水飞蓟素药学研究进展

发布日期20041201
栏目中药药物评价>>中药质量控制
标题水飞蓟素药学研究进展
作者李计萍
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审评一部李计萍
水飞蓟素是由菊科植物水飞蓟Silybum Marianum L.果实中提取得到的水难溶
性黄酮类化合物（总黄酮）。

1968年H.Wagner等从中提取得黄酮类化合物,
命名为水飞蓟素（Silymarin)。

药理实验证明,Silymarin对多种肝脏毒物引起的
肝脏损伤有明显的保护作用。

其靶器官为肝脏,进入体内后主要与血浆蛋白结合,
以结合型水飞蓟素的形式存在于血浆、胆汁及尿液中。

对抗肝损伤药物具有稳
定细胞膜,改善肝功能的作用,对急慢性肝炎、肝硬变和代谢中毒性肝损伤具有较
好的疗效。

近年来发现这一天然药物不仅具有保肝利胆作用,而且还有明显的抗
脂质过氧化,抗辐射,清除自由基和抗胃溃疡等作用。

其毒性小,无致畸和诱变作
用,在降血脂、防治动脉粥样硬化,预防脑缺血,抗血小板聚集等方面显示出可喜
的效果[1]。

由于水飞蓟素难溶于水及一般有机溶剂,口服吸收差，其生物利用度
较低,从而影响了其临床疗效。

国内外研究工作者正在积极开发研制其复合物，
或是通过其它途径改善其生物利用度，或是研究其注射剂，以提高疗效，扩大
应用范围。

下面就对其化学成分、检测方法及制剂等研究状况作一综述。

1 化学成分及其理化性质[2]
1．1 化学成分
20世纪60-80年代末，以H.wagner为代表的西德药学家从水飞蓟中分离提取
得有效成分，称之为水飞蓟素，是一类新型的具有C－9取代基的黄酮类化合
物，即以二氢黄酮醇和苯丙素类衍生物缩合而成的黄酮木脂素类。

主要有水飞
蓟宾(Silybin)、异水飞蓟宾、水飞蓟宁(,Silydianin)、水飞蓟亭（SilyChristin)、水飞蓟醇等。

1975年竹本常松等从水飞蓟种子中除获得了水飞蓟宾等异构体外，还获得了两种新黄酮醇木脂素，经红外、紫外及核磁共振等分析，确定其结构为2，3-脱氢水飞蓟宾和2，3-脱氢水飞蓟亭。

1979年Merlini等分离得到异水飞蓟宾，并推测水飞蓟宾和异水飞蓟宾可能分别为两个非对映体的混合物（C2、C3为同一结构，C2’、C3’是反式结构）。

其中三种主要成分为水飞蓟宾、水飞蓟宁、水飞蓟亭。

分别存在其立体异构体,比例为1:1。

这些同分异构体的分子式为C25H22O10,分子量为482。

在水飞蓟素中,水飞蓟宾:异水飞蓟宾:水飞蓟宁:水飞蓟亭比例为3:1:1:1,其中水飞蓟宾含量最高,活性也最高。

我国于1972年，由德国引进水飞蓟，在各地推广种植取得成功。

常凤岗等研究了我国引种的水飞蓟化学成分，得到两个单体，并与国外的栽培品种进行了比较，经IR、UV、13H、13C、MS等鉴定为水飞蓟宾和水飞蓟宁。

1．2理化性质
由丙酮加石油醚所得水飞蓟宾，为含1分子水之晶体,mP167℃,180℃分解。

由甲醇加水所得水飞蓟宾，熔点180℃。

0.25g在l00m1丙酮+乙醇中[α]D20为+11,UVλmax（甲醇）288nm（lg E4.33)。

水飞蓟宾溶于丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇,微溶于氯仿,不溶于水。

蓝其田等将适量水飞蓟宾纯品溶于无水乙醇中,于288±lnm处测得吸收系数E288为456±1.8。

张南生等将水飞蓟素溶于甲醇中,在288±lnm处测得吸收系数E为475.0,RSD=0.02%。

王鸿辰等研究了水飞蓟素在不同溶媒中的溶解量,以PEG-400为最高,依次为乙醇、丙二醇、甘油。

陈大为等测得了水飞蓟素在水中的溶解度为0.0401mg/ml。

2 定量分析方法
目前水飞蓟素的测定方法主要有分光光度法、薄层扫描法、HPLC法。

2．1 分光光度法
国家标准收载的水飞蓟素原料药主要采用的是分光光度法（比色法），以水飞蓟宾计测定水飞蓟素总黄酮的含量。

主要是加甲醇溶解，加2、4-二硝基苯肼溶液，λnm=490nm下测定。

部颁及国家标准中收载的益肝灵片和胶囊分别采用加甲醇超声处理，滤过，在288nm下,以水飞蓟宾计测定水飞蓟素总黄酮的含量[3]。

李凤前等用一阶导数分光光度法对水飞蓟素固体分散体中总黄酮进行了测定，该法可以排除PEG-6000载体对固体分散体中总黄酮测定的干扰。

[4] 2．2 薄层扫描法
吴知行等[5]采用CS-910型薄层扫描仪在硅胶G-0.6%CMC板上,以氯仿-丙酮
一甲酸(9:2:1)二次展开,对水飞蓟宾水溶性衍生物和制剂进行分
析,λs=288nm,λR=430nm。

罗淑荣等采用CS-930型双波长薄层扫描仪对益肝灵片中活性成分水飞蓟宾和水飞蓟亭进行了分离测定,展开剂:甲苯-醋酸乙酯一冰醋酸(2:1:0.5),显色剂:0.4%二氯氧锆无水乙醇溶液,λs=30Onm,λR=365mm。

[6]
2．3高效液相色谱法
检测波长288nm。

对制剂中水飞蓟亭、水飞蓟宁和水飞蓟宾的含量进行了测定，对大鼠、家兔及人体中生物利用度进行了考察。

2．3．1 药材及制剂
Quercia等用HPLC法分离测定了水飞蓟亭、水飞蓟宁和水飞蓟宾,色谱条
件:Chromosorb RP8μm柱,流动相为MeOH-0.02M H3P04(40:60)。

pashaHIltor等分离了水飞蓟宾和异水飞蓟宾的峰,色谱条件:C18柱,用
THF-H20(36:64)洗脱, 定天明等建立了一种用HPLC法分离测定利肝隆胶囊、益肝灵片、复方益肝灵片中水飞蓟宾、异水飞蓟宾、水飞蓟亭、水飞蓟宁等4个主要有效成分含量的方法,色谱条件:以shim-Pack VP一
ODS(150mm×4.6mm,5μm)及预柱（lmm×4.6mm,5μm)为分析柱,甲醇与混合溶剂水-二氧六环(9:1)按梯度洗脱为流动相,流速为1.5ml/min,检测波长为288nm,柱温为40℃。

姚水宝等用梯度高效液相色谱法分离测定了利加隆片（德国）中水飞蓟宾的含量,色谱条件:采用Shimpark CLC C18柱(150mm×6m，5μm)色谱柱,加YWG预柱，甲醇-水(38：62)为流动相,梯度洗脱条件为0-15min，甲醇30-70%；15-20min，甲醇70%，流速1.0ml/min,检测波长288nm。

[6-7] 2．3．2 生物样品
P.Morazzoni等研究了水飞蓟素的主要成分在大鼠体内的药代动力学过程，色谱条件: Lichrosorb Dio 15μm柱,流动相为正己烷-乙醇(80:20),流速1.2ml/min,分别测定了水飞蓟宾、异水飞蓟宾、水飞蓟宁和水飞蓟亭在血浆中的含量。

Martinelli等采用HPLC法定量分析人体血浆和尿液中水飞蓟宾的含量,色谱条件:Lichrosorb Diol (150mm×3mm id)正相柱,流动相为正己烷-乙醇(70:30)用120μl/L的85%磷酸酸化，流速0.8ml/min,检测波长214nm。

此方法没有将水飞蓟宾和异水飞蓟宾分离测定。

MasCher等采用RP-HPLC法对血浆中游离和结合的水飞蓟宾和异水飞蓟宾分离测定,色谱条件:Nudeosi1 120-4C－18
（80mm×4mm）柱,流动相为甲酸-0.02mol/L磷酸(1:1),流速1.0ml/min,检测波长285nm。

Rickling等采用柱切换电化学检测的HPLC法和反相紫外检测的
HPLC法将血浆中游离的总的水飞蓟宾和异水飞蓟宾进行分离测定,内标物为橙皮素,色谱条件:Nucleosi1 120-3C18柱(125m×3m),Nacleosi1 120-5Cl8保护柱(ll×3mm,ID),流动相为甲醇和0.1mol/L磷酸盐缓冲液(60:40),流速0.5ml/minm。

缪海均等对水飞蓟宾固体分散体胶囊的人体生物利用度进行了测定，建立了测定人血浆中水飞蓟宾的反相高效液相色谱法,色谱条件:采用u －Bondapak
C18(300mm×4.6m)色谱柱,甲醇-乙晴一磷酸盐缓冲液(pH3.0,29:20:50)为流动相,以萘酚为内标,检测波长288nm。

史向国等建立了测定大鼠血浆中水飞蓟宾浓度的反相高效液相色谱法,色谱条件:Kromasil C18柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-甲醇一磷酸二氢盐缓冲液(体积比为24:24:50,pH=5),检测波长为288nm。

江波等对水飞蓟素磷脂复合物家兔体内生物利用度进行了测定，建立了测定兔血浆中水飞蓟宾的反相高效液相色谱法,色谱条件:采用国产C18柱(150mm×4.6m，5μm)色谱柱,醋酸-甲醇-水(1：38：62)为流动相,检测波长
288nm。

[8－10]
3 制剂研究
水飞蓟素目前剂型有口服制剂:水飞蓟素片、益肝灵片、水飞蓟宾卵磷脂复合物硬胶囊。

商品名有:利肝隆,利加隆,益肝灵等。

注射剂:主要是做成水飞蓟宾衍生物,如:葡-N甲胺盐,二乙胺盐,N,二甲基甘氨酸盐,玻泪酸酶铀盐等或制成包合
物再做成水溶性注射剂。

在我国,生产水飞蓟素制剂有几十年的历史,常见的剂型主要为片剂、胶囊,现在尚有德国马博士制药厂生产的水飞蓟素制剂在我国销售。

这些制剂主要为水飞蓟素提取物或游离水飞蓟宾,在其释放度和生物利用度试验中发现结果均不理想。

有的制剂根本不能有效崩解,影响释放。

李钢等对国产与进口的水飞蓟素片的溶出度实验结果也证明了这一点。

[11]
由于水飞蓟素难溶于水及一般有机溶剂,口服吸收差，其生物利用度较低,从而影响了其临床疗效。

为改善其生物利用度，国内外药学工作者作了大量的工作。

改善难溶性药物吸收的措施一般有超细粉碎、成盐，添加助溶剂等。

近年来采用制成环糊精包合物、固体分散体，合成磷脂复合物，制成不同剂型等方法，研究表明，溶出度及生物利用度大大提高。

3．1 成盐、成酯制成注射剂
国外对水飞蓟宾一葡甲胺盐、水飞蓟宾二偏琥珀酸酯钠盐、水飞蓟宾环糊精、水飞蓟宾磷酸盐、水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复盐等的研究报道较多。

主要是水飞蓟宾磷脂酰胆碱复盐,是意大利Imverni della befra公司开发的脂溶性制剂,并于1985年7月申请欧州专利,同时也在美国、日本等十几个国家申请专利。

它不仅改善了水飞蓟宾的生物利用度,提高了疗效,而且还具有清除自由基、抗脂质过氧化等多种作用,因而应用范围较广。

国内研制的水飞蓟素复合物较局限仅限于水飞蓟素水溶性衍生物如水飞蓟宾.葡甲脂盐、水飞蓟宾邻苯二甲酸单酸纳盐的注射剂[1]。

王鸿辰[2]等研究了水飞蓟素在非水溶媒、复合溶媒中的溶解性能。

结果表明：聚乙二醇-乙醇-水（5：2：3）混合溶媒中可溶解16mg/ml，可作为注射剂的溶媒。

但制成的注射液加水稀释至含水量占75%以上时即出现浑浊，因此只可作肌肉注射，不宜静脉注射。

3．2 固体分散技术的应用
固体分散技术可通过增大药物的表面积，使药物较快溶解，药物在固体分散体中具较大的表面积，载体又可抑制药物聚集及对药物有抑晶性等，从而大大提高溶解度和溶出速率，促进药物的溶出和吸收。

在固体分散体载体的应用中，最常用的水溶性载体为PEG4000和PEG6000，他们的熔点低，毒性小。

在肠胃道易吸收，不干扰药物的含量测定，能够显著增加药物的溶出速率，提高药物的生物利用度。

缪海均等[8]对水飞蓟宾固体分散体胶囊的人体生物利用度进行了测定，比较了水飞蓟宾固体分散体胶囊与片剂的药代动力学参数，胶囊的Cmax和AUC0-1值较大。

对两种制剂的Cmax 和AUC0-1、Tmax经T检验和方差分析，均有显著性差异（P小于0.01），以片剂为标准，胶囊剂的相对生物利用度为F=219%，吸收优于片剂。

固体分散技术是近几十年发展起来的制剂新技术,是指制备制剂时固体药物,特别是难溶性药物的分散技术，该技术目前主要有药物微粉化,制成粉状溶液或溶剂沉淀物,制成固体分散体三大类。

国内药学工作者采用不同的水溶性载体将水飞蓟素制成固体分散体,并对增溶方法进行了比较研究。

陈大为等[12－14]曾分别制备水飞蓟素PEG熔融物、PVP共沉淀物、环状糊精包合物及分别制备了水飞蓟素与可压性淀粉、微晶纤维素、β-环状糊精的研磨混合物,并与国产水飞蓟素片及德国的利肝隆片进行比较,其溶解度与一定时间的最大溶出量均有了30-60倍数的提高。

通过紫外、红外及薄层扫描等多种分析方法的鉴定,固体分散体及研磨混合物中水飞蓟素的结构未发生改变。

邓莉等[15]以尿素、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、泊洛沙姆188等三种载体,用熔融法和共沉淀法制备水飞蓟宾固体分散体,并进行差热分析、X射线粉末衍射分析以鉴别药物在载体中的存在状态,最后进行了体外溶出研究。

结果表明水飞蓟宾在PVP中以无定型存在,在泊洛沙姆188中以微细结晶存在,在尿素中大部分仍以晶体形式存在,少量以分子状态存在。

溶出研究结果表明,泊洛沙姆188作载
体的水飞蓟宾固体分散体的溶解度最大,溶出速度最快。

朱铉等[16]研究了载体与表面活性剂对水飞蓟素固体分散体中水飞蓟宾溶出速度的影响,得出了水飞蓟素以聚乙二醇为载体的固体分散体提高水飞蓟宾的溶
出速率的结论。

汤秀珍等[17]以聚乙烯吡咯烷酮(PVP),聚乙二醇6000,聚乙二醇6000与吐温-80混合载体,制备固体分散体:以β-CD、HP-β-CD制备包合物,测定溶解度及体外溶出速度。

结果:水中溶解度PVP固体分散体大于包合物,载体比例越大,药物溶出愈快:比例相同时,PVP固体分散体溶出最快。

结论:PVP K30作为水飞前素团体分散体的载体,载药量大,增溶效果显著。

李风前等[18]研究了PEG6000固体分散体系对难溶性药物增溶的相关晶格变化规律。

结果,与原药比较,固体分散体中的药物的释放速率明显增大,PEG6000固体分散体系对难溶性药物水飞蓟素具有显著的增溶作用。

X-射线多晶衍射分析表明,PEG6000及药物在国体分散体中的晶格点与面间距离、衍射峰位移及相对强度等发生了规律性变化,药物和载体间无相互作用。

结论:PEG6000固体分散体的增溶作用与载体材料和药物的晶格参数的改变密切相关。

3．3 水飞蓟素磷脂复合物
从固体制剂角度来看，磷脂复合物为一种较为特殊的固体分散体，他有固定的熔点，是一种其化学本质较稳定，不同于药物和磷脂的分子化合物（络合物），该类化合物随磷脂种类及药物磷脂比例的不同而不同，一个磷脂分子可与不同数目的药物分子结合。

复合物光谱学特征推断，药物与磷脂的极性基团部分发生了较强的相互作用，抑制了分子中单链的自由转动，而磷脂的两个长脂肪酸链不参与复合反应，可自由移动，包裹了磷脂的极性部分形成一个亲脂性的表面，使复合物表现出较强的脂溶性。

它改变了药物的理化性质，使药物的脂溶性增加，水溶性减少。

促进药物分子与细胞膜结合而促进吸收，提高药物的生物利用度[19]。

张光军等对水飞蓟宾－卵磷脂复合物理化性质进行了研究，通过红外光谱和磷核磁共振波谱进行分析，水飞蓟宾和卵磷脂分子中均含有多个碳原子，其碳核磁共振谱非常复杂，不易识别，而水飞蓟宾中不含磷原子，卵磷脂中只有一个磷原子，对照卵磷脂和水飞蓟宾的磷核磁共振图谱，即可判断水飞蓟宾与卵磷脂在磷酸根基团上是否生成新的化学键。

作者认为，水飞蓟宾和卵磷脂在适宜的条件下制备的是一种分子型复合物，水飞蓟宾与卵磷脂之间没有新的共价键形成，没有新的化合物形成，故水飞蓟宾及卵磷脂自身化学性质在体内不会改
变。

该复合物提高了水飞蓟宾的脂溶性，故推测可以提高血药浓度和生物利用度[20]。

对水飞蓟素磷脂复合物的研究较深入，文献报道较多[19]，用四氯化碳、鬼笔碱处理大鼠，造成肝损伤的病理模型，灌胃给予水飞蓟素复合物，结果显示AST 和ALT明显降低，而相应的水飞蓟素仅引起两种酶的轻微下降。

究其原因，除磷脂复合物改善药物的胃肠道吸收外，可能卵磷脂稳定肝细胞膜与水飞蓟素抗肝活性产生了协同效应。

Daniele Savio等[2]研究了水飞蓟素与卵磷脂1：2比例制成的软胶囊与其同比例混合的硬胶囊之间的差异，结果表明，软胶囊的Cmax为硬胶囊的三倍，AUC-1是硬胶囊的2倍，Tmax也明显缩短。

Gatt等采用交换液相色谱法，分别测定了健康志愿者口服水飞蓟素及其磷脂复合物的血浆药物浓度，结果表明，磷脂复合物的达峰时间较长，峰浓度较高，消除半衰期快，曲线下面积是游离药物的3倍。

国内学者[21-22]采用HPLC 法对家兔体内生物利用度进行了研究，结果与Gatt等所测定的基本一致。

Morazzoni P等[23]研究了大鼠体内口服给药药物动力学，结果表明：给予复合物后，水飞蓟素在尿液与胆汁中的回收率较给予水飞蓟素的有显著提高，分别从0..032%和0.001%提高到3.26%和
3.73%，血浆中水飞蓟素的浓度也大大高于后者。

可见磷脂复合物可促进水飞蓟素的吸收，提高血浆和胆汁中药物的浓度，从而提高了生物利用度。

4．小结
4．1 水飞蓟素的化学成分基本清楚，但对于各异构体的分离还有待进一步研究。

4．2 HPLC法进行含量测定时，以水飞蓟宾计算水飞蓟宾及异水飞蓟宾的量基本可行，但尚需进一步探讨。

质量控制以总黄酮和水飞蓟宾的含量测定进行控制。

4．3 现阶段新药申报中存在的问题：主要是改剂型品种、申请已有国家标准的品种，在研究中制剂的剂量折算应以水飞蓟素总黄酮含量进行折算。

辅料用量、加入的分散剂选择缺乏比较研究依据。

对药品的溶出及生物利用度是否有影响，安全性如何应提供依据。

4．4 目前国内已有磷脂复合物、固体分散技术应用于水飞蓟素制剂的研究中，制成滴丸剂、软胶囊剂、胶囊剂等。

相信随着制剂技术的发展、新辅料、复合型辅料、表面活性剂的应用，将有望解决水飞蓟素水溶性低而影响疗效的缺点，充分利用我国大量种植的水飞蓟资源，使水飞蓟素更好的服务于人类，有更广阔的应用前景。

参考文献
1、苑辉卿等.水飞蓟素及其复合物的近期研究，国外医学.中医中药分册1996，18（1）：3－5
2、朱铉等.水飞蓟素及其制剂的研究进展，中国野生植物资源,2001, 20（3）：47－49
3、国家药品监督管理局,国家药品标准:益肝灵片（中华人民共和国卫生部药典委员会编.中华人民共和国卫生部药品标准,中药成方制剂,第八册,第154页,益
肝灵片WS34-1618-93。

）
4、李风前,等:水飞蓟素固体分散体中总黄酮的测定,中草药,2002,33:31－33
5、吴知行等.水飞蓟宾及其水溶性衍生物和制剂含量测定方法的研究南京药学院学报，1981，12（2）：28－36
6、定天明,田颂九,张正行等.水飞蓟素制剂中有效成分HPLC分离测定，药物分析杂志,1999,19(3):304－307
7、姚水宝等梯度高效液相色谱法分离测定了利加隆片（德国）中水飞蓟宾的含量中国药业；2001，10（8）：13
8、缪海均,李志远,刘呆林.反相高效液相色谱法测定人血浆中水飞蓟宾的浓度，药物分析杂志,2000,20(6):399－400
9、史向国,钟大放,张逸凡,等.反相高效液相色谱法测定大鼠血浆中水飞蓟宾的浓度沈阳药科大学学报,2001,18（2):113－115。

10、江波等水飞蓟素磷脂复合物家兔体内生物利用度的研究中国医药工业杂志2002，33（12）：598
11、李钢等:国产与进口水飞蓟素片的溶出度研究,药学实践杂志,2000，4:218
12、陈大为,刘立民,丁玉芝,等.水飞蓟素亲水辅料研磨混合物制备及溶出的研究，中成药,1993,15(5):2－4
13、陈大为,陈星灿,范晓文,等.水飞蓟素及其固体分散物片剂溶出考察，中成药,1992,14(8):3－5
14、陈大为等,水飞蓟素(益肝灵)片剂溶出速度的研究,中成药1992,14（8）：541
15、邓莉等.水飞蓟宾固体分散体的制备及体外溶出研究.第二军医大学学
报.2000，21（10）：961－964
16、朱铉等.水飞蓟素固体分散体中水飞蓟宾溶出度的研究.延边大学医学院学
报.2001，24（1）：21－24
17、汤秀珍等水飞蓟素增溶方法的比较研究华西药学杂志2001，16（3）：
193-195
18、李风前等.PEG6000固体分散体系对难溶性药物水飞蓟素的增溶作用与晶
格变化的关系药学学报2002，37（4）：294－298
19、翟光喜等药物磷脂复合物的研究进展中国药学杂志2001，36（12）：
800－802
20、张光军等.水飞蓟宾卵磷脂复合物红外光谱和磷核磁共振波谱特征中国新
药杂志2002，11(6):470-471
21、李绍顺等水飞蓟素磷脂复合物在家兔体内的药动学及生物利用度的研究
沈阳药科大学学报2001；18（9）：8－9
22、江波等水飞蓟素磷脂复合物家兔体内生物利用度的研究中国医药工业杂
志2002，33（12）：598－600
23、江波等提高难溶性药物口服生物利用度的方法中国医药工业杂志
2002；33（7）：358
备注。