植物多倍体的诱导

三、实验材料、器具及试剂
1.实验材料 洋葱（2n=2X=16）大蒜（2n=2X=16） 2.器具 显微镜、恒温培养箱、恒温水浴锅、剪刀、 镊子、解剖针、小试管、载玻片、盖片等 3.试剂 0.02%秋水仙素，卡诺氏固定液（酒精∶冰 醋酸=3 ∶ 1），1N HCl。
四、实验步骤
1.培养材料 剪去洋葱的老根，置于清水中发根，待根长到1.5至 2cm时候，将洋葱转移到0.02%秋水仙素中培养，一 部分留在清水中，25℃培养，直到根尖膨大并长长
5.染色 在载片上切取根尖膨大处的前部(呈乳白色的区域)，用镊 子将其挤碎,在载片上有材料之处加一滴卡宝品红染色液，染 色5min。
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6.压片 覆一盖片, 用解剖针敲击压片,然后隔吸水 纸用拇指展平,吸去多余染液。
7.观察 低倍镜下寻找染色体分散良好的分裂相, 换高倍镜观察染色体数目。
实验四、植物多倍体的诱导及观察
一、实验目的
1. 了解人工诱导多倍体的原理，学习用秋水 仙碱诱发多倍体植物的方法; 2. 学习识别多倍体植物的形态特征及其细胞 学特点。
二、实验原理
• 植物多倍体是指每个细胞中的染色体数具有3套或更多套 数的植物。随着染色体组倍数的增加，有可能使一些作物 的经济性状发生有利的变化。因此，植物多倍体的研究和 利用是育种工作中值得重视的途径之一。 • • • • 番茄2n=4x维生素C含量比2n=2x的多一倍； 2n=3x的西瓜，香蕉、菠萝无籽； 2n=3x的杜鹃因不育而花期特长。 月季中2n=2x花朵直径约5cm，2n=4x花朵直径约10cm， 2n=6x花朵直径约15cm； • 2n=8x的小黑麦在高寒地区仍能获高产，并且蛋白质含量 较高。
2. 固定 用蒸馏水冲洗根尖2次,切取根尖末端0.5cm投入卡 诺氏固定液(无水乙醇:冰醋酸=3:1)பைடு நூலகம்管中,固定4~24h。
3.洗涤： 取出固定完毕的根尖用蒸馏水浸洗5min。
4.解离 先将1N 盐酸放在试管中置60 ℃水浴锅中预热，然 后把洗涤干净的根尖转移至预热的试管中进行解离 8min左右（以根尖伸长区透明、分生区呈乳白色时停止 解离为宜），然后将根转移到玻璃小瓶浸洗5min。
正常洋葱根尖细胞染色体
秋水仙素处理后洋 葱根尖细胞染色体： 2n=16
2n=4x=32
2n=8x=64
五、注意事项
1、秋水仙素为白色粉末，易溶于冷水、乙醇、甲醛中，有 剧毒，使用时要特别注意，切勿使药物进入眼内或口中 2、由于秋水仙素是剧毒，使用时，秋水仙素溶液浓度不能 过大，否则会杀死细胞，0.01-0.1%左右的浓度诱导效果最 好。
3、不同植物多倍体育种所需秋水仙素是不同的
六、思考题
1 .绘制或拍摄你所看到的洋葱根尖处理与对照的细胞分裂中 期染色体图像 2.根尖经秋水仙素处理之后为什么会发生膨大?
3.洗涤： 取出固定完毕的根尖用蒸馏水浸洗5min。
4.解离 先将1N 盐酸放在试管中置60 ℃水浴锅中预热，然 后把洗涤干净的根尖转移至预热的试管中进行解离 8min—10min（以根尖伸长区透明、分生区呈乳白色时停 止解离为宜），然后将根转移到玻璃小瓶浸洗5min。 5.染色 在载片上切取根尖膨大处的前部(呈乳白色的区域)， 用镊子将其挤碎,在载片上有材料之处加一滴卡宝品红 染色液，染色5 min。 6.压片 覆一盖片, 用解剖针垂直敲击压片,然后隔吸水纸用 拇指展平,吸去多余染液。 7.观察 低倍镜下寻找染色体分散良好的分裂相,换高倍镜观 察染色体数目。
物理方法：温度剧变（高温、低温），机械损伤（嫁 接、反复的切断产生愈伤），各种射线照射。 化学方法：秋水仙素、萘嵌戊烷、异生长素、富民农 等，其中以秋水仙素效果最好。 秋水仙素是以百合科植物 秋水仙(Colchicum autumnale)的种子及器官中提炼出来的 生物碱。白色结晶，有剧毒，使用时应避免接触皮肤及溅 射入口、眼。秋水仙素诱发多倍体的作用机制是阻止分裂 细胞形成纺锤丝，而对染色体的结构和复制无显著影响。 若浓度适合，药物在细胞中扩散后，不致发生严重的毒害 ，细胞经一定时期后仍可恢复正常，继续分裂，只是染色 体数目加倍成为多倍性细胞，并在此基础上进一步发育成 为多倍体植物。
多倍性也有一定的负面效应
• 1. 结实率和分蘖率下降等。 • 2. 相对于植物，动物的多倍体利用比较少.
多倍体已成功地应用于植物育种,用人工方法诱导多 倍体,可以得到一般二倍体所没有的优良经济性状,如粒长、 穗长、抗病性强等.三倍体西瓜、三倍体甜菜、八倍体小 黑麦已在生产上应用.
诱发植物多倍体的方法及原理