第六章微生物控制技术
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微生物实验技术
第六章 微生物控制技术
微生物控制技术
实验6-1 温度对微生物的影响 实验6-2 紫外线对微生物的影响 实验6-3 渗透压对微生物的影响 实验6-4 氢离子浓度对微生物生长的影响 实验6-5 化学药剂对微生物的影响
实验6-1 温度对微生物的影响
一、实验目的 1.了解温度对不同类型微生物生长的影响； 2.学习测定微生物最适生长温度的方法。 二、实验原理 温度能影响微生物的生长、繁殖和新陈代谢，每种微 生物都有它的生长温度范围，每种微生物只能在一定的温 度范围内生长，低温微生物最高生长温度不超过20℃，中 温微生物的最高生长温度低于45℃，而高温微生物能在 45℃以上的温度条件下正常生长。
实验6-1 温度对微生物的影响
三、实验材料 1.菌种 培养24小时的枯草杆菌和大肠杆菌，培养 了72小时的黑曲霉或青霉。 2.培养基 牛肉膏蛋白胨琼脂斜面，马铃薯葡萄糖 培养基斜面。 3.器材 酒精灯，接种针，冰箱，恒温箱。 四、实验方法 1.接菌 按无菌操作方法进行 （1）在5支牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上都接种上枯草 杆菌，接种时划直线或曲线。
实验6-4 氢离子浓度对微生物生长的影响
表6-3 不同pH培养基配制表
试管序号
1 2 3 4 5 6 7 8 9
K2HP04 (mL) 0.3 0.9 1.1 1.3 1.5 1.9 － － －
柠檬酸 (mL) 1.7 1.1 0.9 0.7 0.5 0.1 － － －
NaOH (mL) － － － － － － 0.3 0.7 1.0
实验6-2 紫外线对微生物的影响
1.图案纸 2.细菌生长圈 3.无菌生长区 图6-1 检查紫外线对微生物生长的影响试验方法
实验6-2 紫外线对微生物的影响
4.分组 将接种的六个平皿分为三组，每组一个金黄
色葡萄球菌，一个黏质沙雷氏菌。
5.紫外线处理 将紫外灯先开灯预热2～3min。再将
上述平皿置于紫外灯下，打开皿盖，在30cm距离处照射。
实验6-3 渗透压对微生物的影响
三、实验材料 1.菌种 金黄色葡萄球菌，大肠杆菌，盐沼盐杆菌。 2.培养基 分别含0.85％、5％、10％、15％及25 ％NaCl的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。 3.仪器或 无菌平皿，接种环等。 四、实验方法 1.将含不同浓度NaCl的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基溶化、 倒平板。 2.在已凝固的平板皿底用记号笔划成三部分，分别标 记上述三种菌名。
实验6-4 氢离子浓度对微生物生长的影响
四、实验方法 1.培养基制备 分组按表6-3配方配制不同pH的培养基，并用pH计校 正pH，然后分装入试管中，每管装量5～6mL，0.1Mpa灭菌 30min备用。 2.接种培养 取pH不同的培养基三组用接种环按无菌操作法于试管 中分别接入大肠杆菌、吸水链霉菌、黑曲霉，在37℃下培 养48h。 3.检查结果 取出培养物，观察并记录实验结果。
实验6-1 温度对微生物的影响
（2）在另5支牛肉膏蛋白胨琼脂斜面上都接种上大肠 杆菌，接种时划直线或曲线。
（3）在5支马铃薯葡萄糖培养基斜面上接种曲霉或青 霉，接种时用点接法。
2.培养与观察 （1）培养 将上述接种好的菌种，分别放入0℃、 15℃、30℃、37℃、50℃五种温度下培养。 （2）观察 48小时后观察，记录实验结果。 五、实验报告 记载实验结果，填入表6-1。
一组照1min，1组照5min，l组照l0min，小心地取下图案
纸，盖上皿盖。用黑布或厚纸遮盖，送入培养室内。
6.培养 将平皿于28～30℃温度下培养48h。
五、实验报告
取出平皿观察分析平板上细菌生长的状况，并绘图表
示。
返回
实验6-3 渗透压对微生物的影响
一、实验目的 了解渗透压对微生物生长的影响。 二、实验原理 在等渗溶液中，微生物正常生长繁殖；在高渗溶液中， 细胞失水收缩，而水分为微生物生理生化反应所必需，失 水会抑制其生长繁殖；在低渗溶液中，细胞吸水膨胀，大 多数微生物具有较为坚韧的细胞壁，而且个体较小，因而 在低渗溶液中一般不会像无细胞壁的细胞那样容易发生裂 解，具有细胞壁的微生物受低渗透压的影响不大。
实验6-3 渗透压对微生物的影响
3.将上述平板置于28℃温室中，4 d后观察并记录含 不同浓度NaCl的平板上三种菌的生长状况。
五、实验报告 1.结果分析 将实验结果填入表6-2。 2.举例几个在日常生活中人们利用渗透压来抑制微 生物生长的例子。
实验6-3 渗透压对微生物的影响
表6-2 不同类型微生物在不同NaCl浓度中的生长情况
五、实验报告 取出培养平皿，观察滤纸片周围有无抑菌圈产生，并 测量抑菌圈的大小，将测量结果填入表6-5中。
表6-5 不同化学药剂对细菌的抑制效果（抑菌圈直径cm）
细菌
消毒剂 HgCl2(1g/L) 链霉素（200 g / L） 青霉素（200g / L）石碳酸(50g/L)
大肠杆菌 金黄色葡萄球菌
枯草杆菌
硼酸 (mL) － － － － － － 1.7 1.3 1.0
牛肉膏蛋白胨培养液 (mL) 8 8 8 8 8 8 8 8 8
总量 (mL) 10 10 10 10 10 10 10 10 10
PH (近似值)
2.8 4.4 5.2 6.0 6.8 7.6 8.4 9.2 10.0
实验6-4 氢离子浓度对微生物生长的影响
实验6-4 氢离子浓度对微生物生长的影响
三、实验材料 1. 菌种 培养24h大肠杆菌斜面菌种，培养5d的吸 水链霉菌5102斜面菌种，培养3d的黑曲霉斜面菌种。 2.培养基和试剂 牛肉膏蛋白胨培养液，4.14% K2HP04，1.22%硼酸，0.8% NaOH，1.92%柠檬酸，见附录 Ⅴ。 3.其他材料 无菌水，无菌吸管(1mL)，接种环。
实验6-2 紫外线对微生物的影响
三、实验材料 1.菌种 培养24～48h的金黄色葡萄球菌，黏质沙 雷氏菌。 2.培养基 牛肉膏蛋白胨培养基。 3.器材 无菌水，无菌平皿，1mL无菌吸管，玻璃 刮铲、灭菌五角星形图案纸(牛皮纸或黑纸)，紫外灯箱。 四、实验方法 1.制平板 取无菌平皿6套，将已熔化并冷却至50℃ 左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基按无菌操作法倒入平皿中， 使其冷凝成平板。
菌名
NaCl浓度∕%
0.85
5
10
15
25
金黄色葡萄球菌
大肠杆菌
盐沼盐杆菌
注：用“—”表示不生长，“+”表示生长一般，“﹢﹢”表示生长良好。
返回
实验6-4 氢离子浓度对微生物生长的影响
一、实验目的 1.了解氢离子浓度对微生物生长发育的影响。 2. 学习测定微生物生长最适pH的方法 二、实验原理 微生物生长繁殖需要一定的酸碱度即pH环境，H＋浓 度影响微生物对营养物质的吸收和生化反应。一般细菌适 于中性环境，放线菌适于偏碱性环境，酵母菌和霉菌则适 于在微酸性环境中生长，若超出其适应的范围，微生物生 长将受到抑制或不能生长。
五、实验报告 将实验结果填入表6-4中。
表6-4 不同类型微生物在不同pH中的生长情况
pH
2.8 4.4 5.2 6.0 6.8 7.6 8.4 9.2 10
吸水链霉素
黑曲霉
大肠杆菌
注：用“—”表示不生长，“+”表示生长一般，“﹢﹢”表示生长良好。
返回
实验6-5 化学药剂对微生物的影响
一、实验目的 了解化学药剂的杀菌和消毒作用，掌握常用消毒剂的 浓度和使用方法。 二、实验原理 一些化学药剂对微生物的生长有抑制或杀死作用。因 此，在实验室内和生产上常利用某些化学药剂进行杀菌或 消毒。不同的药剂或同一药剂对不同微生物的杀菌能力不 同。此外，药剂浓度、作用时间及环境条件不同，其效果 也不一样。使用前需进行试验，灵活选择。
实验6-5 化学药剂对微生物的影响
四、实验方法 1.制平板：取无菌平皿三套，将已熔化并冷却至50℃ 左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基按无菌操作法倒入平皿中， 使冷凝成平板。 2.制备菌悬液：取无菌水3支，用接种环分别取大肠 杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草杆菌各1～2环接入无菌水中， 充分混匀，制成菌悬液。 3.接种：用无菌吸管分别吸取已制好的菌悬液0.1 mL 接种于平板上，用无菌玻璃刮铲涂匀。注意做好标记。 4.浸药：将灭菌滤纸片分别浸入四种供试药剂中。
实验6-5 化学药剂对微生物的影响
三、实验材料 1.菌种 培养24～48h的大肠杆菌，金黄色葡萄球菌， 枯草杆菌斜面菌种。 2.培养基和试剂 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，1g/L HgCl2，200g/L链霉素，200g/L青霉素，50g/L石炭酸。 3.器材 无菌平皿，无菌水，无菌吸管(1mL)，直径 0.6cm的无菌圆形滤纸片。
实验6-1 温度对微生物的影响
表6-1 不同类型微生物在不同温度条件下培养的生长情况
菌种
0℃
枯草杆菌
15℃
30℃
37℃
50℃
大肠杆菌
黑曲霉/青霉
注：用“—”表示不生长，“+”表示生长一般，“+ +”表示生长良好。
返回
实验6-2 紫外线对微生物的影响
一、实验目的 1.了解紫外线的杀菌作用原理； 2.学习紫外线杀菌试验方法。 二、实验原理 紫外线对微生物有强烈的致死作用，波长260nm的紫外 线杀菌力最强。其杀菌机制是短波的紫外线引起细胞核酸变 性导致微生物死亡。微生物对紫外线的吸收与剂量有关，剂 量高低取决于紫外灯的功率、照射距离与照射时间。在本试 验中采用15W紫外灯在距灯30cm处通过改变照射时间来处理 微生物。紫外线虽有较强的杀菌力，但其穿透力很弱，普通 玻璃、薄纸、水层等均能阻止其透过。
实验6-5 化学药剂对微生物的影响
1.滤纸片 2.抑菌圈
图6-2 药剂抑制实验
பைடு நூலகம்
5.加药剂：用无菌镊 子夹取浸药滤纸片(注意把 药液沥干)，分别平铺于同 一含菌平板上，注意药剂 之间勿互相沾染(图6-2)。 并在平皿背面做好标记。
6.培养：将平皿置于 28℃下培养48～72h后观 察结果。
实验6-5 化学药剂对微生物的影响
实验6-2 紫外线对微生物的影响
2.菌悬液制备 取试管无菌水2支，以无菌操作法分 别取金黄色葡萄球菌和黏质沙雷氏菌各2环，接入无菌水 中充分摇匀，制成菌悬液。
3.接种 将已倒入培养基的平皿分为2组，每组3个， 一组接金黄色葡萄球菌，一组接沙雷氏菌，用无菌吸管吸 取已制好的菌悬液各0.1mL，分别接种于二组平板上，用 无菌玻璃刮铲均匀涂布，随即用无菌镊子夹取无菌图案纸 一张，小心放在接种好的平皿中央(图6-1)。
第六章 微生物控制技术
微生物控制技术
实验6-1 温度对微生物的影响 实验6-2 紫外线对微生物的影响 实验6-3 渗透压对微生物的影响 实验6-4 氢离子浓度对微生物生长的影响 实验6-5 化学药剂对微生物的影响
实验6-1 温度对微生物的影响
一、实验目的 1.了解温度对不同类型微生物生长的影响； 2.学习测定微生物最适生长温度的方法。 二、实验原理 温度能影响微生物的生长、繁殖和新陈代谢，每种微 生物都有它的生长温度范围，每种微生物只能在一定的温 度范围内生长，低温微生物最高生长温度不超过20℃，中 温微生物的最高生长温度低于45℃，而高温微生物能在 45℃以上的温度条件下正常生长。
实验6-1 温度对微生物的影响
三、实验材料 1.菌种 培养24小时的枯草杆菌和大肠杆菌，培养 了72小时的黑曲霉或青霉。 2.培养基 牛肉膏蛋白胨琼脂斜面，马铃薯葡萄糖 培养基斜面。 3.器材 酒精灯，接种针，冰箱，恒温箱。 四、实验方法 1.接菌 按无菌操作方法进行 （1）在5支牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上都接种上枯草 杆菌，接种时划直线或曲线。
实验6-4 氢离子浓度对微生物生长的影响
表6-3 不同pH培养基配制表
试管序号
1 2 3 4 5 6 7 8 9
K2HP04 (mL) 0.3 0.9 1.1 1.3 1.5 1.9 － － －
柠檬酸 (mL) 1.7 1.1 0.9 0.7 0.5 0.1 － － －
NaOH (mL) － － － － － － 0.3 0.7 1.0
实验6-2 紫外线对微生物的影响
1.图案纸 2.细菌生长圈 3.无菌生长区 图6-1 检查紫外线对微生物生长的影响试验方法
实验6-2 紫外线对微生物的影响
4.分组 将接种的六个平皿分为三组，每组一个金黄
色葡萄球菌，一个黏质沙雷氏菌。
5.紫外线处理 将紫外灯先开灯预热2～3min。再将
上述平皿置于紫外灯下，打开皿盖，在30cm距离处照射。
实验6-3 渗透压对微生物的影响
三、实验材料 1.菌种 金黄色葡萄球菌，大肠杆菌，盐沼盐杆菌。 2.培养基 分别含0.85％、5％、10％、15％及25 ％NaCl的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。 3.仪器或 无菌平皿，接种环等。 四、实验方法 1.将含不同浓度NaCl的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基溶化、 倒平板。 2.在已凝固的平板皿底用记号笔划成三部分，分别标 记上述三种菌名。
实验6-4 氢离子浓度对微生物生长的影响
四、实验方法 1.培养基制备 分组按表6-3配方配制不同pH的培养基，并用pH计校 正pH，然后分装入试管中，每管装量5～6mL，0.1Mpa灭菌 30min备用。 2.接种培养 取pH不同的培养基三组用接种环按无菌操作法于试管 中分别接入大肠杆菌、吸水链霉菌、黑曲霉，在37℃下培 养48h。 3.检查结果 取出培养物，观察并记录实验结果。
实验6-1 温度对微生物的影响
（2）在另5支牛肉膏蛋白胨琼脂斜面上都接种上大肠 杆菌，接种时划直线或曲线。
（3）在5支马铃薯葡萄糖培养基斜面上接种曲霉或青 霉，接种时用点接法。
2.培养与观察 （1）培养 将上述接种好的菌种，分别放入0℃、 15℃、30℃、37℃、50℃五种温度下培养。 （2）观察 48小时后观察，记录实验结果。 五、实验报告 记载实验结果，填入表6-1。
一组照1min，1组照5min，l组照l0min，小心地取下图案
纸，盖上皿盖。用黑布或厚纸遮盖，送入培养室内。
6.培养 将平皿于28～30℃温度下培养48h。
五、实验报告
取出平皿观察分析平板上细菌生长的状况，并绘图表
示。
返回
实验6-3 渗透压对微生物的影响
一、实验目的 了解渗透压对微生物生长的影响。 二、实验原理 在等渗溶液中，微生物正常生长繁殖；在高渗溶液中， 细胞失水收缩，而水分为微生物生理生化反应所必需，失 水会抑制其生长繁殖；在低渗溶液中，细胞吸水膨胀，大 多数微生物具有较为坚韧的细胞壁，而且个体较小，因而 在低渗溶液中一般不会像无细胞壁的细胞那样容易发生裂 解，具有细胞壁的微生物受低渗透压的影响不大。
实验6-3 渗透压对微生物的影响
3.将上述平板置于28℃温室中，4 d后观察并记录含 不同浓度NaCl的平板上三种菌的生长状况。
五、实验报告 1.结果分析 将实验结果填入表6-2。 2.举例几个在日常生活中人们利用渗透压来抑制微 生物生长的例子。
实验6-3 渗透压对微生物的影响
表6-2 不同类型微生物在不同NaCl浓度中的生长情况
五、实验报告 取出培养平皿，观察滤纸片周围有无抑菌圈产生，并 测量抑菌圈的大小，将测量结果填入表6-5中。
表6-5 不同化学药剂对细菌的抑制效果（抑菌圈直径cm）
细菌
消毒剂 HgCl2(1g/L) 链霉素（200 g / L） 青霉素（200g / L）石碳酸(50g/L)
大肠杆菌 金黄色葡萄球菌
枯草杆菌
硼酸 (mL) － － － － － － 1.7 1.3 1.0
牛肉膏蛋白胨培养液 (mL) 8 8 8 8 8 8 8 8 8
总量 (mL) 10 10 10 10 10 10 10 10 10
PH (近似值)
2.8 4.4 5.2 6.0 6.8 7.6 8.4 9.2 10.0
实验6-4 氢离子浓度对微生物生长的影响
实验6-4 氢离子浓度对微生物生长的影响
三、实验材料 1. 菌种 培养24h大肠杆菌斜面菌种，培养5d的吸 水链霉菌5102斜面菌种，培养3d的黑曲霉斜面菌种。 2.培养基和试剂 牛肉膏蛋白胨培养液，4.14% K2HP04，1.22%硼酸，0.8% NaOH，1.92%柠檬酸，见附录 Ⅴ。 3.其他材料 无菌水，无菌吸管(1mL)，接种环。
实验6-2 紫外线对微生物的影响
三、实验材料 1.菌种 培养24～48h的金黄色葡萄球菌，黏质沙 雷氏菌。 2.培养基 牛肉膏蛋白胨培养基。 3.器材 无菌水，无菌平皿，1mL无菌吸管，玻璃 刮铲、灭菌五角星形图案纸(牛皮纸或黑纸)，紫外灯箱。 四、实验方法 1.制平板 取无菌平皿6套，将已熔化并冷却至50℃ 左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基按无菌操作法倒入平皿中， 使其冷凝成平板。
菌名
NaCl浓度∕%
0.85
5
10
15
25
金黄色葡萄球菌
大肠杆菌
盐沼盐杆菌
注：用“—”表示不生长，“+”表示生长一般，“﹢﹢”表示生长良好。
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实验6-4 氢离子浓度对微生物生长的影响
一、实验目的 1.了解氢离子浓度对微生物生长发育的影响。 2. 学习测定微生物生长最适pH的方法 二、实验原理 微生物生长繁殖需要一定的酸碱度即pH环境，H＋浓 度影响微生物对营养物质的吸收和生化反应。一般细菌适 于中性环境，放线菌适于偏碱性环境，酵母菌和霉菌则适 于在微酸性环境中生长，若超出其适应的范围，微生物生 长将受到抑制或不能生长。
五、实验报告 将实验结果填入表6-4中。
表6-4 不同类型微生物在不同pH中的生长情况
pH
2.8 4.4 5.2 6.0 6.8 7.6 8.4 9.2 10
吸水链霉素
黑曲霉
大肠杆菌
注：用“—”表示不生长，“+”表示生长一般，“﹢﹢”表示生长良好。
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实验6-5 化学药剂对微生物的影响
一、实验目的 了解化学药剂的杀菌和消毒作用，掌握常用消毒剂的 浓度和使用方法。 二、实验原理 一些化学药剂对微生物的生长有抑制或杀死作用。因 此，在实验室内和生产上常利用某些化学药剂进行杀菌或 消毒。不同的药剂或同一药剂对不同微生物的杀菌能力不 同。此外，药剂浓度、作用时间及环境条件不同，其效果 也不一样。使用前需进行试验，灵活选择。
实验6-5 化学药剂对微生物的影响
四、实验方法 1.制平板：取无菌平皿三套，将已熔化并冷却至50℃ 左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基按无菌操作法倒入平皿中， 使冷凝成平板。 2.制备菌悬液：取无菌水3支，用接种环分别取大肠 杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草杆菌各1～2环接入无菌水中， 充分混匀，制成菌悬液。 3.接种：用无菌吸管分别吸取已制好的菌悬液0.1 mL 接种于平板上，用无菌玻璃刮铲涂匀。注意做好标记。 4.浸药：将灭菌滤纸片分别浸入四种供试药剂中。
实验6-5 化学药剂对微生物的影响
三、实验材料 1.菌种 培养24～48h的大肠杆菌，金黄色葡萄球菌， 枯草杆菌斜面菌种。 2.培养基和试剂 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，1g/L HgCl2，200g/L链霉素，200g/L青霉素，50g/L石炭酸。 3.器材 无菌平皿，无菌水，无菌吸管(1mL)，直径 0.6cm的无菌圆形滤纸片。
实验6-1 温度对微生物的影响
表6-1 不同类型微生物在不同温度条件下培养的生长情况
菌种
0℃
枯草杆菌
15℃
30℃
37℃
50℃
大肠杆菌
黑曲霉/青霉
注：用“—”表示不生长，“+”表示生长一般，“+ +”表示生长良好。
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实验6-2 紫外线对微生物的影响
一、实验目的 1.了解紫外线的杀菌作用原理； 2.学习紫外线杀菌试验方法。 二、实验原理 紫外线对微生物有强烈的致死作用，波长260nm的紫外 线杀菌力最强。其杀菌机制是短波的紫外线引起细胞核酸变 性导致微生物死亡。微生物对紫外线的吸收与剂量有关，剂 量高低取决于紫外灯的功率、照射距离与照射时间。在本试 验中采用15W紫外灯在距灯30cm处通过改变照射时间来处理 微生物。紫外线虽有较强的杀菌力，但其穿透力很弱，普通 玻璃、薄纸、水层等均能阻止其透过。
实验6-5 化学药剂对微生物的影响
1.滤纸片 2.抑菌圈
图6-2 药剂抑制实验
பைடு நூலகம்
5.加药剂：用无菌镊 子夹取浸药滤纸片(注意把 药液沥干)，分别平铺于同 一含菌平板上，注意药剂 之间勿互相沾染(图6-2)。 并在平皿背面做好标记。
6.培养：将平皿置于 28℃下培养48～72h后观 察结果。
实验6-5 化学药剂对微生物的影响
实验6-2 紫外线对微生物的影响
2.菌悬液制备 取试管无菌水2支，以无菌操作法分 别取金黄色葡萄球菌和黏质沙雷氏菌各2环，接入无菌水 中充分摇匀，制成菌悬液。
3.接种 将已倒入培养基的平皿分为2组，每组3个， 一组接金黄色葡萄球菌，一组接沙雷氏菌，用无菌吸管吸 取已制好的菌悬液各0.1mL，分别接种于二组平板上，用 无菌玻璃刮铲均匀涂布，随即用无菌镊子夹取无菌图案纸 一张，小心放在接种好的平皿中央(图6-1)。