细胞工程学复习考试重点

1.植物组织再生途径：（1）器官发生途径：有遇上组织或外植体诱导形成不定根或不定芽再获得植株的方法

外植体-脱分化-愈伤组织-再分化-根-生长素-芽-植株（2）.体细胞胚发生途径：在组织培养中起源于一个非合子细胞，经诱导分化出具有培根胚芽和胚轴的胚状结构，进而章程完整植株的途径

外植株-脱分化-愈伤组织-胚状体-再分化-再生植株

2.植物细胞的小规模培养：

a。看护培养：用一块活跃生长的愈伤组织来看护单个细胞，使其持续细胞分裂增值；b.饲养培养：吧处理过的无活性的或分裂很慢的细胞来饲养所需培养的细胞，使其分裂和生长的方法

3.植物细胞培养操作方式？

a分批式培养特点：一次性添加培养液，培养液体积不变，营养液逐渐消耗殆尽。细胞浓度增加，细胞持续生长至死亡b.添加式培养：特点体积逐渐增加，培养液阶段性添加，指数期延长，细胞浓度逐渐增加最后收获c半连续培养特点：总体积不变，培养液阶段性补充，中间分阶段收获d连续培养特点：细胞在近似恒定的生长状态下生长，细胞浓度产物、营养物质、Ph基本保持不变，总体积不变e.贯流式培养特点：细胞浓度上升，营养物质基本不变，总体积不变，不断取出和添加新的培养液

4.细胞融合的原理？

a.亲本的选择b亲本的靠近及粘附c细胞膜的形成d细胞质的渗透e细胞核的融合f融合细胞的筛选

5.原生质体的制备流程及要求：步骤：原生质体包括细胞膜、液泡膜和两者之间的细胞质，用于细胞工程。尤其是植物细胞，在细胞质融合的过程中需要先制备原生质体，也就是用纤维素酶和果胶酶去除原生质体外包裹的无生命物质——细胞壁。然后通过电刺激或震荡等物理方法使细胞融合。要求：无细胞壁、具有细胞全能性，能再生细胞壁

6.细胞融合的方法：1生物法;2、化学法（Nano3，PEG、高钙的高Ph）；3物理法、电容和，诱导法

7.细胞融合的意义：a、克服了不亲和性，实现远远杂交；b植物的抗逆性为多基因控制，因此可实现多基因控制性状c实现细胞质遗传性状重组

8.多倍体的特点：a形态上的巨大b有很多有良性转，如光合效率c抗病毒能力较强

9.多倍体植物的特点?

多倍体：个体中含有超过正常染色体数目的个体巨大性、染色体联会发身紊乱、抗逆性强、营养成分高10.多倍体的鉴定：a间接法，也叫核体积测定法，优点：快速缺点：准确性不高，不能辨别是几倍体b直接发：1、染色体计数缺点：浪费时间优点：准确性高，广泛用于实验室

11.单倍体：体细胞一半的染色体组的一个个体或含体细胞配子

12.单倍体的特点：得到纯和的二倍体、哼得到优良性状的物种

13.转基因植物：降外源基因转入到植物的细胞或组织中获得具有新的遗传性状的植物

14.转基因的方法：a直接导入法：基因枪法、PEG法；b载体介导法C 划分管道法d病毒感染发

15.动物细胞培养的定义：a动物细胞culture：模拟细胞动物体内的生理环境，是分离的动物细胞生张，增值的一门技术b原代细胞：从机体内取出细胞并立即进行培养，该细胞称为原代细胞，该过程称为原代培养c传代细胞：降原代细胞培养的细胞继续转接培养的过程

16.细胞类型：a贴壁细胞：成纤维状细胞、上皮细胞、游走性细胞、多形型细胞b非贴壁性细胞

17.动物细胞培养的工具与条件：a工具：超净台、烘箱、过滤器倒置显微镜、酶标仪、微孔板振荡器 b 条件：37度co2 5%-10% ph7.2-7.4 培养基中酸碱指示剂：酚红

18.培养基的分类及作用：a天然培养基：血清作用：提供基本营养物质、提供激素和各类生长因子、提供结合蛋白、对细胞有保护作用b合成培养基（加少许血清）：ＭＥＭ、ＤＭＥＭ、ＲＰＭＩｃ无血清培养基

19.常用溶液：ａ平衡盐水ＢＳＳ：有生理盐水和Ｇ制成，其中的无机离子是细胞的组成成分，维持细胞渗透压，调控培养基酸碱平衡ｂＰＨ调整液：３．７％５．６％７．４％的ＮａＨｃｏ３溶液，ＨＥＤＥＳｃ细胞消化液：胰蛋白酶０．１２５％０．２５％ＥＤＴＡ常用浓度０．０２％ｄ抗生素：青霉素、链霉素ｅＬ－Ｇｌｕ：１－４ｍｍｏｌ／Ｌ

20.动物细胞的培养方式：ａ贴壁培养：细胞贴附在一定的固相表面进行培养ｂ固定化培养ｃ悬浮培养

21.传代培养：ａ悬浮细胞传代：离心法传代、直接传代法ｂ半悬活细胞ｃ贴壁型细胞：吸出旧培养液、加胰酶、加EDTA

22.细胞株分类及其特点：原代细胞、二倍体细胞、融合细胞、基因工程细胞、转化细胞

23.生产商常用的细胞株：a CHO细胞可贴壁悬浮培养b VERO 铁臂生长c BHK-21细胞d WI-38细胞

24.动物细胞的培养方式：a 悬浮培养，大规模的培养最理想的方式 b 微载体培养

25.微载体：直径为60-250微米，适用于贴壁性依赖性细胞生长的微粒

26.微载体培养的具体步骤：a 选择合适的微载体类型b 浸泡及消毒50-100mg/g PBS c 接种 d 培养观察与细胞计数 e 消化：酶消化：0.25EDTA、PBS、E-EDTA 37度消化15min f 细胞收获离心g 传代培养

27.胚胎干细胞的鉴定：a 碱性磷酸酶的活性：AKP在未分化的干细胞中活性很高，而在已分化的干细胞中活性降低 b 端粒酶的活性 c 干细胞标记物

28.淋巴细胞杂交瘤技术：骨髓瘤细胞与免疫的动物脾细胞融合，得到的既能够分泌抗体，又能在体外无限增值的杂交瘤细胞，经过克隆培养得到的可以分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞

29.组织工程三要素：a 种子细胞：元代细胞，自体组织细胞、异种细胞，干细胞， b 生物支架材料：有机材料，无机材料，符合材料材料要求：a 生物相容性好b良好的生物降解性c合适的三维立体结构

30.转基因动物：在基因组内稳定的整合外源基因，并且外源基因可以稳定的遗传给后代的基因工程动物

31.转基因动物的意义：a 优良动物的育种b 基因治疗c医药生产

32.转基因动物的方法：a 原核期胚胎纤维注射法b 胚胎干细胞方法c 精子载体法d 逆转录病毒感染发e卵细胞显微注射法

33.转基因动物的原理：a目的基因的获得 b 目的基因的导入到胚胎干细胞或卵细胞中c 筛选携带目的基因细胞 d 体外培养方法和宿主动物的选择 e 发育和鉴定 f 筛选动物品系

34.乳腺生物反应器：将外源基因至于乳腺特异性调节序，使之在乳腺中表达，然后通过回收乳汁获得重要价值的生物活性蛋白的技术

35.MCAB制备过程;a动物免疫与免疫脾细胞制备b骨髓瘤突变缺陷细胞朱的培养与选择c饲养层细胞培养 d HAT培养基筛选