对流免疫电泳(免疫学实验)

四、结果观察 断电后，将玻板置于灯光下，衬以黑色背景 观察。阳性者则在抗原抗体孔之间形成一条 清楚致密的白色沉淀线。如沉淀线不清晰， 可把琼脂板放在湿盒中37℃数小时或置电泳 槽过夜再观察。
五、注意事项 1．抗原抗体浓度的比例 当抗原抗体比例不适 合时，均不能出现明显可见的沉淀线。 2．适当的电渗作用在对流免疫电泳中是必要 的。当琼脂质量差时，电渗作用太大，而使血 清中的其它蛋白成分也泳向负极，造成非特异 性反应。在某些情况，琼脂糖由于缺乏电渗作 用而不能用于对流免疫电泳。 4．当抗原抗体在同一介质中带同样电荷或迁 徙相近时，则电泳时两者向着一个方向泳动。 故不能用对流免疫电泳来检查。
二、对流免疫电泳 即双扩+电泳技术Biblioteka Baidu用途：同双扩 优点：快、敏感性高 缺点：分辨力低
三、操作方法
1．制琼脂板 以pH8.6离子强度0.05巴比妥缓冲液配成 1%～1.5%琼脂凝胶板，厚度2mm～3mm。 2．打孔 琼脂冷却后，按图打孔，打成对的小孔数列， 孔径0.3cm～0.6cm，孔距0.4cm～1.0cm。挑去孔内琼 脂，封底。 3．加样 一对孔中，一孔加抗原，另一孔加抗体。 4．电泳 将抗原孔置于负极端。电流强度3mA/cm～ 6mA/cm，电泳时间30min～90min。
对流免疫电泳
一、基本原理
在pH值8.6的琼脂凝胶中，抗体球蛋白只带有微弱的负 电荷，而且它分子又较大，所以泳动慢，受电渗作用 的影响也大，往往不能抵抗电渗作用，故在电泳时， 反而向负极倒退。而一般抗原蛋白质常带较强的负电 荷，分子又较小，所以泳动快，虽然由于电渗作用泳 动速度减慢，但仍能向正极泳动。如将抗原置阴极， 抗体置阳极，电泳时，两种成分相对泳动，一定时间 后抗原和抗体将在两孔之间相遇，并在比例适当的地 方形成肉眼可见的沉淀线。这样由于电泳的作用，不 仅帮助抗体定向移动，因而加速了反应的出现，而且 也限制了琼脂扩散时，抗原抗体向四周自由扩散的倾 向，因而也提高了敏感性，本法比琼脂扩散法的灵敏 度要高 10～ 16 倍，而且反应时间短，可用于各种蛋白 的定性和半定量测定。