对流免疫电泳

实验原理
利用琼脂双向扩散与电泳技术结合的方 法,根据抗原与抗体所受电场力与电渗 力合力的大小,使它们发生对向移动,在 它们浓度与比例合适处形成肉眼可见的 沉淀物.
电渗：指在电场中液体对于一个固定固体的相 对移动称为电渗。液体移动的方向取决于固体带 的是正电荷或负电荷，如果电渗的方向于样品的 移动方向相同，那么样品的迁移率加快，反之， 减慢，甚至倒退。实际上在电泳的过程中受到电 泳力和电渗力的双重作用。
即将抗原 和抗体分别加入 琼脂对应的孔中， 二者会向四周扩 散，在二者比例 合适处形成白色 沉淀线。
火箭免疫电泳
单向扩散+ 电泳：将单向 扩散与电泳技 术相结合的一 种方法。
沉淀峰的高 度与抗原的浓 度成正比。
对流免疫电泳
实验目的
熟悉对流免疫电泳的原理 掌握对流免疫电泳的操作方法 了解对流免疫电泳的应用
电场力 电场力
抗原－ 抗体＋
电场力 电场力
电场力 ＞ 电渗力 电场力 ﹤ 电渗力
实验材料
1℅琼脂 打孔器 微量加样器 玻片 抗原 抗体 槽式电泳仪 电炉等
实验步骤
制板
3－4ml琼脂
打孔
孔间距3mm
加样
抗体
抗原
电泳
结果分析
注意事项
一 抗原、抗体的电极方向不能放反 二 电泳时电流不宜过大,以免蛋白质变性 三 抗原、抗体相对浓度要适当 四 电泳的时间与孔距等有关
思考题
一 简述对流免疫电泳试验的原理? 二 如果本试验中没有出现沉淀线考虑有何
因素? 三 说明凝集反应与沉淀反应的区别。
对流免疫电泳
免疫学
基本概念源自文库
可溶性抗原与相应的抗体在溶液或凝胶中接触 可形成肉眼可见的抗原与抗体复合物沉淀,即免 疫沉淀反应.可溶性抗原亦称沉淀原,抗体亦称 为沉淀素. 沉淀物形成的主要原是因为抗原与抗体分子表 面的疏水基团相互接近而有效的排出它们之间 的水分. 免疫复合物的形成通常经过两步 1:抗原与抗体 的特异性结合 2:形成肉眼可见的免疫复合物晶格.
分类
环状沉淀反应
沉
淀
反
琼脂扩散试验
应
絮状反应
对流免疫电泳
双向扩散 单向扩散
电 ＋泳
技 术
火箭免疫电泳
单向扩散
即将一定量的抗体混合于琼脂中，待琼脂凝固后打孔 并加入抗原，孔中的抗原向四周扩散，在抗原与抗体 的比例合适处呈现白色的沉淀环。沉淀环的大小与抗
原的浓度成正比，故该试验是定量试验。
双向扩散