放线菌鉴定中的生理生化实验生理生化实验

1.2.3放线菌鉴定中的生理生化实验
摘自"转谷氨酰胺酶基因的克隆表达及发酵条件优化"
放线菌鉴定中的生理生化实验,主要是测定菌种产生各种酶的活性。

在多数试验中釆用下列几种实验项目。

(1)明胶液化:测定链霉菌产生蛋白酶的能力。

将菌种接种于明胶培养基中,于28°C培养,分别在第5,7,9天观察其液化程度。

在观察前先将菌种管放入冰箱中冷却半小时,如明胶凝固成固体状态,说明不液化,如试管有液体出现,说明明胶己被液化。

(2)淀粉水解:测定链霉菌产生淀粉酶的活性。

将菌种接种在淀粉琼脂平板上,于28°C培养10天后,在菌落周围滴加Lugol碘液,如菌落周围呈现透明圈时,表示菌种产生淀粉酶,透明圈的大小表示淀粉酶活性的强弱。

如菌落周围染成蓝色,不出现透明圈者,说明该菌株不产生淀粉酶。

(3)牛奶的凝固与胨化:将菌种接种在脱脂牛奶管中,于28°C培养,分另I」在第5,10,20天各观察一次,如果牛奶形成凝块,为凝固现象,系放线菌产生凝乳酶引起蛋白质凝固。

在继续培养,则凝块被分解,那是菌种产生蛋白酶,使蛋白质水解成可溶性状态,称胨化现象。

一般是先凝固后后胨化。

(4)纤维素水解实验:将菌种接种在试管中一半浸在无碳源合成培养基内的滤纸条上,28°C培养,第30天时观察结果。

如果菌种能在滤纸条上生长,并分解却^条,表示该菌株产生纤维素酶,若纸条不被分解,则该菌株不产生纤维素酶。

(1)硝酸盐还原:将菌种接种在硝酸盐还原培养液中,28°C培养7天和14天,分
别测定硝酸盐还原的情况。

测定时,培养液倒出1ml于干净试管中,分别加入硝酸盐还原试剂甲液和乙液各2滴,如呈红色反应,即为阳性。

(2)碳源利用:不同的链霉菌利用不同的糖、醇、有机酸、脂肪酸等的能力有很大差异,这是放线菌鉴定的一项重要特征。

常用的碳源有阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、果糖、鼠李糖、庶糖、棉子糖、甘露醇、肌醇、甘油等。

近来国际上提倡只用前9种碳源。

基础培养基一般采用Pridham&Gottlieb所推荐的培养基。