过去实验教学的基础上，参照一些新的实验技术编写的， 但由于时间仓促，难免有不妥和不完善之处，有待实践过程中进一步改进和提高。
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目录
实验一 杀虫剂触杀毒力精密测定（微量点滴法）................................................ 1 实验二 杀虫剂触杀毒力精密测定——玻片浸渍法................................................ 5 实验三 杀虫剂胃毒毒力精密测定——夹毒叶片法................................................ 7 实验四 杀虫剂熏蒸毒力测定（三角瓶熏蒸法）.................................................. 10 实验五 杀虫剂拒食活性测定................................................................................ 12 实验六 杀菌剂生物活性测定-生长速率法............................................................ 14 实验七 杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法.................................................... 17 实验八 孢子萌发法杀菌剂毒力测定.................................................................... 19 实验九 除草剂生物活性测定（种子发芽测定法-培养皿滤纸法） ...................... 21 实验十 除草剂生物活性测定方法——植株生长量测定法.................................. 23
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源自文库
试虫活与死，整理完后可分三组，第一组是生存组；第二组为中间组，有死有活； 第三组因取食药量多，故全部死亡。若出现三组情况，说明实验成功。如缺第一 组，说明试虫取食药量偏低，应提高试虫取食药量。第一组及第三组不参与致死 中量计算，虫数越少越好。中间组应从第一头死亡开始到最后一头活虫为止，中 间组是求致死中量的范围，所以虫数越多越好。