实验一∶葡萄糖一般杂质检查

实验一：葡萄糖一般杂质检查

一、教学目的：

1．掌握葡萄糖中氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐等限量的检方法、原理、反应条件及计算。

2．熟悉纳氏比色管、验砷瓶、量筒、天平等使用方法。

3．了解药物一般杂质检查项目的意义。

二、实验内容：

1．氯化物的限量检查

取本品0.6g ，加水溶解使成25ml，再加稀硝酸10ml，溶液若不澄清、滤过，置50ml纳氏比色管中，加水使成40ml，加硝酸银试液1ml，用水稀释至50 ml，摇匀在暗处放置5分钟，如发生混浊，与标准氯化钠6 ml 同法操作所制的对照液比较，不得更深（0.01%）。

2．硫酸盐的限量检查

取本品2g ，加水溶解使成40ml，溶液若不澄清、滤过，置50ml纳氏比色管中，加稀HCl2ml，摇匀，加25%氯化钡溶液5ml，用水稀释成50 ml，摇匀，放置10分钟，如发生混浊，与标准硫酸钾溶液2 ml同法操作所制的对照液比较，不得更深（0.01%）。

3．重金属的限量检查

取本品4g ，加水23 ml溶解，再加稀醋酸2ml，加硫化氢试液10ml，摇匀在暗处放置10分钟，与标准铅溶液2 ml同法操作所制的对照液比较，不得更深（5ppm）。

4．铁盐的限量检查

取本品2g ，加水20 ml溶解，再加硝酸3滴，缓缓煮沸5分钟，用水稀释至45 ml，加硫氰酸铵溶液（3→100）3 ml摇匀，如显色，与标准铁溶液2 ml同法操作所制的对照液比较，不得更深（0.001%）。

5．砷盐的限量检查

演示。

思考题

1．在进行氯化物检查、硫酸盐或重金属检查时，遇到有颜色的样品如何处理？

2．重金属检查有几种方法？本实验采用何种方法？该法的最适pH为多少？

3．何谓“限度检查”？杂质限度应如何计算？

实验二特殊杂质检查

一、目的要求：

熟悉阿斯匹林、盐酸普鲁卡因中的一些特殊杂质的检查原理及操作方法。

二、提要

1.特殊杂质是指药物本身特有的根据其生产主艺、自身牲质，而产生的杂质,其检查方法在药典

中列在各药品的检查项下。

2.特殊杂质的检查方法是根据药物与杂质在理化性质及生物活性上的差异，选择灵敏变高，专属

性强的方法做为检查方法, 如根据其对光的选择性差异，可选用比色法〈目视、可见、紫外)及原子吸收分光光度法，根据理化学性质上的差异,可选薄层层折法，气相色谱法，高压液相法等。

3.乙酰水杨酸中游离水杨酸（生产中未反应完全或贮存中水解产生的)的检查，采用目视比色法。

4.盐酸普鲁卡因发生如下分解反应

普鲁卡因对氨基苯甲酸

利用盐酸普鲁卡因和对氨基苯甲酸在硅胶G簿极上吸附行为不同,经层析而达到分离的目的。

以一定限量的对氨基苯甲酸对照品为标准进行杂质限量，利用对二甲氨基苯甲醛进行显色。

三、实验内容：

1.乙酰水杨酸中游离水杨酸检查

取本品0.lg加乙醇1ml溶解后，加冷水至50ml, 立即加新制的硫酸铁铵溶液1ml 摇匀30秒钟内如显色,与对照液〈精密称取取水杨酸0.1g 加水溶解后，加冰醋酸1ml, 摇匀,再加水使成1000 ml摇匀，〉精密量取1 ml，加乙醇1ml ，加冷水至50ml, 立即加新制的硫酸铁铵溶液1 ml 摇匀，比较不得更深。

2、盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查

标准对氨基苯甲酸的制备：精密称对氨基苯甲酸对照品，加乙醇制成每ml含30ug 的溶液。

供试液的制备：精密量取盐酸普鲁卡因注射液加乙醇制成每ml含2.5mg的盐酸普鲁卡因溶液。

(2)

薄板的制备：取层析用硅胶G粉约2.5g，加适量水〈约按1:2；1:3〉调匀，研磨、铺在平滑玻璃板上〈一般厚度0.2~0.3mm阴干,105C 加热活化1小时取出放入密闭干燥器内备用

点样：在制好的薄板上距下端边2.5cm处,用微量注射器分别吸取对照液和在试液各lOul分别点样两点间一般距离1.5~2.0cm，距边缘一侧1.5~2.5cm 。

展开：用丙酮:0.8%盐酸〈9;1)混合液作展开剂,10~15 ml 展开剂于层析槽中,将点好样的薄板放入饱和5分钟,用倾斜上行法展开,展开长度为10~15cm 取出后风干。

显色：用喷雾器啧射显色剂对二-甲氨基苯醛溶被使其显色〈2%对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液looml 加5ml冰醋酸〉。供试溶液如显与对照品相应的杂质斑点与对照品溶液的主斑点比较不得更深。

四、注意事项

1·游离水杨酸检查中,样品管应尽量干燥，不得带λ过多的水,否则样品加醇后不易溶解。

2.薄板所用的玻璃必须仔细清洗,不附着油污，否则易引起薄层的剥落。

3·用石膏作粘合剂时,此法的关键是控制开始凝固的时间,过早倒于玻板上则易流,过迟则太粘不能

成均匀薄层。

4·如在空气中点样一般不超过10分钟,所点圆点直径应小于3mm并应分次点,以免使圆点扩大，直

径太大，所有圆点在统一水平线上,面积也应尽可能一致。

思考题: 1.乙酰水杨酸中游离水杨酸检查中,为何要在30秒钟内比色?

2.盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸杂质限量是多少?

3.TLC杂质检查有儿种类型?

4.举例哪一种杂质检查是通过反应灵敏度来控制的?

实验三盐酸普鲁卡因注射液的含量测定（重氮化法）

一、教学目的：

1．掌握重氮化的反应原理，操作条件及注意事项。

2．熟悉注射液含量的测定基本方法和计算。

3．熟悉外指示剂法。

二、实验内容：

盐酸普鲁卡因含有芳伯氨基，在酸性条件下与亚硝酸钠发生重氮化反应。

外指示剂法：

精密量取本品适量（约相当于盐酸普鲁卡因0.1g）加水40ml与（1→2）盐酸液15ml，而后置电磁搅拌器上，搅拌使混合均匀，再加溴化钾2g，插入铂电极后，将滴定管插入液面下约2/3处，在15～20℃用0.05mol/L 亚硝酸钠在搅拌下迅速滴定。，在近终点时将滴定管的尖端提出液面上用少量水将尖端洗涤，洗液并入溶液中，继续缓慢滴定，至用细玻棒蘸取溶液少许，划过涂有含锌碘化钾淀粉糊的瓷板上，即显兰色条痕时，停止滴定，3分钟后再蘸取少量划过一次，如仍显兰色条痕时，即为终点。1ml亚硝酸钠液（0.05mol/L）相当于13.64mgC13H20N2O2.HCl

思考题：

1、加入KBr的目的？

2、重氮化法的影响因素是什么？