水处理生物学实验

刷，以免损坏网格刻度；洗净后自行晾干或吹风机吹 干。
实验结果
测定你所制备的样品的含菌量。
A表示五个中方格中的总菌数；B表示菌液稀释倍数
油
镜
2）将啤酒酵母测定结果填入下表
测 定 次 数 1 目镜测微尺 每格代表的 长度/um 目镜测微 尺格数 宽 长
宽度 /um
目镜测微 尺格数
长度 /um
菌体大 小范围 /um
2
3
4 5
6 7 8 9 10
（二）酵母菌的显微镜直接计数
血球计数板的构造
血球计数板是一块特制的载玻片，其上由4条槽构成3个平台；中
观察基内菌丝、气生菌丝、孢子丝的卷曲状况，以及
分生孢子的形状，并绘图说明。
（二）霉菌的形态观察
直接制片观察法
在载玻片中央加一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液； 用解剖针挑取少量已产孢子的霉菌菌丝，先用50％乙
醇洗去脱落的孢子，再放在载玻片的染液中(青霉、曲 霉取菌丝时需连同培养基一起挑取)；
用解剖针小心分散菌丝，盖上盖玻片； 臵低倍镜或高倍镜下观察。
目的要求
学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简单
染色法；
初步认识细菌的形态特征； 巩固显微镜（油镜）的使用方法和无菌操作技术。
基本原理
借助物理因素（如：细胞及细胞物质对染料的毛细现
象、渗透、吸附作用等）和化学因素（如：正负离子 之间的相互吸引等）的作用而进行的。
实验器材
菌种
思考题
镜检时，你如何区分放线菌的基内菌丝和气生菌丝？ 你主要根据哪些形态特征来区分四种不同的霉菌？
实验三
油镜的使用、细菌的单染色及革兰氏染色
（一)、油镜的工作原理
增加照明强度
当光线由反光镜通过玻片
与镜头之间的空气时，由 于空气与玻片的密度不同， 有些光线会因折射或全反 射，不能进入镜头，降低 了视野的照明度；若中间 的介质是一层油（其折射 率与玻片的相近），则几 乎不发生折射，增加了视 野的进光量，从而使物象 更加清晰。
察氏琼脂培养基
溶液或试剂
0.1%美蓝染色液，乳酸石碳酸棉蓝染色液,50% 乙醇
仪器或其他用具
显微镜，盖玻片，载玻片，接种环，解剖针等。
（一）放线菌的形态观察
扦片法
倒平板→取孢子划线接种→无菌操作将灭菌的盖玻片
以大约45℃扦在接种线上→28℃倒臵培养3-5d →取 培养后的盖玻片直接镜检或用0.1%美蓝对盖玻片染 色后观察
注意事项
取样时先要摇匀菌液； 加样时计数室不可有气泡； 一般样品稀释度要求每小格内约有5-10个菌体为宜；
每个计数室选5个中格（4个角和中央）计数；
位于格线上的菌体一般数上不数下，数右不数左； 若芽体大小达到母细胞的一半，则作为两个菌体计数。 血球计数板使用完毕，用水冲洗干净，切勿用硬物洗
间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各有一个 方格网。每个方格网共分9个大方格，中间的大方格即为计数室。
计数室的刻度有两种规格：一种是一个大方格分成16个中方格，
而每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个大方格分成25个 中方格，而每个中方格又分成16个小方格。但无论哪种规格，每 个大方格都由400个小方格组成。
（二）光学系统 接目镜（目镜） 接物镜（物镜） 低倍镜（10×） 高倍镜（40×） 油镜（100×） 聚光镜 虹彩光圈 反光镜
增加显微镜的分辨率
显微镜的放大倍数=物镜放大倍数×目镜放大倍数
显微镜的分辨率：显微镜能辨 别两点之间的最小距离的能力。 D=λ/2NA=λ/2n·sin(α/2 ) D：分辨率 NA：物镜的数值孔径值 ：可见光的波长（平均 0.55m) n: 物镜和被检标本间介 质的折射率 ：镜口角（即入射角）
目的要求
观察酵母菌的形态及出芽生殖方式； 学习区分酵母菌死活细胞的实验方法； 观察曝气池中的微生物形态
基本原理
美蓝是一种无毒性染料.氧化型呈现蓝色,还原 型呈现无色.用美蓝对酵母的活细胞进行染色,代谢 活力强的细胞具有较强的还原能力,能使美蓝由蓝色 的氧化型变为无色的还原型.因此,具有还原能力的 酵母活细胞为无色,死细胞或代谢能力弱的衰老细胞 为蓝色.
菌体大小测定
取下镜台测微尺，换上酵母菌水浸片，在高倍镜下测定
酵母菌的长和宽。
选择有代表性的10个细胞进行测定，取平均值。
实验结果记录
1）将目镜测微尺校正结果填入下表 接目镜放大倍数：——
接物镜 低倍镜 高倍镜 接物镜倍数 目镜测微 尺格数 镜台测微 尺格数 目镜测微尺每格代表 的长度 /um
大肠杆菌约24h营养琼脂斜面培养物 枯草芽孢杆菌12-18h营养琼脂斜面培养物
藤黄八叠球菌约24h营养琼脂斜面培养物
染色剂
草酸铵结晶紫染液
番红染液
仪器或其他用具
显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、无菌水等。
涂 片 干 燥 固 定 染 色 水 洗 干 燥 镜 检
操 作 步 骤
实验结果
根据观察结果，绘出细菌形态图。
（一）酵母菌大小的测定
安装目镜测微尺
校正目镜测微尺
将镜台测微尺刻度面朝上放在显微镜载物台上。 分别在低、高倍镜、油镜下用镜台测微尺校正目镜测微尺
计算
镜台测微尺：将1mm等分为100小格，每小格长0.01mm
（即10μm）。
目镜测微尺每格长度（μm）=（两重合线间镜台测微尺格
数×10）/两重合线间目镜测微尺格数
实验器材
菌种
红酵母 啤酒酵母 曝气池活性污泥混合液 溶液或试剂 0.1%吕氏碱性美蓝染色液
仪器或其他用具
显微镜，盖玻片，载玻片，滤纸，擦镜纸。
（一）酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别
制片
在载玻片中央加一滴0.1%美蓝→取菌少许→混匀→盖
上盖玻片→静臵3min或0.5h
观察
用高倍镜观察酵母的形态和出芽生殖 根据颜色鉴别死活细胞
每个大方格边长为1mm，则每个大方格的面积为1mm2，盖上盖
玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容 积为0.1mm3。
制 备 适 当 浓 度 的 菌 悬 液
取 洁 净 的 血 球来自百度文库计 数 板
盖 上 盖 玻 片
加 样 品
静 臵 5 分 钟
用 高 倍 镜 计 数
设5个中方格的总菌数为A，菌液稀释倍数为B 计数板为25个中方格： 1ml菌液的总菌数=A/5×25×104×B 计数板为16个中方格： 1ml菌液的总菌数=A/5×16×104×B
增加显微镜的分辨率： D=λ/2NA=λ/2n·sin(α/2 ) D：分辨率 NA：物镜的数值孔径值 ：可见光的波长（平均 0.55m) n: 物镜和被检标本间介 质的折射率 ：镜口角（即入射角）
显微观察
低倍镜观察 高倍镜观察 油镜观察
在待观察的样品区域滴加香柏油，从侧面注视，用
绘图说明四种霉菌的形态特征(有无横隔)。
根霉：假根、匍匐菌丝、孢囊梗、孢子囊及孢子囊孢子
毛霉：菌丝、孢囊梗、孢子囊及孢子囊孢子
青霉：菌丝、分生孢子梗、帚状分支小梗及分生孢子
曲霉：菌丝、足细胞、分生孢子梗、初生小梗、次生小梗、顶囊、分 生孢子
实验结果
绘图说明你所观察到的放线菌和霉菌的形态特征。
目镜测微尺是可放入目镜内的圆形小玻片，精确等分50 小格或100小格。由于不同显微镜或不同目镜和物镜组合 放大倍数不同，目镜测微尺每小格所代表的实际长度也不 一样。因此，测量前需先用镜台测微尺进行校正。
球菌以直径表示大小；杆菌用宽×长表示。
实验器材
菌种：啤酒酵母 仪器：显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、血球计数板
活细胞：无色；死细胞：蓝色
（二）曝气池中微生物的形态观察
在载玻片中央加一滴活性污泥曝气池混合液→打散混匀→ 盖上盖玻片→低倍镜观察→高倍镜观察→绘出所观察到的 微生物形态
实验结果
绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征。
分别绘出你在低倍镜、高倍镜观察到的菌胶团、原生动物、 藻类等的基本形态。
思考题
粗调节器将镜筒小心地降下，使油镜浸在镜油中。
显微镜用毕后的处理
上升镜筒，取下载玻片； 用擦镜纸拭去镜头上的镜油，然后用擦镜纸沾取少量
乙醇乙醚洗液擦去镜头上残留的油迹，最后用干净的 擦镜纸擦去残留的乙醇乙醚洗液；
用擦镜纸清洁物镜及目镜，用绸布清洁显微镜的金属
部件；
将镜体各部分复原。
（二）简单染色法
显微镜用毕后的处理
上升镜筒，取下载玻片； 用擦镜纸拭去镜头上的镜油，然后用擦镜纸沾取少量
二甲苯擦去镜头上残留的油迹，最后用干净的擦镜纸 擦去残留的二甲苯；
用擦镜纸清洁物镜及目镜，用绸布清洁显微镜的金属
部件；
将镜体各部分复原。
五、思考题
使用显微镜时哪些地方须特别？
二、酵母菌、曝气池中微生物等形态观察
实验报告格式
1、实验目的 2、实验原理 3、实验仪器、溶液试剂 4、实验步骤 5、实验结果（如绘图、列表等） 6、思考题
实 验 内 容
显微镜的使用及酵母菌、曝气池中微生物等形 态观察 放线菌、霉菌的形态观察
油镜的使用、细菌的单染色和革兰氏染色
微生物大小测定、显微镜直接计数法 培养基的制备及灭菌 水体中细菌总数测定与大肠菌群生理生化反应
思考题
你认为在制备细菌染色标本时，尤其应该注意哪些环
节？
为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察？
如果你的涂片未经加热固定，将会出现什么问题？如
果加热温度过高、时间太长，又会怎样呢？
（三）革兰氏染色法
目的要求 学习并初步掌握革兰氏染色法； 了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重 要性。
四、显微镜的使用方法
观察前的准备
显微镜的安臵 光源调节 根据个人情况，调节双筒显微镜的目镜
右眼看清
调节左目镜的视度调节圈
扳动镜管，调节至瞳孔间距
显微观察
低倍镜观察 高倍镜观察（同焦现象） 油镜观察
在待观察的样品区域滴加香柏油，从侧面注视，用
粗调节器将镜筒小心地降下，使油镜浸在镜油中。
实验器材
菌种
枯草芽孢杆菌12-18h营养琼脂斜面培养物 大肠杆菌约24h营养琼脂斜面培养物 藤黄八叠球菌约24h营养琼脂斜面培养物
染色剂
草酸铵结晶紫染液 卢戈氏碘液 95%乙醇 番红染色液
仪器或其他用具
显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、无菌水等。
操 作 步 骤
藤黄八叠菌纯培养的镜下形态（革 兰氏染色）
水处理生物学实验
实验要求
上课准时、不得无故缺席，实验报告要及时上交。 实验期间不得大声喧哗、服从老师的安排、注意安全。 实验器材专人专用，对仪器要爱护，损坏实行赔偿制度。 维护好实验室的环境卫生，实行值日生制度。
实验报告要求
统一用A4纸手写实验报告 封面格式
1、实验课程名称 2、实验项目名称 3、学生所在的专业、班级、姓名、学号 4、实验日期 5、同组者姓名
你认为革兰氏染色中，哪一个步骤可以省去而不影响
最终结果？在什么情况下可以采用？
实验五
微生物大小的测定、显微镜直接计数法
目的要求
学习并掌握用测微尺测定微生物大小的方法 明确血细胞球计数板计数的原理。 掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。
实验原理
镜台测微尺为中央部分刻有精确等分线的载玻片，将 1mm等分100格，每格长0.01mm。只用于校正目镜 测微尺。
大肠杆菌纯培养的镜下形态（革兰 氏染色）
实验结果
列表说明你所观察到的细菌形状、颜色和革兰氏染色
反应。
思考题
你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其
中最关键的环节是什么？
现有一株细菌宽度明显大于大肠杆菌的粗壮杆菌，请
你鉴定其革兰氏染色反应。你怎样运用大肠杆菌和金 黄色葡萄球菌为对照菌株进行涂片染色，以证明你的 染色结果正确性。
实验一
（一）显微镜的构造、性能和使用方法
一、目的要求
了解普通光学显微镜的构造、基本原理、维护和保养的方 法 学习并掌握普通光学显微镜的正确使用方法
二、显微镜的基本结构
（一）机械装臵 镜座 镜臂 镜筒：单筒和双筒两种 物镜转换器 载物台 载物台转移器 调焦装臵 粗调节器 细调节器
吕氏碱性美蓝染色液作用时间不同，对酵母菌死细胞数量 有何影响？试分析其原因。
实验二、放线菌、霉菌的形态观察
目的要求
学习并掌握观察放线菌、霉菌形态的基本方法； 初步了解放线菌的形态特征；
了解四类常见霉菌的基本形态特征。
实验器材
菌种
细黄链霉菌，曲霉、青霉、根霉、毛霉
培养基
高氏Ⅰ号琼脂培养基