志贺样毒素Ⅱ型变异体对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌IL-8 IL-6和PGI2的影响

皮 细胞 的原 代培 养 、 化和 传 代 培养 。用 免疫 荧 光 纯
表 １ Ｓ － ＬＴ Ⅱｅ对 大 鼠 肠 黏膜 ＭＶＥ Ｃｓ分 泌 Ｉ 一 Ｌ ８的影 响 （ ±Ｓ ｐ ／ ｇ ｍＬ， ｎ一３ ）
与 对 照组 比较 ， ： ＜ ０ ０ ； ＊： ＊ Ｐ ．５ ＊ Ｐ＜ ０ ０ ； 内 前后 两 个 时 间点 相 比 ； ： ０ ０ ， △ ： ． １组 △ Ｐ＜ ． ５ △ Ｐ＜ ０ ０ ．１
文 献 标 识 码 ： Ｂ
文章 编 号 ：５ ９６ ０ （０ ０ ０ —０ ４０ ０ ２ —０ ５ ２ １ ） ５０ ３—３
志贺样 毒素 Ⅱ型变 异 体ｌ （ Ｌ Ｉ ） 猪水 肿 １ Ｓ Ｔ １ｅ 是 ］ 病 大肠杆菌 导致仔 猪 形 成水 肿 病 的 主要 致病 因子 。
研 究 证 明 ，Ｌ 一 损 伤 小 肠 上 皮 细 胞 和 血 管 内 Ｓ Ｔ １ｅ能 皮 细 胞 ［ ， 起 细 胞 分 泌 功 能 障 碍 ， 而 导 致 微 血 管 ２引 ］ 进 舒 缩 和 通 透 性 发 生 变 化 ， 终 形 成 猪 水 肿 病 。 本 试 最
法 检测 内皮细胞 ｖ ＷＦ因子 相关 抗原 的方 法对 所 培
养 的细胞 进行鉴 定 。 １ ３ 试 验 细 胞 准 备 及 处 理 试 验 选 用 经 过 鉴 定 的 ． 第 ５ 大 鼠肠 黏 膜 微 血 管 内 皮 细 胞 。将 呈 ８ 融 代 Ｏ 合 状 态 的肠 黏 膜 微 血 管 内 皮 细 胞 以 ０ ２ 胰 蛋 白 ．５
公 司 ， Ｓ Ａ 批 号 ： ３ ８ ｌ ） Ｄ— ｎ Ｕ． ． １ ４ ４ １ ， Ｈａ ｋ Ｓ干 粉 （ ｉ— Ｓ ｇ
１４ 试验 分组 及指 标测 定 将 培养 的融 合成 单 层 ． 细胞 状 态 的大 鼠肠 黏膜 ＭＥ ｓ分 为对 照 组 和 毒 素 Ｃ
组 。 每 组 设 重 复 孔 ３个 （ 中 Ｐ 测 量 组 设 ５ 重 其 ＧＩ 个
度 为 ５ ０／ ｘｌ ｍＬ， 孔 ２ ０ Ｌ， ５ Ｃ 。 养 箱 每 ５ 置 ０ 培
中培养 ， 待细胞 融合成 单层 细胞 时开始试 验 。
细 胞 分 泌 功 能 方 面 ， 讨 Ｓ Ｔ １ｅ对 大 鼠肠 黏 膜 探 Ｌ 一 １ ＭＶ Ｃ Ｅ ｓ的损 伤机制 。
１ 材 料 与 方 法 １ １ 主 要 试 剂 与 仪 器 Ｄ ． ＭＥ 培 养 基 （ Ｂ Ｃ Ｍ ＧＩ Ｉ Ｏ
张 伟 ，索 占伟 ，刘钟 杰 穆 祥 ， ，范 开
（ ． 国农业 大学 动 物 医学 院 ， 京 海 淀 １ ０ ；２ 北 京 农 学 院 兽 医 学 （ 医药 ） 京 市 重 点 实 验 室 ， 京 昌平 １ ２ ０ ） １中 北 ０１３ ． ９ 中 北 北 ０ ２ ６
中 图分 类 号 ：８２ ２ ￥５．１
由 表 １可 以 看 出 ， 照 组 大 鼠 肠 黏 膜 ＭＶＥ ｓ 对 Ｃ
进行 。
学教研 室提 供 。鉴定 试剂 ： 兔抗人 第 Ⅷ 因 子相关 抗 原抗 血 清 、 抗 兔 ＩＧ Ｆ ＴＣ， 购 自 Ｓｇ 羊 ｇ —Ｉ 均 ｉｍａ公 司 。 ５ ０型酶标 仪 （ Ｉ ＲＡＤ公 司生产 ） ５ Ｂ Ｏ— 。
１ ２ 大 鼠肠 黏 膜 微 血 管 内 皮 细 胞 的 分 离 培 养 选 ．
复孔 ） 对 照组 加 含 ５ 血 清 的维 持 培 养基 ， 素组 ， 毒 加含 １ ． ｇ ｍＬ的 Ｓ Ｔ ｌｅ的维 持培 养基 ， ５ ０ｆ ／ Ｌ —Ｉ 分别
ｍａ公 司 ） 胎 牛 血 清 （ 地 利 Ｐ ａ ｏａｏｉｓ ， 奥 ＡＡ Ｌ ｂ ｒｔｒ ｅ
Ｇｍｂ 批 号 ： ４ ０ — １ ０ ， 化 苦 参 碱 （ 自 中 国 Ｈ Ａ０ １ ５０ ８ ） 氧 购 药 品 生 物 制 品 检 定 所 ） Ｓ Ｔ １ｅ 制 品 （ 白含 量 ，Ｌ 一 粗 蛋 为 １ ／ ） 扬 州 大 学 兽 医 学 院 微 生 物 与 免 疫 ０ｍｇ ｍＬ 由
培养 ３ ６ ９ １ 、 、 、２ｈ后 ， 集 细胞 培 养 上 清 液 ， 存 于 收 贮
一
２ ℃冰箱 内待测 。 Ｏ
１ ５ 细胞 上清 液 中 Ｉ 一 、Ｌ ６和 Ｐ 。 度测 定 ． Ｌ ８ Ｉ－ ＧＩ 浓 Ｉ 一 、Ｌ ６ Ｐ 。的浓度测定 按 照 尚柏公 司和 ＵＳ Ｌ ８ Ｉ 一 和 ＧＩ － Ｃ Ｉ Ｅ公 司 提 供 的 Ｅ Ｉ Ａ 试 剂 盒 的 操 作 步 骤 ＮＬＦ ＬＳ
验通过研 究 Ｓ Ｔ １ｅ作用 大 鼠肠 黏 膜 微 血 管 内皮 Ｌ 一Ｉ
细 胞 （ Ｖ Ｃ ） ， 培 养 上 清 液 中 Ｉ 一 、Ｌ ６ 和 Ｍ Ｅ ｓ后 其 Ｌ ８ Ｉ一 Ｐ ：的 浓 度 变 化 ， ＧＩ 以期 从 Ｓ Ｔ １ｅ 响 微 血 管 内皮 Ｌ 一 影
酶消化 ， 细胞悬 液 接种 到 ４ ８孔 细 胞培 养 板 ， 接种 密
３ ４
中 国兽 医 杂 志 ２ １ ０ ０年 （ ４ 第 ６卷 ） ５期 第
Ｃ ｉｅ ｅＪ ｕ ｎ ｌ ｆ ｔ ｒ ａｙ Ｍｅ ｉｉｅ ｈｎ ｓ ｏ ｒ ａ ｏ ｅ ｉ ｒ ｄｃ Ｖｅ ｎ ｎ
志 贺 样 毒 素 Ⅱ型 变 异 体 对 大 鼠肠 黏 膜 微 血 管 内皮 细 胞 分 泌 Ｉ 一 Ｌ ６和 Ｐ ２的影 响 Ｌ ８Ｉ 一 ＧＩ
１ ６ 统计学 处理 ． 异采用 ｆ 验 。 检
２ 结 果
各组 数据 以 ±Ｓ表示 ， 问差 组
用 出生 ２ ４ｈ内的 Ｓ 大 鼠乳 鼠 ， 照 索 占伟 wk.baidu.com等 的 Ｄ 参
肠 黏 膜 微 血 管 内 皮 细 胞 的 培 养 方 法 ， 行 微 血 管 内 进
２ １ Ｓ 一 大 鼠肠 黏 膜 ＭＶＥ ｓ不 同 时 间 点 ． Ｉ １ｅ对 Ｔ Ｃ 分泌 Ｉ一 Ｌ ８的影 响 结 果 见 表 １ 。