医学免疫学实验课件-实验二 细菌的形态学检查
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微生物形态学检验-PPT
➢ 培养特性：在沙氏培养基或营养琼脂上培养5-7日 可见菌落，菌落表面有皱折、呈颗粒状、黄色或深 橙色；在血琼脂平板上菌落较小、凸起、呈白色
肠杆菌科 Enterobacteriaceae
➢ 基本特征：在血琼脂平板上生长，在麦康凯、伊红 亚甲蓝、中国蓝琼脂平板上形成发酵和不发酵乳糖 的菌落；在三糖铁或克氏双糖底层、上层产酸、产 气、氧化酶试验阴性
伤寒沙门氏菌 S.typhi
➢ 形态与染色：革兰阴性杆菌，菌体细长，有周鞭毛
➢ 培养特性：在麦康凯上形成无色、透明菌落，SS平 板上呈无色、透明菌落、但大部分菌落中央呈黑色
肺炎克雷伯氏菌K.pneumoniae
➢ 形态与染色：革兰阴性杆菌，单个、成双或短链排 列，荚膜染色可见外周有透明、环状荚膜
细菌分离培养及鉴定
➢ 细菌分离培养：使细菌在平板上分散生长，便 于观察菌落特征，也易于挑取单个菌落进行生 化鉴定或血清学试验
➢ 细菌鉴定：形态与培养特性：形态、染色、培 养特性和菌落特征是鉴定细菌的初步依据
细菌形态与染色特点
➢ 染色性：革兰阳性、阴性，抗酸染色阳性、阴性等 ➢ 形状、大小和排列：球菌、杆菌、螺形菌，菌体大小、
荧光假单胞菌 P.fluorescens
➢ 形态与染色：阴性杆菌、无芽孢、无荚膜、端鞭毛 ➢ 培养特性：在麦康凯上呈无色半透明菌落，在营养
琼脂上形成荧光色的菌落
恶臭假单胞菌 P.putida
➢ 形态与染色：阴性杆菌、无芽孢、无荚膜、极端鞭毛 ➢ 培养特性：在麦康凯上呈较大无色、湿润菌落，在营
养琼脂上形成黄绿色菌落，紫外线下可见荧光
炭疽芽孢杆菌 B.anthracis
➢ 形态与染色：为致病细菌中最大的革兰阳性杆菌， 两端截平，体外培养后形成长链，排列呈竹节形。 在体内常单个存在或短链，有荚膜，在人工培养基 上可见芽孢，卵圆形并位于菌体中央，菌体不膨大
细菌的检查方法ppt课件
细菌学诊断
原理：分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，包围 在肽聚糖的外面，不易着色；分枝菌酸结合染料 结实。
用途：分枝杆菌的鉴定
方法
初染：石炭酸复红 〔初染加温延伸染色时 间〕
二、细菌感染的检查 细菌学诊断
致病菌的检验程序
普通琼脂平板
血平板
标 选择培育基 分别
本
培育
察看菌落性状、溶血性、色素 ——初步鉴别
普通光学显微镜
暗视野显微镜
相差显微镜
隧道显微镜
一、形状学的检查
〔二〕不染色标本的检查
一、形状学的检查
〔三〕染色标本的检查 1、单染法 2、复染法 革兰染色 抗酸染色 3、特殊染色法
革兰染色〔Gram stain〕
方法
•涂片 •枯燥 •固定 •染色：
初染：结晶紫
媒染：碘液 脱色：95%酒精
复染：苯酚复红或沙黄
细菌学诊断
细菌学诊断
初染：结晶紫 媒染：碘液 脱色：95%酒精 复染：苯酚复红或沙黄
G+金黄色葡萄球菌 紫色 G-大肠杆菌 红色
革兰染色〔Gram stain〕 原理：细胞壁构造 用途: 细菌分类 了解细菌致病性 选择用药
细菌学诊断
抗酸染色
碱性美兰细菌学诊断1617致病菌的检验程序普通琼脂平板血平板选择培养基分离培养细菌学诊断观察菌落性状溶血性色素初步鉴别纯培养生化反应测定挑取可疑菌落涂片染色镜检血清学鉴定18细菌分离培养分离培养是微生物学诊断的金标准是最可靠的传统诊断技术
第六节 细菌的检查方法
一、细菌形状的检查
〔一〕显微镜 普通光学显微镜 暗视野显微镜 相差显微镜 荧光显微镜 电子显微镜 扫描隧道显微镜
挑取可疑菌落
涂片、染色、镜检
医学课件医学免疫学微生物学2杆菌
2、培养特性：兼性厌氧或需氧，营养要求低 ，普通平板上可生长，有些菌株可产生β溶血环 。
3、生化反应活泼 鉴别肠道致病菌与非致病菌—乳糖发酵试验 肠道致病菌—阴性，不分解乳糖 肠道非致病菌—阳性，分解乳糖
共同特性
4、抗原结构：菌体(O)抗原 鞭毛(H)抗原 荚膜或包膜(K)抗原 菌毛抗原
如大肠埃希菌血清型表示方式：O：K：H 例如：O111：K58：H2
肠杆菌科
肠杆菌科（Enterobacteriaceae）细菌
是一大群生物学性状相似的革 兰阴性杆菌，常寄居在人和动物的 肠道内，亦存在于土壤、水和腐物 中。
目前已有44个属，170多个种。 但该科引起人类95％以上感染的菌种 却不到为三种情况：
①致病菌：有少数细菌总是引起人类疾病，如 伤寒沙门菌、志贺菌、鼠疫耶尔森菌等；
ETEC EIEC EPEC EHEC EAggEC
肠产毒素型大肠埃希菌（ETEC） 致病物质 肠毒素 菌毛粘附素 内毒素 K抗原 所致疾病 5岁以下婴幼儿腹泻 旅游者腹泻 水样便，恶心、呕吐，腹痛，低热
肠侵袭型大肠埃希菌（EIEC） 致病物质 不产生肠毒素 侵袭结肠粘膜上皮细胞并在其中生长 繁殖 所致疾病 主要侵犯较大儿童和成人 腹泻呈脓血便，有里急后重 致病类似菌痢，较少见 诊断 EIEC无动力、生化反应和抗原结构
的案例。在這些食物中发现O157型E.coli
。
O157型E.coli可产生毒素，造成肠出血。
通常患者在一周内可复原。約有7%患者可 因严重失血而致死。 O157，1996年 （日本）感染万人
completed
肠集聚型大肠埃希菌（EAggEC） 致病物质 毒素：肠集聚耐热毒素（EAST） 粘附素 所致疾病 引起婴儿持续性腹泻，脱水，偶有 血便
3、生化反应活泼 鉴别肠道致病菌与非致病菌—乳糖发酵试验 肠道致病菌—阴性，不分解乳糖 肠道非致病菌—阳性，分解乳糖
共同特性
4、抗原结构：菌体(O)抗原 鞭毛(H)抗原 荚膜或包膜(K)抗原 菌毛抗原
如大肠埃希菌血清型表示方式：O：K：H 例如：O111：K58：H2
肠杆菌科
肠杆菌科（Enterobacteriaceae）细菌
是一大群生物学性状相似的革 兰阴性杆菌，常寄居在人和动物的 肠道内，亦存在于土壤、水和腐物 中。
目前已有44个属，170多个种。 但该科引起人类95％以上感染的菌种 却不到为三种情况：
①致病菌：有少数细菌总是引起人类疾病，如 伤寒沙门菌、志贺菌、鼠疫耶尔森菌等；
ETEC EIEC EPEC EHEC EAggEC
肠产毒素型大肠埃希菌（ETEC） 致病物质 肠毒素 菌毛粘附素 内毒素 K抗原 所致疾病 5岁以下婴幼儿腹泻 旅游者腹泻 水样便，恶心、呕吐，腹痛，低热
肠侵袭型大肠埃希菌（EIEC） 致病物质 不产生肠毒素 侵袭结肠粘膜上皮细胞并在其中生长 繁殖 所致疾病 主要侵犯较大儿童和成人 腹泻呈脓血便，有里急后重 致病类似菌痢，较少见 诊断 EIEC无动力、生化反应和抗原结构
的案例。在這些食物中发现O157型E.coli
。
O157型E.coli可产生毒素，造成肠出血。
通常患者在一周内可复原。約有7%患者可 因严重失血而致死。 O157，1996年 （日本）感染万人
completed
肠集聚型大肠埃希菌（EAggEC） 致病物质 毒素：肠集聚耐热毒素（EAST） 粘附素 所致疾病 引起婴儿持续性腹泻，脱水，偶有 血便
《病原生物学与免疫学》课件——2细菌的形态与结构
细胞质中含有的结构
细胞质中含有的结构
核糖体
是细菌蛋白质的合成 场所
质粒
是染色体外的遗传物 质，控制着某些特定 的遗传性状。能独立 自行复制，医学上重 要的质粒有R质粒、F 质粒、Col质粒等。
胞质颗粒
多数为细菌营养和能 量的贮存物，常见的 有异染颗粒，具有鉴 别意义。
第一节 细菌的大小、形态与结构
第一节 细菌的大小、形态与结构
芽胞的类型
芽胞的大小、形状、位置等随菌种而异。
谢谢聆听
1.细胞壁
细胞壁
是包绕在细胞膜外的一层坚韧而略有弹性的膜状结构，位 于细菌细胞的最外层，它是保护细菌使之在复杂多变的环 境得以生存的重要结构。
第一节 细菌的大小、形态与结构
细胞壁的主要功能
①维持细菌固有形态 ②保护细菌抵抗低渗外环境 ③与细胞膜共同完成细胞内外的物质交换 ④决定细菌抗原特性
第一节 细菌的大小、形态与结构
（2）细胞壁的结构
① 肽聚糖
革兰阳性菌
聚糖骨架 四肽侧链 五肽交联桥
革兰阴性菌
聚糖骨架 四肽侧链
第一节 细菌的大小、形态与结构
肽聚糖结构
第一节 细菌的大小、形态与结构
（2）细胞壁的结构
② 磷壁酸
革兰阳性菌特有成分； 磷壁酸按其结合部位分为壁磷壁酸和膜磷壁酸。
③ 外膜
革兰阴性菌特有成分； 由内向外分别由脂蛋白、脂质双层和脂多糖组成。
4.核质
核质
是原核生物特有的无核膜、核仁、无固定形态的原始细胞核，又 称为原核或拟核。具有细胞核的功能，它控制着细菌的形态结构、 生长繁殖、致病性、遗传和变异。
第一节 细菌的大小、形态与结构
（二）细菌的特殊结构
荚膜
细胞质中含有的结构
核糖体
是细菌蛋白质的合成 场所
质粒
是染色体外的遗传物 质，控制着某些特定 的遗传性状。能独立 自行复制，医学上重 要的质粒有R质粒、F 质粒、Col质粒等。
胞质颗粒
多数为细菌营养和能 量的贮存物，常见的 有异染颗粒，具有鉴 别意义。
第一节 细菌的大小、形态与结构
第一节 细菌的大小、形态与结构
芽胞的类型
芽胞的大小、形状、位置等随菌种而异。
谢谢聆听
1.细胞壁
细胞壁
是包绕在细胞膜外的一层坚韧而略有弹性的膜状结构，位 于细菌细胞的最外层，它是保护细菌使之在复杂多变的环 境得以生存的重要结构。
第一节 细菌的大小、形态与结构
细胞壁的主要功能
①维持细菌固有形态 ②保护细菌抵抗低渗外环境 ③与细胞膜共同完成细胞内外的物质交换 ④决定细菌抗原特性
第一节 细菌的大小、形态与结构
（2）细胞壁的结构
① 肽聚糖
革兰阳性菌
聚糖骨架 四肽侧链 五肽交联桥
革兰阴性菌
聚糖骨架 四肽侧链
第一节 细菌的大小、形态与结构
肽聚糖结构
第一节 细菌的大小、形态与结构
（2）细胞壁的结构
② 磷壁酸
革兰阳性菌特有成分； 磷壁酸按其结合部位分为壁磷壁酸和膜磷壁酸。
③ 外膜
革兰阴性菌特有成分； 由内向外分别由脂蛋白、脂质双层和脂多糖组成。
4.核质
核质
是原核生物特有的无核膜、核仁、无固定形态的原始细胞核，又 称为原核或拟核。具有细胞核的功能，它控制着细菌的形态结构、 生长繁殖、致病性、遗传和变异。
第一节 细菌的大小、形态与结构
（二）细菌的特殊结构
荚膜
第二次实验 细菌的形态学观察
（2）器材和试剂
1、菌种
葡萄球菌 大肠杆菌
2、试剂
初染液 媒染液 脱色液 复染液
革兰染色液
结晶紫 卢戈氏碘液 95%乙醇 稀释石碳酸复红
3、其它
载玻片、染色盘、接种环、酒精灯、生理盐水等
（3）方法与步骤
1、细菌涂片的制备 涂片 干燥
1min
固定
1min
2、染色
初规则
一.进入实验室必须穿护士服,不必需的物品不要 携带入室，严禁在实验室进食、饮水。 二.保持实验室的安静和秩序,实验要严肃认真。 三.如有传染性材料的污染,及时报告老师。 四.实验过程中有仪器和器材的损坏要报告老师 并登记。 五.实验后的材料要放到指定的位置。 六.离开实验室前,要用肥皂洗手,接触过传染性强 的实验材料要用0.1%的新洁尔灭泡手1-2分钟 七.值日生要作好值日工作,关好水,电,门窗,作好 实验记录本的登记方可离开实验室。
2、细菌的形态学观察
革兰染色 （1）原理
革兰阳性菌（G ）
+
革兰阴性菌（G ）
-
革兰染液： 1、初染液：结晶紫 2、媒染液：卢戈氏碘液 3、脱色剂：95%乙醇 4、复染剂：稀释石炭酸复红
革兰阳性菌细胞壁结构：肽聚糖+磷壁酸
革兰阳性菌细胞壁肽聚糖化学 结构
N-乙酰胞壁酸 N-乙酰葡萄糖胺 四肽侧链 β -1.4糖苷键
生物安全（biosafety）是生物技术安全的总称，指与 生物有关的各种因素对社会、经济、人类健康以及生态环境 所产生的危害或潜在风险。
病原微生物所导致的安全问题，如病原微生物实验室的 安全隐患、生物武器、生化恐怖、重大传染病的爆发流行等， 也是人类所面临的最现实的生物安全问题。
病原微生物实验室生物安全的核心是防扩散和防感染。
医学微生物学实验形态学检查PPT课件
析。
一、观察并完成绘图作业（9个视野）
作业
1）葡萄球菌
2）链球菌
3）脑膜炎球菌
4）大肠杆菌
Hale Waihona Puke 5）分枝杆菌 6）霍乱弧菌
7）芽孢： 破伤风梭菌
8）荚膜： 肺炎链球菌
9）鞭毛： 伤寒沙门菌
作业
（二）、记结果：
（二）、记结果：
大肠杆菌呈 色 葡萄球菌呈 色
性；记G性； 记G+
(一)基本形态 1）葡萄球菌
G+ 球形，直径约1μm，呈葡萄串状排列； 无鞭毛和芽孢、一般不形成荚膜；
(一)基本形态 2）链球菌
直径约1μm。链状排列。无鞭毛，不形成芽胞。
(一)基本形态 3）脑膜炎球菌
革兰染色阴性，0.6-0.8μm 肾形、成双排列，凹面相对； 多位于中性粒细胞内；
G+,菌体细长，芽胞正圆， 位于菌体顶端，使细菌呈鼓槌状.
光镜图
电镜图
（二）特殊构造
8）肺炎链球菌
形态与染色： 革兰染色阳性，双球菌，矛头状，钝端相对； 无芽胞和鞭毛，有厚荚膜；
（二）特殊构造 9）鞭毛：伤寒沙门菌
G-杆菌 0.6-1.0µ m
*2-4µ m 周身鞭毛
抗酸染色
细长略带弯曲，分枝状，有荚膜，抗酸染色阳性
手；避免有菌材料溅出；破损器材及时处理并报告。 5.实验过程中避免一切不良的个人习惯；操作中产生的废
料要扔在指定容器内；实验完毕清理台面，值日生严格 认真打扫卫生，关闭水电，门窗，洗手后离开实验室。
（一）显微镜油镜的使用
一、实验目的 学习并掌握普通光学显微镜的构造和油镜的使用技
术及维护的基本知识
三、细菌涂片标本制作 和革兰染色法
一、观察并完成绘图作业（9个视野）
作业
1）葡萄球菌
2）链球菌
3）脑膜炎球菌
4）大肠杆菌
Hale Waihona Puke 5）分枝杆菌 6）霍乱弧菌
7）芽孢： 破伤风梭菌
8）荚膜： 肺炎链球菌
9）鞭毛： 伤寒沙门菌
作业
（二）、记结果：
（二）、记结果：
大肠杆菌呈 色 葡萄球菌呈 色
性；记G性； 记G+
(一)基本形态 1）葡萄球菌
G+ 球形，直径约1μm，呈葡萄串状排列； 无鞭毛和芽孢、一般不形成荚膜；
(一)基本形态 2）链球菌
直径约1μm。链状排列。无鞭毛，不形成芽胞。
(一)基本形态 3）脑膜炎球菌
革兰染色阴性，0.6-0.8μm 肾形、成双排列，凹面相对； 多位于中性粒细胞内；
G+,菌体细长，芽胞正圆， 位于菌体顶端，使细菌呈鼓槌状.
光镜图
电镜图
（二）特殊构造
8）肺炎链球菌
形态与染色： 革兰染色阳性，双球菌，矛头状，钝端相对； 无芽胞和鞭毛，有厚荚膜；
（二）特殊构造 9）鞭毛：伤寒沙门菌
G-杆菌 0.6-1.0µ m
*2-4µ m 周身鞭毛
抗酸染色
细长略带弯曲，分枝状，有荚膜，抗酸染色阳性
手；避免有菌材料溅出；破损器材及时处理并报告。 5.实验过程中避免一切不良的个人习惯；操作中产生的废
料要扔在指定容器内；实验完毕清理台面，值日生严格 认真打扫卫生，关闭水电，门窗，洗手后离开实验室。
（一）显微镜油镜的使用
一、实验目的 学习并掌握普通光学显微镜的构造和油镜的使用技
术及维护的基本知识
三、细菌涂片标本制作 和革兰染色法
细菌的形态学检查法.ppt
显微镜是人类各个时期最伟大的发明物之一。在它发明出来之前，人类关于周围世界的 观念局限在用肉眼，或者靠手持透镜帮助肉眼所看到的东西。
显微镜把一个全新的世界展现在人类的视野里。人们第一次看到了数以百计的“新的” 微小动物和植物，以及从人体到植物纤维等各种东西的内部构造。显微镜还有助于科学家发 现新物种，有助于医生治疗疾病。上图：这是17世纪英国科学家罗伯特·胡克的显微镜。它有 一根内装透镜的简易皮管，安放在一个可调整的架子上。灌满水的玻璃球用来把光聚焦到物 体上。
1665年前后，英国的胡克在显微镜中加入粗动和 微动调焦机构、照明系统和承载标本片的工作台。 1673～1677年期间，荷兰的列文胡克制成单组元放大 镜式的高倍显微镜。
19世纪，高质量消色差浸液物镜的出现，使显微 镜观察微细结构的能力大为提高。1827年阿米奇第一 个采用了浸液物镜。19世纪70年代，德国人阿贝奠定 了显微镜成像的古典理论基础。
古典的光学显微镜只是光学元件和精密机械元件的组 合，它以人眼作为接收器来观察放大的像。后来在显微镜 中加入了摄影装置，以感光胶片作为可以记录和存储的接 收器。现代又普遍采用光电元件、电视摄像管和电荷耦合 器等作为显微镜的接收器，配以微型电子计算机后构成完 整的图像信息采集和处理系统。
第二节 显微镜原理
Numerical Aperature
Resolution
Rayleigh Criterion
; www.imb-jena.de See more interactive tutorials at
镜的性能
透镜是组成显微镜光学系统的最基本的光学元件，物镜 目镜及聚光镜等部件均由单个和多个透镜组成。依其外形的 不同，可分为凸透镜(正透镜)和凹透镜(负透镜)两大类。
细菌形态学检查
G-菌细胞壁结构疏松，肽聚糖层薄且交联度 低，含大量脂质，乙醇易渗入。
等电点学说
G+菌等电点（pI2~3） G-菌等电点（pI4~5）
在相同pH条件下G+菌所带负电荷比G-菌 多，所以与带正电荷的结晶紫染料结合较 牢固，不易脱色。
化学学说
G+菌菌体内含有大量核糖核酸镁盐，可 与碘、结晶紫等染料牢固结合，使 已着色的细菌不易被乙醇脱色
G-菌 菌体内含核糖核酸镁盐很少，故易 被脱色
三、器材和试剂
1、菌种
葡萄球菌 大肠杆菌
2、试剂 革兰染色液
初染液 结晶紫 媒染液 卢戈氏碘液 脱色液 95%乙醇 复染液 稀释石碳酸复红
3、其它
载玻片 染色盘 接种环 酒精灯等
四、方法与步骤
1、细菌涂片的制备
涂片
干燥
固定
2、染色
1min
1min
初染（结晶紫）
媒染（卢戈氏碘液）
冲洗
冲洗
脱色
30s
（95%乙醇） 冲洗 吸干
复染（稀释石碳酸复红） 30s
冲洗
吸水纸
染色完成之后，在涂片区滴上香柏油使用油镜观察实验结果
五、注意事项
❖ 无菌操作（接种环灭菌和取菌） ❖ 涂片的厚度要适中 ❖ 染色的时间控制，一一半半 ❖ 冲洗的方法，不要对着涂片区冲洗
六、结果
初染
❖ 革兰染色是最常用的一种染色方法，可以将细菌初 步分为革兰染色阳性菌和革兰染色阴性菌，在临床 上具有非常重要的意义
一、目的
1、掌握细菌涂片的制备及革兰染色的方法 2、了解革兰染色的原理和临床意义
二、原理
1、通透性学说 2、等电点学说 3、化学学说
通透性学说
G+菌细胞壁结构致密，肽聚糖层厚且交联 度高，脂质含量少，乙醇不易进入
等电点学说
G+菌等电点（pI2~3） G-菌等电点（pI4~5）
在相同pH条件下G+菌所带负电荷比G-菌 多，所以与带正电荷的结晶紫染料结合较 牢固，不易脱色。
化学学说
G+菌菌体内含有大量核糖核酸镁盐，可 与碘、结晶紫等染料牢固结合，使 已着色的细菌不易被乙醇脱色
G-菌 菌体内含核糖核酸镁盐很少，故易 被脱色
三、器材和试剂
1、菌种
葡萄球菌 大肠杆菌
2、试剂 革兰染色液
初染液 结晶紫 媒染液 卢戈氏碘液 脱色液 95%乙醇 复染液 稀释石碳酸复红
3、其它
载玻片 染色盘 接种环 酒精灯等
四、方法与步骤
1、细菌涂片的制备
涂片
干燥
固定
2、染色
1min
1min
初染（结晶紫）
媒染（卢戈氏碘液）
冲洗
冲洗
脱色
30s
（95%乙醇） 冲洗 吸干
复染（稀释石碳酸复红） 30s
冲洗
吸水纸
染色完成之后，在涂片区滴上香柏油使用油镜观察实验结果
五、注意事项
❖ 无菌操作（接种环灭菌和取菌） ❖ 涂片的厚度要适中 ❖ 染色的时间控制，一一半半 ❖ 冲洗的方法，不要对着涂片区冲洗
六、结果
初染
❖ 革兰染色是最常用的一种染色方法，可以将细菌初 步分为革兰染色阳性菌和革兰染色阴性菌，在临床 上具有非常重要的意义
一、目的
1、掌握细菌涂片的制备及革兰染色的方法 2、了解革兰染色的原理和临床意义
二、原理
1、通透性学说 2、等电点学说 3、化学学说
通透性学说
G+菌细胞壁结构致密，肽聚糖层厚且交联 度高，脂质含量少，乙醇不易进入
细菌形态学检查汇总PPT课件
显微镜在从木箱中取出或装箱时，右手紧握镜 臂，左手稳托镜座，轻轻取出。不要只用一只 手提取，以防显微镜坠落，然后轻轻放在实习 台上或装入木箱内。
显微镜放到实习台上时，先放镜座的一端，再 将镜座全部放稳，切不可使镜座全面同时与台 面接触，这样震动过大，透镜和微调节器的装 置易损坏。
11
显微镜的保护(二)
热固定，将已干燥的 涂片在火焰中迅速通 过3次，以手背皮肤接 触玻片不烫为佳。
17
制备涂片标本→染色
涂片
干燥
固定
水洗、吸干
镜检
染色
18
（二）革兰染色
最经典、最常用的染色方法。 通过革兰染色将所有细菌分为G+菌和
G-菌两大类。
19
1、染色原理
细胞壁通性学说：与肽聚糖结构有关。 化学学说：与细菌细胞质中核糖核酸镁
5
实验工作台应每日清理，若有污染发生应立即 进行消毒；所有设备在使用后均必须及时清理 和处理，以保持无污染状态。
所有污染物－玻璃器皿、动物笼、实验装置等， 必须先经过消毒处理 (如：高压蒸气灭菌或化 学杀菌处理)，再行清洗或重复使用。废弃物 需经适当之废弃物处理流程处置。
6
在接触传染性物质、化学物质和动物后脱掉手 套，切记洗手。
显微镜须经常保持清洁，勿使油污和灰尘附着。 如透镜部分不洁时，用擦镜纸轻擦，如有油污， 先将擦镜纸蘸少许二甲苯拭去。
显微镜用完后，取下标本片，经聚光器降下， 再将物镜转成“八”字形，转动粗调节器使镜 筒下降，以免接物镜与聚光器相碰。
12
三、不染色标本检查
应用：主要用于观察活菌的动力和运动 方式。
8பைடு நூலகம்
显微镜油镜的使用(一)
显微镜放到实习台上时，先放镜座的一端，再 将镜座全部放稳，切不可使镜座全面同时与台 面接触，这样震动过大，透镜和微调节器的装 置易损坏。
11
显微镜的保护(二)
热固定，将已干燥的 涂片在火焰中迅速通 过3次，以手背皮肤接 触玻片不烫为佳。
17
制备涂片标本→染色
涂片
干燥
固定
水洗、吸干
镜检
染色
18
（二）革兰染色
最经典、最常用的染色方法。 通过革兰染色将所有细菌分为G+菌和
G-菌两大类。
19
1、染色原理
细胞壁通性学说：与肽聚糖结构有关。 化学学说：与细菌细胞质中核糖核酸镁
5
实验工作台应每日清理，若有污染发生应立即 进行消毒；所有设备在使用后均必须及时清理 和处理，以保持无污染状态。
所有污染物－玻璃器皿、动物笼、实验装置等， 必须先经过消毒处理 (如：高压蒸气灭菌或化 学杀菌处理)，再行清洗或重复使用。废弃物 需经适当之废弃物处理流程处置。
6
在接触传染性物质、化学物质和动物后脱掉手 套，切记洗手。
显微镜须经常保持清洁，勿使油污和灰尘附着。 如透镜部分不洁时，用擦镜纸轻擦，如有油污， 先将擦镜纸蘸少许二甲苯拭去。
显微镜用完后，取下标本片，经聚光器降下， 再将物镜转成“八”字形，转动粗调节器使镜 筒下降，以免接物镜与聚光器相碰。
12
三、不染色标本检查
应用：主要用于观察活菌的动力和运动 方式。
8பைடு நூலகம்
显微镜油镜的使用(一)
医学微生物学实验二 细菌的形态学检查
• 显微镜的构造图
• 显微镜的使用方法
• 油镜头的辨认
显
微
• 显微镜的维护
镜
的
构
造
• 玻璃折射率：
油
镜
n=1.52
加
香
• 香柏油折射率：
柏
油
n=1.515
的
原
理
细菌标本染色检查法
细菌个体微小，无色半透明，染色后能在显 微镜下识别其各种不同结构，并鉴别细菌。
细菌染色
活 菌染色
死菌染色
正染色
负染色
２. 结果观察:
抗酸阳性菌为红色
抗
抗酸阴性菌为蓝色
酸 染
色
法
（二）抗酸染色法
２. 结果结果报告方式（直接涂片法）
仔细观察300视野(观察时间不少于4min)，未发现抗酸杆菌。
士：可疑。发现抗酸菌 l～2条／300视野。
抗 酸
+：发现抗酸菌 3～9条／100视野。
染 色
++：发现抗酸菌 1～9条／10视野。
普通染色
特殊染色
简单染色法
复杂染色法
芽孢染色法
荚膜染色法 细胞壁染色法
抗酸染色 革兰氏染色
（一）革兰染色法
丹麦细菌学家Gram于
1884年发明的一种鉴别细菌
革 兰
的染色法。
染
色
可将细菌鉴别为革兰氏
法
阳性G+菌和革兰氏阴性G-菌
两大类。
1. 原理
（1）通透性学说
革兰氏阳性菌细胞膜的通透性比阴性菌低，进入细胞的
（3）先低倍镜找好视野，再换高倍镜／油镜观察。
（二）墨汁负染色法
4.结果观察
第5章细菌形态学检查
从细胞质的基础颗粒长出，伸到细胞外面的细长呈波状弯曲的丝状物。 功能：鞭毛运动可鉴定、与致病性有关、具有抗原性（H抗原）
菌发出比鞭毛更更细、短、直、硬和多的丝状蛋白附属 物，与运动无关，菌毛中空，可分为普通菌毛和性菌毛 功能：普通菌毛附黏膜，性菌毛传递遗传物质
荚膜
细菌细胞壁外包绕的一层粘液性物质，厚度≥0.2μm边界 明显者称为荚膜，厚度＜0.2μm者称为微荚膜 功能：荚膜护菌强致病---抗吞噬作用、抗有害物质损伤、 抗干燥作用、黏附作用
医学微生物学实验室规则：
学生进微生物实验室必须穿好工作服，离室需脱下 反折，要经常清洗消毒； 进实验室时随带书包、衣物等与实验无关物品一律 存放指定的储物柜内； 严禁在实验室进食、饮水和抽烟； 手拿培养物后或出实验室前要洗手，必要时用消毒 液泡手； 实验过程中避免一切不良的个人习惯；操作中产生 的垃圾不得随意抛掷，要扔在指定的桶内
（二）细菌涂片标本的制备
1.涂片
④再次灭菌试管口，棉塞略加烧灼放回原处。 ⑤将接种环上之菌涂于载玻片的NS上，制成的菌膜直
径约1cm左右均匀薄层。
⑥接种环用火焰烧灼灭菌放回原处。
注：取菌量不应过多，以免造成菌体重叠。
（二）细菌涂片标本的制备
2.干燥
①室温中自然干燥。
②加速干燥，将标本离火焰半尺高处略烘。
[实验内容]
一、光学显微镜油镜的使用和保护法
二、细菌的革兰染色检查法
三、细菌基本形态和特殊结构的观察
实验一 细菌的形态学检查
[目的要求]
1.掌握显微镜油镜的使用和保护。
2.掌握细菌的基本形态和特殊结构。
3.掌握细菌涂片标本的制备及革兰染色的步骤，
判断革兰染色性及明确其临床意义。
细菌的形态学检查—革兰染色技术(微生物检验课件)
制备涂片标本→染色
涂片
干燥
固定
镜检
水洗、吸干
染色
革兰染色操作步骤
滴水 取菌 涂片 固定 结晶紫（1min）
乙醇脱色 水洗 碘液（1min） 水洗
水洗 复红0.5min 水洗 干燥 镜检
革兰染色操作步骤
革兰染色操作步骤
革兰染色结果
革兰阴性杆菌
革兰阳性链球菌
革兰染色结果
革兰染色结果
影响革兰染色结果的因素
复合物结合牢固，另外，其等电点较低，结合的碱 性染料多而牢固，因而染成紫色。
结晶紫初染
革兰染色操作步骤
碘液媒染 乙醇脱色
复红复染
全部紫色
全部紫色
G- 菌无色 G+ 菌紫色
G- 菌红色 G+ 菌紫色
革兰染色各步骤时细菌的颜色
涂片制备
❖ 涂片： ❖ 干燥： ❖ 固定：通常用火焰加热固
定，将已干燥ห้องสมุดไป่ตู้涂片在火 焰中迅速通过3次，以手 背皮肤接触玻片不烫为佳。
基本技能单项训练
革兰染色技术
•
患者王某，男，63岁，入院后经气管插管手术48h后
出现发热、咳嗽、咯痰，X线检查显示有较新炎症病灶，初
步判断为肺部感染。取病人痰液标本送检验科微生物室检
验。病人痰液呈砖红色似果酱样，粘稠。请问该病人可能
是何种病原菌感染？将如何鉴定？
革兰染色的临床意义
可将细菌分为两大类，是对细菌进行鉴定的 最基本的检验技术，可将细菌分为革兰阳性 菌和革兰阴性菌。
细菌革兰染色原理
通透性机制： G+菌细胞壁结构致密，脂类含量少，乙醇不易
透入，反而可使细胞壁脱水形成一道屏障，阻止 染料从细胞内渗出；G-菌细胞壁较疏松，含脂类 物质多，易被乙醇溶解，使其通透性增大，细胞 内的结晶紫―碘复合物易被溶解渗出易脱色。
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细菌染色
活 菌染色
死菌染色
正染色
负染色
普通染色
特殊染色
染色法
抗酸染色 革兰氏染色
（一）革兰染色法
丹麦细菌学家Gram于
1884年发明的一种鉴别细菌
革 兰
的染色法。
染
色
可将细菌鉴别为革兰氏
法
阳性G+菌和革兰氏阴性G-菌
两大类。
1. 原理
（1）通透性学说
墨 汁
负
取菌并混匀。
染
色
（2）盖盖玻片（覆盖于菌液上，注意先将盖玻片一边接触菌液
法
缓缓斜放下，以免产生气泡）。
（3）先低倍镜找好视野，再换高倍镜／油镜观察。
（二）墨汁负染色法
4.结果观察
墨 汁 负 染 色 法
（二）墨汁负染色法
4. 临床意义
新型隐球菌可引起全身各组织器官炎症，最易侵犯的是中枢
墨 汁
制
作
3. 实验方法
1）涂片
④再次灭菌试管口，棉塞略加烧灼放回原处。
细 菌
⑤将接种环上之菌涂于载玻片的NS上，制成的菌膜直径约1cm左右均匀
涂 片
薄层。
标 本
⑥接种环用火焰烧灼灭菌放回原处。
的
制
作
注：取菌量不应过多，以免造成菌体重叠。
3. 实验方法
２）干燥
细
①室温中自然干燥。
菌
涂
②加速干燥，将标本离火焰半尺高处略烘。
抗 酸
+：发现抗酸菌 3～9条／100视野。
染 色
++：发现抗酸菌 1～9条／10视野。
法
+++：发现抗酸菌 1～9条／每视野。
++++：发现抗酸菌 ≥10条／每视野。
（二）墨汁负染色法
1. 原理
墨
新型隐球菌的荚膜较厚，一般不易着色，同时菌体
汁
负
折光性较强，用墨汁负染色法可在黑色背景下看到透亮
染
色
告 要
求
（二）细菌形态示意图绘图要求
1. 选择形态典型的部分细菌，红兰色笔绘图。
2. 绘细菌的形态、排列，细菌的大小比例应适宜，轮廓上（如球菌、杆
实
菌）应有所区分。
验
报
告
注明
要
菌名：大肠杆菌
求
染色法：
放大倍数：10×100
（二）细菌形态示意图绘图要求
颜色
实
染色性
验
绘细菌的
形态
报 告 要
排列
求
特殊结构
革
及白色念珠菌。
兰
（2）试剂 生理盐水、革兰氏染色液。
染 色
（3）仪器及用具
法 实
接种环、酒精灯、玻片、显微镜、香柏油等。
验
材
料
3. 实验方法
（1）细菌涂片标本的制作 制备涂片包括涂片、干燥、固定三步。
实 验 方 法
涂片
干燥
固定
3. 实验方法
1）涂片
① 接种环置于酒精灯的外焰中烧灼灭菌。
细 菌
涂
片
标
本
的
制
注：不宜离火焰过近，以免造成菌体过热变形。
作
3. 实验方法 （２）革兰染色法
革 兰 染 色 法
3. 实验方法
结晶紫、初染，60秒
革
碘液媒染60秒
兰
染
色
丙酮酒精数滴，脱色约60秒
法
操
作
碱性复红液2～3滴，30秒钟
步
骤
待干，镜检。
注：每一步均需 细流水冲洗。
４. 结果观察 油镜观察结果（1000×）
义
６. 注意事项
（1）脱色过度，可使 G+菌被误染为 G-菌；
革
（2）脱色时间的长短还与涂片厚薄有关，以涂片薄而均匀为好；
兰 染
（3）多种因素如菌龄、染色时间、pH等影响结果。
色 法
注
意
事
项
（二）抗酸染色法
１.原理：
分枝杆菌属的细菌细胞壁
抗
脂质含量较高，特别是其中大
酸 染
量分枝菌酸可影响染料穿入。
神经系统，引起慢性脑膜炎。
负 染
色
墨汁负染色法可鉴别新型隐球菌。
法
细菌特殊染色法：
芽胞染色法
鞭毛染色法
03
01
02
03
04
05
06
07
08
（一）实验报告内容要求
1. 绘图
葡萄球菌、大肠杆菌及白色念珠菌的基本示意图，记录革兰氏染色结果， 实
验
分辨出革兰阳性菌和革兰阴性菌。
报
2. 如果染色结果不理想，请分析原因。
兰 染
荷要多，与带正电荷的碱性染料结合力较牢固，不易脱色。
色 法
原
理
1. 原理
（3）化学学说
革兰氏阳性菌细胞内含有某种特殊化学成份，一般认为
革
是核糖核酸镁盐与多糖的复合物，它能和料染一煤染剂复合
兰 染
物相互结合，使已着色的细菌不易脱色。
色 法
原
理
2.实验材料
（1）菌种 培养18~24h的葡萄球菌、大肠杆菌
革兰氏阳性菌细胞膜的通透性比阴性菌低，进入细胞的
革
染料和碘液结合生成沉淀，脱色剂较易通过革兰氏阴性菌的
兰 染
细胞膜，将碘和染料的复合物溶解洗出，故易脱色；阳性菌
色 法
细胞膜透通性低，故不易脱色。
原
理
1. 原理
（2）等电点学说
革兰阳性菌等电点（PI 2~3）比革兰阴性菌的等电点
革
（PI 4~5）低。在同一PH条件下，阳性菌比阴性菌所带负电
色 法
一旦着色后不易被盐酸酒精脱
色。
（二）抗酸染色法
２.材料:
（1）结核病人的痰液标本
抗 酸
（2）抗酸染色液试剂盒
染 色
（3）试管夹、玻片等。
法
（二）抗酸染色法
２. 方法
（1）涂片制备
挑取痰液在玻片上涂成痰膜
抗
酸
染
色
干燥
法
固定
（二）抗酸染色法
２. 方法
初染：石炭酸复红染液(加染料然后加热至蒸 汽冒出后放至一边继续染色至5min)，水洗。
(２）染色方法
抗
酸
染
脱色：盐酸酒精脱至无色，水洗。
色
法
复染：碱性美兰 （1min)，水洗。
（二）抗酸染色法
２. 结果观察:
抗酸阳性菌为红色
抗
抗酸阴性菌为蓝色
酸 染
色
法
（二）抗酸染色法
２. 结果结果报告方式（直接涂片法）
仔细观察300视野(观察时间不少于4min)，未发现抗酸杆菌。
士：可疑。发现抗酸菌 l～2条／300视野。
的菌体。
法
（二）墨汁负染色法
2. 材料
（1）菌种 新型隐球菌
墨 汁
负
（2）试剂 优质墨汁
染
色
（3）其他 载玻片、盖玻片、镊子
法
（二）墨汁负染色法
2. 材料
（1）菌种 新型隐球菌
墨 汁
负
（2）试剂 优质墨汁
染
色
（3）其他 载玻片、盖玻片、镊子
法
（二）墨汁负染色法
3. 方法
（1）滴一滴墨汁于载玻片,
片
标
本
的
制
作
3. 实验方法
1）涂片
② 取1～2环生理盐水（NS)置于载玻片上，接种环用火焰烧灼灭菌。
细 菌
涂
片
标
本
的
制
作
3. 实验方法
1）涂片
③ 小指和手掌小鱼肌侧拔掉棉塞，并烧灼试管口灭菌。用已灭菌冷却的
细 菌
接种环伸入试管中取适量菌，注意勿使沾有菌液的接种环触及试管壁及
涂 片
试管口。
标 本
的
革 兰 染 色 法 结 果 观 察
放大倍数：10×100
４. 结果观察 白色念珠菌革兰染色（1000×）
革 兰 染 色 法 结 果 观 察
放大倍数：10×100
５.革兰氏染色意义
（1）鉴别细菌
（2）选择抗菌药物
革 兰
（3）研究细菌致病性
染 色
G+菌能产生外毒素， G-菌能产生内毒素，两者的
法
意
致病作用不同。
病原生物学实验 实验二
教学内容
光学显微镜油镜的使用 和保护法
• 显微镜的构造图
• 显微镜的使用方法
• 油镜头的辨认
显
微
• 显微镜的维护
镜
的
构
造
• 玻璃折射率：
油
镜
n=1.52
加
香
• 香柏油折射率：
柏
油
n=1.515
的
原
理
细菌标本染色检查法
细菌个体微小，无色半透明，染色后能在显 微镜下识别其各种不同结构，并鉴别细菌。