9-土壤中蛔虫卵检测

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1、土样处理：剔除菜叶、树皮等大杂物，压碎土样中 的大颗粒；然后用孔径3mm的铜筛和孔径为2mm的铜 筛过筛，收集过筛后的土样。 2、分离：取50ml大离心管，放入过筛后的土样10g， 加5%氢氧化钠溶液至40或45ml刻度线。用橡皮塞紧塞 管口，在振荡器上振荡15分钟，可反复3～4次，待充 分混合后，以2000rpm,离心4min。 3、漂浮：弃去上部的氢氧化钠，加入饱和硝酸钠溶液 充分搅拌混匀，2000rpm离心4min，再加饱和硝酸钠 溶液满至管口，覆上18mm×18mm盖玻片。 4 、计数：静置15min后，将盖玻片迅速翻转取下，置 于载玻片上镜检，同时再覆上第二张盖玻片，如此反复， 共计数3～4张盖玻片。
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17. 卵细胞皱缩死受精蛔虫卵
18. 空泡化死受精蛔虫卵
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19. 卵细胞崩解的死受精蛔虫卵
20. 卵细胞崩解的死受精蛔虫卵
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21. 卵细胞不规则裂开的死受精蛔虫卵
22. 卵胚变形的死受精蛔虫卵
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23. 内含物变形死受精蛔虫卵
24. 卵壳内幼虫变形的死受精蛔虫卵
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正常发育过程中蛔虫卵-活受精蛔虫
4. 含4个卵细胞活受精蛔虫卵
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5. 含8个卵细胞活受精蛔虫卵
6. 含16个卵细胞活受精蛔虫卵
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7. 桑椹期脱蛋白膜活受精蛔虫卵
8. 含幼虫的活受精蛔虫卵
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9. 未受精蛔虫卵外包锯齿状 突起的蛋白膜
10. 脱蛋白膜的未受精蛔虫卵
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活的受精蛔虫卵：内含一 个球形的卵细胞，卵壳两 端和卵细胞之间，有半月 形的空隙，卵内的卵黄颗 粒清晰而致密；若卵内含 幼虫，虫体的前后部没有 颗粒，中部颗粒清晰而有 金属光泽，有立体感，镜 检时，注视或轻压，可见 有轻微蠕动，强压后，有 时可挤出幼虫。
4、鉴别死活
活卵内含物不着色，死虫卵内含物染成蓝色。
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图中箭头所指为死的蛔虫卵
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步骤 1、脱蛋白膜 将收集的蛔虫卵加入30%次氯酸钠，作用数分钟， 并经常振荡，再用蒸馏水洗2次，即可脱掉蛋白膜。
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2、染色镜检
吸取虫卵沉淀物一滴置于载玻片上，加M.E.B染色液 一滴，上覆盖玻片，静置3～5分钟后镜检。或者，吸 取虫卵沉淀物1滴放入小试管内，加入染色液染30分钟， 再用蒸馏水洗2～3次，吸取沉淀物镜检。 3、注意 M.E.B的PH值应在10左右，不宜太高； 脱蛋白膜后， 应洗净次氯酸钠，否则影响碱性染料的着色效果。
1.单细胞期活受精蛔虫卵 2.二细胞期活受精蛔虫卵 3.四细胞期活受精蛔虫卵 4.多细胞期活受精蛔虫卵
5.桑椹期卵（卵胚一端透明有光泽） 6.蝌蚪期卵（卵胚的一部分凹陷） 7.仔虫期卵（可见幼虫呈8字状运动） 8.不均等发育，卵内一部分发育为仔 虫期，一部分为蝌蚪期
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死受精蛔虫卵
1.卵细胞颗粒化 3.卵细胞空泡化
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2006～2010年的全国土源性线虫病监测数据显 示，土源性线虫病监测点土壤中人活蛔虫卵检出率
分别为25.8%，17.3%，19.0%，19.7%和14.7%，统
计分析表明土壤人蛔虫卵检出率与人群蛔虫感染率 呈正相关，因此土壤中蛔虫卵的污染情况是评价环 境卫生状况的一项重要指标。
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美蓝、伊红、硼砂染色法 原理 美蓝、伊红、硼砂染液（简称M.E.B）溶于水呈碱性。 活虫卵可以还原碱性染料，降低着色力，不易被染色。 死虫卵不能还原碱性染料，容易着色。 蛔虫卵外层蛋白膜容易被着色，染色前需脱去蛋白膜。

配制

将0.2g美蓝加入100ml蒸馏水中煮沸10分钟，加入硼砂 0.5g，再煮沸10分钟，冷却后加入伊红0.1g，待完全溶解 后过滤备用，pH值为10～11，在室温中可放置1.5年。

死受精蛔虫卵(变性卵)：卵细胞 移向一端，或向不定部位呈球 状收缩，致使卵壳两端呈现有 大小不等的半月形空隙；卵内 脂肪变性，形成空泡；卵细胞 颗粒减少或消失；细胞质浑浊， 呈黑色或棕黑色；卵壳的一侧 或两侧向内凹陷或破裂；只有 蛋白质壳，而缺内容物。若卵 内含幼虫，虫体内几乎充满颗 粒，且模糊不清，无金属光泽， 缺乏立体感，久久不见蠕动， 稍稍加热或轻压，不会蠕动； 强压时，虽能挤出幼虫，但也 不改变其原来的卷曲 状态。
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受精蛔虫卵呈短椭圆形或 圆形，卵壳厚，双线层， 外包一层乳头状突起的蛋 白膜，呈棕黄色。

未受精蛔虫卵与受精卵相 比显得狭长，多为长椭圆 形，卵内充满大小不等油 滴状卵黄颗粒。
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1. 含一个卵细胞活受精蛔虫卵， 外包有乳头状突起的蛋白膜。
ห้องสมุดไป่ตู้
2. 脱蛋白膜活受精蛔虫卵
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3. 含2个卵细胞活受精蛔虫卵
2.卵细胞萎缩 4.卵细胞质的周边部透明化
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1、在直径10～12cm的玻璃平皿底部平铺一层厚约0.5cm 的脱脂棉； 2、在脱脂棉上铺一张直径与平皿等大的普通滤纸； 3、在滤纸上，再放一张直径2cm的小滤纸，将虫卵滴在小 滤纸片上； 4、加入2%福尔马林液，以湿透滤纸和脱脂棉； 5、放入在28～30℃温箱中培养1个月观察虫卵死活。 6、培养一个月后自皿中取出小滤纸片，将虫卵置于载玻片 上，滴加50％甘油溶液，使其透明后，根据形态，鉴定卵的 死活。凡含有幼虫的，都认为是活卵，其他阶段的或单细胞 的，都判为是死卵。
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11. 外包蛋白膜的死受精蛔虫卵， 卵细胞移向一端
12. 脱蛋白膜的死受精蛔虫卵， 卵细胞移向一端
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13. 桑椹期脱蛋白膜死蛔虫卵
14. 死受精蛔虫卵，在卵细胞 上部可见透明细胞质
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15. 外包蛋白膜死受精蛔虫卵，卵内 脂肪变性，细胞质形成空泡。
16. 脱蛋白膜死受精蛔虫卵，在卵细 胞上部形成空泡。
原理 采样 方法 注意事项 鉴别（受精与未受精、死活）
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先用碱性溶液与土壤样品充分混合以分离蛔虫卵与 土壤颗粒，再加入比重较大的液体使得比重较轻的 蛔虫卵漂浮在溶液表面，收集后镜检计数。
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1、分别从土表及5厘米深处采取土样，因为虫卵存 活时间与土层深度有关； 2、在用人粪施肥的农场和菜地可分别在陇上和犁 沟中取土样，同时还应取20厘米深处的土样，以确 定虫卵附着在根块植物上的可能； 3、为了测定不同局部气候条件下虫卵存活率，要 从有日光照射和荫蔽区采取土样； 4、厕所、庭院、厨房取表层土； 5、每份土样约50~100g。
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1、漂浮液的比重：漂浮液的比重是影响蛔虫卵检 出率的重要因素，用比重大的溶液作为漂浮液效果 较为理想，与饱和硫酸锌、硫酸镁、氯化钠等盐溶 液相比，饱和硝酸钠的比重最高，用作漂浮液蛔虫 卵的检出率最高。 2、土壤性质：土壤性质决定了虫卵与土壤颗粒粘 合的程度，蛔虫卵检出率沙土最高，壤土次之，粘 土最低。 3、离心的时间与次数：延长离心时间、提高离心 速度或增加离心次数均可以提高蛔虫卵与土壤颗粒 的分离效果进而提高检出率。