紫外可见分光光度计原理、使用及维护..

2）、不能用带易掉毛的工具(如劣质纸、劣质棉花等) 擦拭比
色皿的受光面，不要用洗洁精之类的清洁剂。以免影响测量。
主要部件
检测器
检测器的作用是检测光信号，并将光信号
转变为电信号。现今使用的分光光度计大 多采用光电管或光电倍增管作为检测器。
仪器展示

1、高档 - 紫外可见分光光度计 19系列
TU-1901/1900 紫外可见分光光度计
主要部件
吸收池

吸收池材质：吸收池又称比色皿或比色杯，按材料可分 为玻璃吸收池和石英吸收池。 切记：玻璃比色皿不能用于紫外区！ 区分方法:可用仪器实测紫外区200nm波长处的吸光
度值。
主要部件
吸收池 因比色皿的使用不当易导致数据重复性差。 原因：角度、位置变化、表面洁净度、污染程 度 注意：粘接的比色皿不适合装浓硫酸、不适合用高 于25瓦的超声波机清洗。
紫外可见分光光度计
知识介绍、使用及日常维护
主讲：
主要内容
1、分光光度法概述 2、分光光度计的特点和结构 3、分光光度法测定时需要考虑的因素 4、紫外可见分光光度计主要部件介绍 5、紫外分光光度计测样不稳定和不准确的原因
6、紫外分光光度计常见的非仪器问题
7、钨灯和氘灯的更换 8、日常维护
一、吸收光光度法概述
1、吸收光度法概念：基于物质对光的选择性吸收而建立的分析 方法称为吸收光度法。 吸收光度法
紫外可见分光光度法 200—780nm
红外光谱法 2.5—1000um
紫外可见分光光度法 200—400nm
可见分光光度法 400—780nm
2、吸收光谱的分类
光谱名称 波长范围 跃迁类型 分析方法
远紫外光
10～200nm

4）样品自身的问题 如：空白值过大、样品浓度过高，超出动态线性范围；试 剂等被污染或纯度不高；有气泡；样品显色在变化，未稳定； 有悬浮或沉淀物；见光分解；挥发、溶剂使用不当等。
仪器展示

2、中档 - 紫外可见分光光度计 18系列
岛津UV-1800双光束
仪器展示

3、 普及型 - 紫外可见分光光度计 T6系列
T6 紫外可见分光光度计
五、紫外分光光度计测样不稳定和不准确的原因

1）市电不稳 如：大功率用电器的启停(空调、烘箱、大型电机、电炉等) 2）比色皿的原因 如：紫外区错用玻璃比色皿；脏污；比色皿质量差； 3）操作原因 如：参数设置不当；样池架设置不当；比色皿放置倾斜、晃 动；取放比色皿时方向不竖直，用力过大使样池架挪位等。
2、结构
1）光源（氘灯、钨灯）→2）单色器
（光栅）→3）吸收池→4）检测器→ ↑样品 5）信号显示系统
三、分光光度法测定时需要考虑的因素
1、反应条件的选择
1)显色剂的用量；
2)溶液酸度；
3)溶液温度； 4)显色时间； 5)溶剂，比如有机溶剂常能降低有色化合物的分离度，从 而提高显色反应的灵敏度。
后测定试样溶液或者标准溶液的吸光度值，
参比溶液的作用除了消除吸收池壁对入射光
的放射和散射等影响外，合理选用时还可以
消除其他干扰，使测得的吸光度正确反映被 测物的浓度，提高测定的准确性。


4、测定条件的选择
1）吸收波长；一般选择最大吸收波长处。 2）吸光度范围，一般来说，吸光度在0.2～0.8时，浓度测 量的误差最小，这就是适宜的吸光度范围，解决办法：a 调 节溶液浓度如减少或者增加取样量，改变稀释倍数；b 使用 厚度不同的吸收池比如提高或者减少吸收池的厚度，需要重
主要部件
吸收池
吸收池的污染和清洗 ：
1）比色皿沾污会直接严重影响分析测试的结果！这个非常重要，在日常的分
析工作中，往往不大重视比色皿的沾污问题。 2）、污染清洗方法： a、如果肉眼观察有污点，就应清除掉；可用高级擦镜纸、软的黄鼠狼毛笔等 柔软的物质擦洗；
b、也可用洗液清洗；常用洗液：盐酸-水-甲醇（1:3：4体积比）或者铬酸洗
中层电子
真空紫外光度法
近紫外光
200～380nm
价电子
紫外光光度法
可见光
380～780nm
价电子
比色及可见光度法
近红外光
0.78～2.5um
分子振动
近红外光谱法
3、吸收光度法的理论基础和适用范围
1）吸收光度法的理论基础： 朗伯比尔定律：A=kbc，
朗伯定律是说明光的吸光度与吸收层厚度成正 比；比尔定律说明光的吸光度与溶液浓度成正 比。
2、显色反应时应注意共存离子的干扰

消除办法：


1)、控制溶液酸度；ຫໍສະໝຸດ Baidu
2)、加入掩蔽剂；


3)、选择适当的参比溶液；
4)、选择适当的波长；


5)、利用氧化还原反应；
6)、采用适当的分离方法；

7)、利用导数光谱法、双波长等新技术。
3、参比溶液的选择

用参比溶液调节分光光度计的吸光度为0，然
区。
主要部件
光源

绝大多数紫外分光光度计主要使用钨灯和氘灯作为辐射光源，
钨灯的波长范围在350～2500nm，主要用于可见光区的光
源；

氘灯的波长范围在180～460nm之间，主要用于紫外光区的 光源。

如果测定波长在180～400nm之间，应选择氘灯作为辐射光 源，如果波长在400nm以上应选择钨灯作为辐射光源，关闭 不用的光源。
2）朗伯比尔定律适用范围：朗伯定律对于各种 有色溶液都适用，比尔定律只有在一定浓度范 围内使用，吸光度A和浓度才成直线关系，它 只适用于浓度小于0.01mol/L的稀溶液。
二、分光光度计的特点及结构
1、特点： a、与其它光谱分析方法相比，其仪器设备和操作都比较简单， 费用少，分析速度快； b、灵敏度高； c、选择性好，有最大吸收波长。 d、精密度和准确度较高; e、用途广泛。
液，彻底清洗吸收池或者其他玻璃器皿。了解内容：铬酸洗液的配制方法： 20g的K2Cr2O7，溶于40mL水中,将浓H2SO4 360mL徐徐加入K2Cr2O7溶 液中。
主要部件

吸收池
c、严重的污染需要用超声波清洗。



清洗注意事项：
1）、不能用金属棒或硬的木棒(如牙签等)重擦比色皿，否则，
也会损坏比色皿的通光面，特别强调：比色皿的通光面不能损坏！
新作校正曲线；

3）狭缝宽度的选择，狭缝宽度直接影响测定的灵敏度和工
作曲线的线性范围，狭缝宽度太大，灵敏度下降，工作曲线
线性范围变窄，反之，相反。
四、紫外可见分光光度计主要部件介绍
光源：

紫外可见分光光度计的辐射源有两类：热辐射光 源和气体放电光源。

热辐射光源如钨灯和卤钨灯，可用于可见光区；
气体放电光源如如氢灯和氘灯，主要用于紫外光